Analysis of neural lipids from microalgae by HPLC ...
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Analysis of neural lipids from microalgae by HPLC-ELSD and APCI-MS/MS.F. Donot, G. Cazals, Z. Gunata, D. Egron, J. Maligne, C. Strub, A. Fontana, S. Schorr-Galindo
Francia, 2013
M a e s t r í a e n C i e n c i a s : P r o d u c t o s N a t u r a l e s y A l i m e n t o s
Análisis Químico Cuantitativo
Joseoziel Llaguno Guilberto
Introducción
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Microalgas
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Chlorela Vulgaris B. Braunii
1-70 % de lípidos por gramo DW TAG y HC, 67 % gasolina, 15 % turbosina,
Chlorella Vulgaris, Botryocuccus Braunii… (20 % lípidos g/DW) 15 % diesel 3 % residuos
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Fase reversa Fase normal
Amplia separaciónde lípidos
X separación de cada clase
HPLCELSD MS
Metodología
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Fase orgánica
Extracción soxhlet1 g de biomasa liofilizada
Cloroformo/metanol2:1 v/v
3 ocasiones
ARotavapor
40 ºC13 mbar
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A
1 mL Cloroformo/metanol2:1 v/v
SPE fase normalEPH (extractable petroleum hidrocarbons)
Fase normal
Evaporar extractos Disolver con 1 mL
Acetona
Hexano
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residuo
HPLC-ELSDHPLC-MS-APCI
fase normalAcetona/hexano
Lipidos
HPLC-ELSDCROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN,
DETECTOR DE DISPERSIÓN DE LUZ EVAPORATIVA
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SCL 6BControlador
Shimadzu
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SIL-10ADvpAutoinyector
Shimadzu CTO-10.ACVP
Horno
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LC-6A
2 Bombas Shidmatzu
Flujo: 0.1 to 10.0 ml/min
Presión maxima de operación: 6000 psi (400 bar)
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Columna y precolumnaLuna/ Phenomenex
Diámetro interno (id) 4.6 mmLargo (mm) 250 mmModo fase normal (silica gel)Forma de partícula esféricaTamaño de partícula (dp) 5 µm
Sedex 55, Sedere
Bajas temperaturas
Detector: ELSD
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HPLC-MS-APCICROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN,
ESPECTROMETRÍA DE MASAS MODO DE IONIZACIÓN QUÍMICA A PRESIÓN
ATMOSFÉRICA
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HPLC Alliance 2790 waters
Componentes
Sistema de flujo de disolventes
Sistema integral de lavado de émbolos
Horno de la columna
Calentador de la muestra
Válvula de selección de la columna
Teclado
Display LCD
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Columna/Luna Si Phenomenex
Diámetro interno (id) 4.6 mmLargo (mm) 250 mmModo fase normal (silica gel)Forma de partícula esféricaTamaño de partícula (dp) 5 µm
Detector: Espectrometría de masas
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Filtro de masas de cuadrupolo simpleAnálisis MS m/z 20,000 Celda de collision de hexapolo para análisis MS/MSAnálisis MS/MS selección de ion padre m/z 4000 energía de colisión +/- 205 eV
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Fuente de ionización: APCIatmospheric pressure chemical ionisation
Ionización via a transferencia de protón (ion positivo) o abstracción de protón negativo,La muestra es vaporizada en un nebulizador, posteriormente se lleva a cabo la abstracción o transferencia de protón.
Condiciones
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Gradiente
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FFADAG
TAG
Temperatura columnaHexano 0.1 mL/min8 h
Acondicionamiento
1 mL/min
Flujo
30 ºC
Volumen de inyección
10 µL
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ELSD
Temperatura 70 ºCAire comprimido 2 barGanancia de fotomultiplicador 6
Temperatura de la columna
Hexano 0.1 mL/min8 h
Acondicionamiento
50-2000 Da
Peso molecular
30 ºC
Volumen de inyección
50 µL
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Detector
4000 VCono 20 V
Temperatura muestra 100 ºC Temperatura ionización 400 ºC
50-2000 Da
Peso molecularVolumen de inyección
50 µL
Discusión ESTANDARES
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TAG
FFA
DAG
MAG
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TAG
FFA
DAG MAG
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FFA
DAG
MAG
Discusión MUESTRA HPLC-APCI-MS
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TAG
FFA
DAG
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Conclusiones
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TAG
FFA
DAG
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