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1 Der sogenannte “Frische Effekt” im Ceditest ® CSFV 2.0
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Der sogenannte “Frische Effekt” im Ceditest® CSFV 2.0
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Cedi-Diagnostics B.V. hat seit langem Erfahrung mitdem Entwickeln, Produzieren und Vermarkten vonDiagnostika für klassische Schweinepest (KSPV). DieseErfahrungen sind schon aufgebaut in der Zeit des Instituts ID-Lelystad
“Frische Effekt”Geschichte der Cedi CSFV Testkits
“Frische Effekt”Geschichte der Cedi CSFV Testkits
1988 wurde die erste Generation eingeführt: der Ceditest® CTB ELISA
• Der Test machte Gebrauch von einerPreinkubation in einer Attrappenplatte
• Verfahren mit “nassen” Platten• Reagenzien waren nicht gebrauchsfertig• Nicht einfach auszuführen bei einer großen
Anzahl von Proben
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1997 wurde die zweite Generation eingeführt: der Ceditest® CSFV Ak ELISA
• “Ein Schritt” ELISA (schneller)• Einfach auszuführen bei großer
Probenanzahl• Kann einfach automatisiert werden bei
Gebrauch eines Roboters
“Frische Effekt”Geschichte der Cedi CSFV Testkits
Frische EffektGeschichte der Cedi CSFV Testkits
2003 wurde die dritte Generation eingeführt: Ceditest® CSFV 2.0
Warum?• Spezifisch für CSFV, keine Kreuzreaktionen
mit BVDV oder BD. Sehr wichtig, wennSchweine und Rinder zusammen gehalten werden
• Gebrauch eines monoklonalen Antikörpers, kein “Bridging Effekt”
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“Frische Effekt”Entwicklung
Auswahl eines monoklonalen Antikörpers, gerichtetgegen die A-Domäne des E2, mit einer nur niedrigenHomologie in Bezug auf BVDV und BD.
Direkte Beschichtung mit dem E2-Antigen
“Frische Effekt”Prinzip des Ceditest® CSFV 2.0
ReKombinantE2 Antigen
ProbeWaschschritt
negative Probe
positive Probe
Farbenentwicklung = negative
Inkubation Serumprobe
60 Minuten 37 °C
Farbentwicklung
20 Minuten RT
keine Farbentwicklung = positive
Inkubation Konjugat
30 Minuten 37 °C
Waschschritt
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“Frische Effekt” Validation
Sera für die validation:• 1900 negative Serumproben aus verschiedenen
Ländern einschliesslich BVDV- und BD-Proben ausReferenz-Laboratorien in den Niederlanden, Deutschland, Spanien und England sowie Feldserenvon BVDV-infizierten Schweinen aus den Niederlanden
• 105 Sera von experimentell infizierten Tieren (Sensitivität)
“Frische Effekt”Ergebnisse der validation
Ergebnisse:
Spezifität: 99,9%
Sensitivität:100% (im Vergleich mit dem NPLA als goldenem Standard)
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“Frische Effekt”Ergebnisse der validation
Ergebnisse:
Spezifität: 99,9%
Sensitivität:100% (im Vergleich mit dem NPLA als goldenem Standard)
“Frische Effekt”validation im Feld
Beim Gebrauch von frischem Serum- undPlasmaproben während der validation im Feldwurde manchmal eine Spezifität von 50% ermittelt.
Dieses war abhängig vom Bauernhof, demLand, Alter der Proben, Lagerung der Proben…
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Veterinarian from Mongolia
-200C - - 400C
“Frische Effekt”
Ein Beispiel:
Beim Testen von 176 frischen Seren aus einemSchlachthof in den Niederlanden, wurden 168 positivgetestet (Spezifität 5%)
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“Frische Effekt” Ursache
Was kann den “Frische Effekt” verursachen?
• Ein spezifischer Bestandteil der Probe• Komplement• ????
“Frische Effekt”Komplement
Zur Inaktivierung des Komplements wurden die Proben 30 Minuten bei 56oC erhitzt.
Verbesserung: Die Spezifität wurde erhöht, jedoch noch nicht ausreichend.
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“Frische Effekt”
Zusätzlich:
Verschiedene Zusätze zur Inaktivierung des Komplements wurden getestet und schließlichdrei Probenverdünnungspuffer beim Gebrauchvon frischen Proben getestet.
“Frische Effekt”
96 frische Serumproben aus einemniederländischen Schlachthof wurden getestet:
Puffer A: 81 Sera positiv getestetPuffer B: 74 Sera positiv getestetPuffer C: 0 Sera positiv getestetSchlussfolgerung: beim Gebrauch von Puffer C war der Frische Effekt 0%
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“Frische Effekt”
IstPuffer C der Lösung?
“Frische Effekt”
Außerdem wurden bei Gebrauch des Puffers C die folgenden Seren getestet:
• 440 frische Seren, versammelt bei einemniederländischen Schlachthof
• Experimentell infizierte Tiere (die selbenProben, die bei der ersten Validation getestetwurden)
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“Frische Effekt”
Resultate:
Alle 440 frische Serumproben wurden negativgetestet
Beim Testen der Seren von experimentellinfizierten Tieren war die Sensitivität 100% (im Vergleich mit dem NPLA als goldenemStandard)
“Frische Effekt”
Schlussfolgerungen:
Der Ceditest® CSFV 2.0• Ist sehr spezifisch für CSFV (keine
Kreuzreaktionen mit BVDV/BD)• Nicht beeinflusst durch den “Frische Effekt”.
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“Frische Effekt”
Vielen Dank für IhreAufmerksamkeit
