Gelelektrophorese

Chantale Sevenich, Viviana Mandalà

Übersicht

Grundwissen über Elektrophorese Arten der Elektrophorese Grundwissen Gelelektrophorese Vor- und Nachteile Einsatzbereiche Ablauf einer Gelelektrophorese Auswertung Genvergleich eines Carzinompatienten

Grundwissen zur Elektrophorese

Ist ein analytisches Verfahren, das durch den Einsatz eines elektrischen Feldes, verschiedene Moleküle voneinander trennt.

Elektrophorese bezeichnet die Wanderung geladener Teilchen im elektrischen Feld.

Einzelne Moleküle bewegen sich in dem Feld aufgrund ihrer elektrischen Ladung und Größe unterschiedlich schnell. Folge: Auftrennung der Moleküle

Arten der Elektrophorese

Kapillarelektrophorese Zonenelektrophorese Disk-Elektrophorese Isoelektrisch Gelelektrophorese

Grundwissen Gelelektrophorese

Bei Anlegen einer elektrischen Spannung wandern die leicht negativ geladenen DNA-Moleküle durch das Gel zur Anode. Das Gel funktioniert wie ein Sieb

Kleine Moleküle können schneller durch das Gel laufen, als große und werden dadurch aufgetrennt.

Durch das im Gel eingelagerte Ethidiumbromid wird die DNA im UV-Licht sichtbar

Vor- und Nachteile der Gelelektrophorese

Vorteile: Gel ist leicht gießbar und denaturiert nicht in den Proben

Ist eine wenig zeitaufwendige Technik zur Analyse von PCR-Produkten

Nachteile: Gel kann während Elektrophorese schmelzen, Puffer erschöpft, Genmaterial läuft nicht immer gleich (schnell)

Die Einsatzbereiche

Analyse von Desoxyribonukleinsäure (DNA)

Analyse von Ribonukleinsäure (RNA) Allgemeine Proteinauftrennung Proteinreinigung

Ablauf einer Gelelektrophorese

In einer Duranflasche wird die Agarose eingewogen und mit TBE-Puffer versetzt

In der Mikrowelle wird das Gemisch aufgekocht und die Agarose eingeschmolzen

Lösung abkühlen und Ethidiumbromid zugeben

Die Lösung wird nun in den Gießstand gegossen, indem Kämme eingesetzt sind (=DNA Taschen)

Das Gel polymerisiert aus und wird im Kühlschrank gelagert

Ablauf einer Gelelektrophorese

Die Kammer wird mit Puffer gefüllt

Das Tablett wird mit dem Gel in die Kammer gelegt

DNA mit Leiter und Ladepuffer wird in die Taschen geladen

Kammer verschließen Strom einschalten

Ablauf einer Gelelektrophorese

Bei 160V/400mA läuft das Gel ca. 75mins.

Ende der Elektrophorese, wenn die blaue Front kurz vor dem Ende des Gels ist

Strom abschalten und Gel aus der Kammer nehmen

Die Auswertung

Gelstreifen auf den Transilluminatoren legen (ohne Luftblasen)

UV-Lampe (312nm) einschalten und Gel digital und fotografisch festhalten

Optische Auswertung der Banden

Genvergleich eines Carzinompatienten

Einteilung der Patienten in Kontrollkollektiv und Krebskollektiv anhand der Diagnosen

Blutabnahme und Isolierung der DNA PCR und Gelelektrophorese Genvergleich der Kollektive, wenn Gen

vorhanden, könnte der Krebs in diesem Gen verschlüsselt sein

Andere Zusammensetzung der DNA