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Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland

IMMUNHÄMATOLOGISCHE

FALLBEISPIELE

38.Informationsgespräch der BSZ für Wien, Niederösterreich und Burgenland 22.11.2014

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ÜBERSICHT-FALLBEISPIELE

� Ak gegen polymorphe/ “normalfrequente Antigene”

� Ak gegen High Frequency Antigens (HFA)

� Ak gegen Low Frequency Antigens (LFA)

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Polymorphe / “normalfrequente Antigene”K, C, e, E, M, N, S, s, Jka, Jkb, Fya, Fyb, etc.

� als singuläre Spezifität leicht zu versorgen,

bei mehreren Spezifitäten wird die Versorgung zunehmend schwierig

High Frequency Antigens (HFA)

Frequenz > 90%->99,9% z.B.: Kpb, Lub, Yta, k, Vel, Gya, etc…

� zur Abklärung sind spezielle Kryopanelzellen notwendig

transfusionsmedizinisches Problem

Low Frequency Antigens (LFA)

Frequenz < 1% z.B.: Vw (0,06%), Wra (0,01%)

Mia (0,01%), etc.

Differenzierung nicht unbedingt notwendig, KP ausreichend!,

Vorsicht: Frauen im gebärfähigem Alter! � MHN

Wie einfach ist kompatibles Blut zu finden?

> 99 %

< 1 %

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Fallbeispiel 1 – Ak gegen polymorphe Antigene

� 1932 geb. Patientin, Interne Abteilung , Anämieabklärung

� Vortransfusionen bekannt

� Ak-Screening positiv

� lt. Ak-Differenzierung Ak gegen polymorphes Ag

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Fallbeispiel 1- Ak-Differenzierung-Ak gegen „polymorphe Ag“

BG: A RhD positiv CCD.Ee

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Ak-Differenzierung-Ak gegen „polymorphe Ag“Anti-f

Kreuzprobe

V.a.Anti-f A+, CCD.Ee („ce“ negativ)

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Bestätigung mit 2.Panel

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Fallbeispiel 1 Ak-Differenzierung-Ak gegen polymorphe Ag

Bestätigung mit 2.PanelAnti-f (compound Antigen: ce „in cis“ (selber Haplotyp/ selbes Protein)

BG: A RhD positiv CCD.Ee (“ce” negativ)

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Fallbeispiel 1- Ak-Differenzierung-Ak gegen „polymorphe Ag“Anti-f

Kreuzprobe

ce+ ce-

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Rhesus Haplotyp

Rhesus Phänotyp

D

C

E

c

e

f (ce)

Ce (rhi)

cE

CE

R1/ CDe

CCD.ee

+

+

-

-

+

-

+

-

-

R2/ cDE

ccD.EE

+

-

+

+

-

-

-

+

-

Ro/ cDe

ccD.ee

+

-

-

+

+

+

-

-

-

Rz/ CDE

CCD.EE

+

+

+

-

-

-

-

-

+

r/ cde

ccddee

-

-

-

+

+

+

-

-

-

r‘/ Cde

CCddee

-

+

-

-

+

-

+

-

-

r‘‘/ cdE

ccddEE

-

-

+

+

-

-

-

+

-

ry/ CdE

CCddEE

-

+

+

-

-

-

-

-

+

Rh-Antigene codiert durch häufigste 8 Rh-Haplotypen



f Antigen(RH6) gehört zum Rh- Blutgruppensystem

compound-Ag

Basiert auf einem Rhce Protein

Ag-Frequenz 65%

Enzym Papain, Ficin, Trypsin, Chymotrypsin , DTT resistent

Allo-Anti-f meist IgG,

optimale Technik : IAT, RT, Enzym

klinische Relevanz von Transfusionsreaktion: akute/ verzögerte HTR

Allo-Anti-f intra/extravaskuläre Hämolyse

HDFN: mild



Fallbeispiel 2 – Ak gegen polymorphe Antigene

� Patientin, 1938 geb., BG A negativ, ccddee,

7/2010: 4 EK’s der BG A negativ erhalten, Ak-Screening negativ

� 2/2011: Ak-Differenzierung: Anti-D, -C, -E

� 1 EK war A negativ, CcddEe� Anti-C, -E

� Fragestellung: woher stammt Anti-D????

� keine RhD positiven TK’s erhalten

� alle 4 Spender auch genetisch d/d



D+C+ D+C+ D+E+ C+ E+ D+

Fallbeispiel 2 Anti-D, -C, -E

Anti-C und /oder Anti-G ???



Fallbeispiel 2 - Anti-G (RH 12)

� Das Ag G ist an Zellen nachweisbar, die auch die Ag D und/oder C tragen

� Ak Anti-G hat eine DC-Spezifität �� „breit reaktiver Ak“

� Für Differenzierung wäre eine dce/dce G+ (Crosby Typ) und eine DcE/dce G- Zelle ideal

� nichtverfügbar � rare blood!

� Monospezifisches Humanserum Anti-G zum Nachweis der Crosby-Typen existiert nicht.



G Antigen(RH12) gehört zum Rh- Blutgruppensystem

Anti-G: in Sera von rr(ce/ce) Individuen mit Anti-D (und/od

Anti-C), bei D+G- (rare blood type) mit Anti-C,

bei einigen DIIIb (G-) Individuen mit Anti-D

Ag-Frequenz 84%

Enzym Papain, Ficin, Trypsin, Chymotrypsin , DTT resistent

Allo-Anti-G IgG,

optimale Technik : IAT, Enzym

klinische Relevanz von Transfusionsreaktion: keine / akute/ verzögerte HTR

Allo-Anti-G

HDFN: keine/ starke Hämolyse


Im Serum vorhandene AK

Anti-D

Anti-D

Anti-C

Anti-C

Anti-G

Phänotyp der Zelle für 1.Adsorption

cDeG

cDeG

Vorhandene AK im 1.Eluat Anti-D

Anti-D

Anti-G

Phänotyp der Zelle für 2.Adsorption

CdeG

CdeG

Vorhandener AK im 2.Eluat Anti-G

keiner



D+C+ D+C+ D+E+ C+ E+ D+

Fallbeispiel 2 Ak-Differenzierung: Anti-D, -C, -E

Anti-C und/oder Anti-G ???



D+C+ D+C+ D+E+ C+ E+ D+

1.Adsorption an ccD.ee-Zelle: Anti-C, -E



1.Elution nach Adsorption an ccD.ee-Zelle: Anti-D, -G??

C+D+E+D+C+D+C+ D+



2.Adsorption des 1.Eluats an Ccddee-Zelle: negativ� kein Anti-D



2.Elution nach Adsorption des 1.Eluats an Ccddee-Zelle: Anti-G (DC)

D+C+ D+C+ D+ C+ D+

endgültiger Befund: Anti-G, Anti-C, Anti-E�� Ausschluss Anti-D



Fallbeispiel 2 - Anti-G (RH 12)

in welchen Fällen ist eine Abklärung sinnvoll?

Ak-Differenzierung : Anti-D, -C und/oder Anti-G im Normalfall nicht notwendig

� Transfusionsempfehlung: RhD negativ, C- (kein Versorgungsproblem)

Besondere Fragestellungen wo eine Differenzierung Sinn macht:

� RhD negative Patienten, vortransfundiert, welche ein Anti-D, -C bilden

kein RhD positives Ery bzw.Thrombo erhalten

� Schwangerschaft:

- RhD negative Frau, Kind Ccddee � „scheinbares “Anti-D, -C wird

Anti-G und Anti-C sein� Rhesusprophylaxe notwendig

- unklare Fragestellungen bzgl. Vaterschaft, z.B. Kindesvater ist ccD.Ee,

Mutter „scheinbares“ Anti-D, -C, könnte Anti-G, -D sein



Fallbeispiel 3 Ak gegen HFA

� 1954 geb. Patientin, MS, St.p.TVT, Marcoumar

� 5 Graviditäten, 5 Geburten

� Uterusextirpation 1990 � 32 EK’s erhalten

� geplante Cholezystektomie

� Alle Panelzellen reagieren mit Serum der Patientin positiv bei negativer E-Ko

� V.a. Ak gegen HFA� OP verschoben



Ak-Differenzierung-Ak gegen hochfrequentes Ag



Weitere Vorgehensweise bei V.a. Ak gegen HFA

� Anamnestischer Hintergrund (z.B. Diagnose, Vortransfusionen, Klinik, Medikamente)

� Ethnischer Hintergrund (Herkunft)

� Ak-Differenzierung beginnt mit der Serumgegenprobe

� Einsatz unterschiedlicher Reaktionsmilieus und Methoden i.d. Ak-Differenzierung

z.B.: RT, IAT, Röhrchen bzw. Gelkarte, Enzyme

� DAT, Elution auch bei negativem DAT

bei V.a. wärmereaktive Auto-Ak bzw. arzneimittelinduzierte-Ak

� Titerverlauf (HTLA-Ak)

� Einsatz von Adsorption-Elutionsmethoden (Ak-Kombinationen)

� Antigenprofil (Multiplex-SSP)



Ausschluss von Anti-Lub, -Kpb, -Vel, -Coa, -Yta, -k


Einsatz von EnzymAk gegen hochfrequente Ag

Ak-Kombinationen

Serum reagierte mit weiteren Kryopanelzellen

ebenfalls positiv

Ak-Differenzierung: Anti-CD99



CD99 Antigen(XG2) gehört seit 2000 zum Xg Blutgruppensystem

Ag-Frequenz hochfrequent, derzeit 6 CD99 negative Probanden

beschrieben

Enzym Papain, Ficin, Trypsin, Chymotrypsin sensitiv

DTT resistent

Allo-Anti-CD99 IgG, optimale Technik IAT

klinische Relevanz von keine Daten wegen Seltenheit des Ak

Allo-Anti-CD99

Phänotypische Expression Zusammenhang zwischen Xga und CD99



Xga-Ag Frequenz: 66%

Xga-Ag Frequenz: 89%



Sex DoB Sample ID ABO CD99-phenotype Anti-CD99

1 F 23.05.1954 P141979 B - yes

2 F 16.11.1950 P142537 B - yes

3 M 4.4.1979 P142406 B eluable

4 F 2.5.1971 A004014058678 O +++

5 M 20.11.1975 A004014058686 B eluable

6 F 28.11.1981 A004014058677 O +++

7 M 14.11.1983 A004014052866N O eluable

1 Mutter

2 Schwester von Mutter

3-7 Kinder



1 2

3 4 5 6 7

very

weak

Family tree of the CD99 negative Austrian patients

very

weak

I

II very

weak

CD99-Phenotype



Fallbeispiel 4 - Anti-LFA

� Schwangere Patientin , geb.1982, Frühgeburt, Ak-Screening negativ

� Neugeborenes 900g, dystroph

� DAT Neugeborenes IgG 3+


Anti-Wra (Frequenz: 0,01%)

Fallbeispiel 4 Ak-Differenzierung Mutter – Ak gegen LFA

P110167 P110167



Fallbeispiel 4 – Ak gegen LFA Fortsetzung

� Ak-Screening negativ

� Ak-Differenzierung: Anti-Wra (“zufällig “Wra positive Zelle in Panel vorhanden)

� HDN-Risiko („mild to severe“)

� DAT Neugeborenes IgG 3/ Säureeluat � Anti-Wra

� Neugeborenes genetisch heterozygot Wra/Wrb (Wahrscheinlichkeit 50%)

� Kindesvater genetisch heterozygot Wra/Wrb

� Genetische Bestimmung sinnvoll� Antiserum Anti-Wra nicht immer verfügbar



Low Frequency Antigens (LFA)

Frequenz < 1% z.B.: Vw (0,06%), Wra (0,01%), Dia (0,01%)

Mia (0,01%), etc.

Differenzierung nicht unbedingt notwendig, KP ausreichend!

Vorsicht: Frauen im gebärfähigem Alter! � HDFN



� www.blut.at

� www.roteskreuz.at

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Österreichisches Rotes KreuzBlutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland

DANKE FÜR DIE AUFMERKSAMKEIT

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