Nachweis von E. coli / Coliformen

Auswertung der Untersuchungen im Rahmen des Praktikums

WasserhygieneSS 2007

Katharine MoritzUlrike Frömmel

Einleitung

E.Coli REM E.Coli Gramfärbung

Coliforme Bakterien• Familie: Enterobacteriaceae• Gattungen: Escherichia coli

Enterobacter amnigenusEnterobacter cloacaeKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaCitrobacter freudii

• gramnegativ• nicht sporenbildend• Cytochromoxidase- negativ• stäbchenförmig• Lactosevergärung zu Säure und Gas (48 h, 37 °C)• Glucosefermentation

Coliforme Bakterien

• Vorkommen in der Umwelt und der Darmflora von Warmblütern

• Nutzung als Indikatorbakterien zur hygienisch-bakteriologischen Überwachung des Trinkwassers

• Hinweis auf mögliche Verunreinigung, oder ungenügende Desinfektion des Wassers

Durchführung

Nachweis von Coliformen

• Bestimmung des Coli-Titers kleinste Wassermenge in mL, in der noch Bakterien in Kultur

nachgewiesen werden können

• MPN- Verfahren höchstwahrscheinliche Keimzahl je 1 ml Probe

• Anlegen von Subkulturen zur Bestätigung der nach der Anreicherung positiv beurteilten

Kulturen Beimpfung von ENDO-Agar und Tergitol-7-Agar

• Biochemische Identifizierung „Bunte Reihe“: Oxidase, Citratverwertung, Glc- und Lac- verwertung, Indolbildung, Harnstoffverwertung, Methylrot, Voges-Proskauer, Kliegler-Agar

Untersuchte Wasserproben

Bezeichnung Probe Erwartete Belastung mit E. coli/ Coliformen

TW Trinkwasser 0 in 100 ml

EL Elbe an der Fährstelle Kötitz gering

QW Quellwasser gering

BrW Brunnenwasser gering

PKA-ZL Zulauf Pflanzenkläranlage hoch

PKA-AL Ablauf Pflanzenkläranlage gering

KA-ZL Zulauf Kläranlage hoch

KA-AL Ablauf Kläranlage gering

BW Badeteich gering

TS Talsperre Malter; Badebereich gering

Ergebnisse

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren I

Wasserprobe BrW BaW TS AL-KA

Verdünnung

0ri 10 ml

0ri 1 ml

0.1 0.010ri 10

ml0ri 1 ml

0.1 0.01 ori 0.1 0.01 0.001 0.01 0.0010.000

10.000

01

MUG-Bouillon (+ = trüb)

++ ++  ++  ++  ++  + -  --  --  ++  --  --  --  ++  ++  --  -- 

ENDO-Agar (+ = E.coli)       ++                   --  --    

Tergitol-7-Agar (+ = E.coli)       --  ++  --      --         -- --     

nachgewiesene MO

    

 E. coli Klebsiella (?)Citrobacter freundii 

    

    

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren II

Wasserprobe ZL-KA AL-PKA ZL-PKA       EL      

Verdünnung

0.001

0.0001

0.00001

0.000001

0.0000001

0.010.00

10.0001

0.00001

0.001

0.0001

0.00001

0.000001

0.0000001

0.010.00

10.0001

0.00001

MUG-Bouillon (+ = trüb)

 ++ ++  ++  +-  --   ++ ++  + -  --  ++  ++  ++ ++  --  ++  ++  ++  ++ 

ENDO-Agar (+ = E.coli)

 ++ ++  ++ --     ++ ++  --  --   -  -  - -  -  -   -  - - 

Tergitol-7-Agar (+ = E.coli)

 ++  ++  ++ --  + + + - -- -- --     ++  ++ 

nachgewiesene MO

  

Coliforme  

    

     

  

 E. coli  Klebsiella

Coli-Titer

Wasserprobe Coli-Titer

Brunnenwasser 0,01

Badewasser 10

Talsperre 10

AL-Kläranlage 0,001

ZL-Kläranlage 0,000001

Al-Pflanzenkläranlage 0,0001

ZL-Pflanzenkläranlage 0,000001

Elbewasser < 0,00001

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren (Wasserproben)

  BrW BaW TS AL-KA ZL-KA AL-PKA ZL-PKA EL

MPN 70 0,62 0 2400 240000 6200 210000 70000

LL   0,1   500 50000 1000 61000  

UP   3,8   11000110000

0 38000 730000  

0,1

10000

1000000000

BrW BaW TS AL-KA ZL-KA AL-PKA

ZL-PKA

EL

Quantifizierung von E. coli nach dem MPN-Verfahren

• Elbewasser• Mikrotiterplatte• Messung der

Fluoreszenz• MPN = 6.3• LL = 3.1• UL = 13

Verdünnungsstufe

Platz 0.1 0.01 0.001

1 0 0 0

2 1 0 0

3 0 0 0

4 1 0 0

5 1 1 0

6 2 0 0

7 1 0 0

8 0 0 0

9 0 0 0

11 0 0 0

12 0 0 0

13 1 0 0

14 0 0 0

15 0 0 0

16 0 0 0

Membranfilterverfahren (NKS)

Tergitol-7-NKS

00,5

11,5

22,5

33,5

44,5

55,5

66,5

77,5

88,5

99,510

10,511

11,512

BW TW

Wasserproben

BW

: K

olo

nie

/ 1

ml

TW

: K

olo

nie

/ 1

00

ml

e.coli coliforme

Auf ENDO-NKS kein Nachweis von E. coli /Coliformen

Vielen Dank für die Aufmerksamkeit!