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Anna Typplt Hewlett-Packard 22.11.2013 PRÄPARATION EINER MAUS

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Anna Typplt

Hewlett-Packard

22.11.2013

PRÄPARATION EINER MAUS

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Präparation einer Maus

In diesem Portfolio möchte ich das Sezieren einer Maus und die jeweiligen Schritte wiedergeben.

Dieses Projekt fand in Zusammenarbeit mit der PMU im Wahlpflichtfach Biologie statt.

Erste Informationen und Beobachtungen

Zuerst kommt die Maus in ein Wachsbecken, wo diese aber zunächst auf

ihre äußeren Merkmale untersucht wird. Erkennbar durch den leicht

geöffneten Mund sind die für Nagetiere typischen Nagezähne, jeweils zwei

oben und unten. Ebenso besitzt die Maus vier Beine, die Vorderbeine mit

vier Zehen, die Hinterbeine mit fünf Zehen ausgestattet. Schwerer gestaltet

sich die Bestimmung nach dem Geschlecht, letztendlich männlich, da die

Hoden nicht sehr ausgeprägt sind. Der Schwanz der Maus ist nicht behaart,

nur feine Härchen sind zu erkennen.

Erste Schritte …

Mit Hilfe von Nadeln wird die Maus, mit der Bauchseite nach oben, bei den

Pfoten im Wachsbecken fixiert. Das Fell kann nun mit einer Pinzette

hochgezogen werden und der erste kleine Schnitt erfolgt. So kann man

dann mit einer groben Schere das Fell weiter in mehrere Richtungen

aufschneiden und mit kleineren Nadeln auf- beziehungsweise

wegspannen. Wichtig dabei ist, die Bauchdecke nicht zu verletzen.

Schritt 2

Als nächstes wird das Muskelgewebe (Bauchdecke) mit einer Pinzette

hochgehoben. Wie beim Lösen des Fells wird ein kleiner Schnitt mit der

groben Schere gemacht, um das Gewebe dann bis zum Brustbein

aufzuschneiden und weiter aufzulösen. So ermöglicht man sich schließlich

einen Einblick in das Innere der Maus und folgendes kann gesehen

werden: (siehe Seite 2)

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Weitere Erkenntnisse:

Die Leber setzt sich aus

mehreren Leberlappen

zusammen.

Nagetiere nehmen den Kot

des Blinddarms wieder zu

sich auf, da dieser wichtige,

eigens produzierte Vitamine

für die Verdauung enthält.

Die Bläschendrüsen

produzieren beim Sperma die

Flüssigkeit.

Die Maus besitzt keine

Gallenblase.

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Schritt 3

Wenn alles gesehen ist, kann man einzelne Organe herauspräparieren, wie zum Beispiel Nieren und

Milz, um diese dann mit einem Mikroskop genauer zu begutachten. Will man die Organe nicht über

einen längeren Zeitraum aufbewahren, werden sie in Kochsalzlösung gegeben. Ansonsten empfiehlt

es sich, diese in einer sogenannten Fixanslösung aufzubewahren.

Auch der Darm wird entnommen. Dieser weist eine Länge von ca. 60 cm auf.

Nun wird alles aus dem gesamten Bauchraum heraus- beziehungsweise

weggeschnitten, damit der Brustkorb freigelegt werden kann.

Sind alle Organe entfernt, ist die Hohlvene noch einmal gut erkennbar.

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Schritt 4

Ebenso wie das Aufschneiden der Bauchdecke, erfolgt das

Freipräparieren des Brustkorbs. Somit wird ein Blick auf die

Lunge und das Herz möglich. Der Thymus bildet den helleren

Teil beim Herzen und liegt wie ein Schmetterling direkt über

diesem.

Schließlich werden auch diese Teile der Maus entfernt.

Schritt 5

Die Maus wird umgedreht und mit dem Rücken nach oben im

Wachsbecken erneut fixiert. Wieder wird das Fell mit der

Pinzette hochgehoben, es erfolgt ein kleiner Schnitt und das

Fell wird bis zum Kopf weiter aufgeschnitten. Somit kann das

Gehirn betrachtet werden.

Das Fell wird weiter bis zur Nase aufgeschnitten und

weggespannt, um so das Gehirn komplett freizulegen.

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Teil 2 des Projekts

Nach der Mäusepräparation folgte eine Exkursion zur PMU. Dort wurden weitere Schritte, die Teil

der Herstellung eines histologischen Präparates sind, getätigt. Die entnommenen Organe, die wie

zuvor schon erwähnt (S.3) in eine Lösung zum Fixieren, häufig Formaldehyd, gegeben wurden,

kommen in eine Alkoholreihe mit aufsteigender Konzentration, um sie zu entwässern.

Schritt 1 an der PMU: „Basteln“

Bevor es richtig losgeht, werden noch sogenannte

„Särge“ für die Organe aus Papier gebastelt. Diese

könnte man auch kaufen, jedoch erspart das selber

Bauen Geld und ist außerdem einfacher als es

aussieht.

Schritt 2: Einbetten

In diesen Särgen werden die Organe schließlich in

Paraffin eingebettet. Das geschieht mit Hilfe der

rechts abgebildeten Maschine. Zuerst wird der

Boden der Papiersärge mit einer dünnen

Wachsschicht bedeckt. Darauf platziert man mit

einer Pinzette das Organ. Dies muss allerdings

rasch geschehen, da das Paraffin bereits erstarrt.

Anschließend folgt wieder eine Wachssicht, bis das

Organ vollständig eingebettet ist. Dabei sollte man

nicht vergessen, die Särge vorher zu beschriften,

da die Organe im Wachs nur noch schwer

erkennbar sind.

Danach wird das ganze in den danebenliegenden

Kühlbereich gegeben, da das Kühlen später für eine

bessere Schneidbarkeit sorgt.

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Schritt 3: Aufblocken

Sobald die Särge fertig gekühlt sind, kann mit dem Aufblocken begonnen werden. Hierbei werden die

Paraffinblöcke auf Kassetten, die man im Mikrotom einspannen kann, übertragen. Zuerst wird das

Papier entfernt und der Block auf eine Kassette gelegt, die ebenso beschriftet werden sollte. Dann

wird mit einer angewärmten Spachtel das überschüssige Wachs an den Rändern, welches nun zur

Befestigung dient, geschmolzen und verstrichen.

Schritt 4: Aufschneiden und Aufziehen

Die fertigen Kassetten kann man nun in das Mikrotom

(Bild rechts), eine Maschine mit der die Blöcke

letztendlich hauchdünn geschnitten werden,

eingespannt.

Das Schneiden verlangt höchste Konzentration und

Fingerspitzengefühl, da die Schnitte leicht reißen.

Mit einem Pinsel können diese schließlich vorsichtig

vom Mikrotom abgestreift und auf einem Objektträger

platziert werden.

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Auf den Objektträger muss jedoch zuvor Wasser gegeben werden, sodass der Schnitt auf der

Oberfläche aufschwimmt. So liegt der Schnitt gut auf und das Wasser kann abgesaugt werden.

Danach kommt der Objektträger auf eine Wärmeplatte, damit der aufgezogene Schnitt antrocknen

kann.

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Teil 3 des Projekts: die Färbung

Wenn die Schnitte auf dem Objektträger angetrocknet sind, wird das noch übrige Paraffin mit Xylol

entfernt. Darauf folgt eine absteigende Alkoholreihe, die er Wässerung dient.

Schritt 1 der Färbung

Zuerst wird mit einer Pipette Hämatoxylin, ein blauer Farbstoff, auf das Präparat getropft. Diesen

Farbstoff lässt man etwa 30 Sekunden einwirken, dann wird das Präparat in 1- 3% Essigsäure

gegeben. Falls die Färbung zu stark ist, kann der Schnitt mit einer Lösung die 70%igen Alkohol mit 1%

HCl- Säure enthält, entfärbt werden. Danach wird die Färbung zum „Spülen“ für etwa 15 Minuten

unter fließendes Leitungswasser gestellt.

Die gleichen Vorgänge erfolgen mit dem rosa Farbstoff Eosin. Der einzige Unterschied dabei ist, dass

das „Spülen“ hier nicht unter Leitungswasser erfolgt, sondern lediglich in Essigsäure.

Schritt 2 der Färbung

Nun müssen die Präparate wieder entwässert werden. Dies geschieht mit einer aufsteigenden

Alkoholreihe, dessen Konzentration 70%, 90%, und zweimal 100% beträgt. In jeder dieser

Konzentration bleibt das Präparat für 45 Sekunden, worauf schließlich das Eindeckeln in Rotihistokitt

folgt.

Damit sind die Schritte zu einem Dauerpräparat endgültig abgedeckt

und das Ergebnis kann sich sehen lassen:

Was nun rosa erscheint ist Bindegewebe, Zellkerne sind durch ihre blaue Färbung erkennbar

Zellstrukturen der Milz

Zellstrukturen der Niere