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High Performance IP™

semi-automatische Verarbeitung mit PureSpeed

Schnellste ImmunpräzipitationHöchste Proteinkonzentration

Herausragende Datenqualität

Direkte und indirekte IP

Verarbeitung von bis zu 12 Proben gleichzeitig

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IP-Versuche sollten eindeutige, reproduzierbare Signale liefern, damit sich Forscher auf ihre Ergebnisse verlassen können und die Notwendigkeit einer Wiederholung von Versuchen minimiert wird. Das PureSpeed IP™ System von Rainin ist eine bahnbrechende Technologie, die es Forschern ermöglicht, ihre Versuche präzise zu steuern und ihre Ergebnisse zu optimieren.

• Das PureSpeed IP System von Rainin erzeugt auf SDS-PAGE-Gelen Proteinbanden mit höherer Intensität und Reproduzierbarkeit.

• Der Auswaschschritt von PureSpeed für ProA und ProG Spitzen löst kontaminierte Proteine aus gebundenen Antikörper-Antigen-Komplexen und produziert somit SDS-PAGE-Daten mit sehr geringem Hintergrund – eine wesentliche Voraussetzung für präzise Schlussfolgerungen.

• PureSpeed IP produziert ein höher konzentriertes Protein, das ein stärkeres Signal als das von Wettbewerbstechniken liefert und die Notwendigkeit einer Wiederholung von Versuchen minimiert.

Die IP-Technologie von PureSpeed liefert höher konzentriertes Protein in weniger Zeit und zu geringeren Kosten als Magnet- oder Agarose-basierte Methoden.

• Unterstützt direkte und indirekte IP-Protokolle •Verarbeitetbiszu12 Probengleichzeitiginwenigerals30 Minuten•SchnellereVerarbeitungalsmitderMagneticBead-oderAgarose-Bead-Methode•BietetimVergleichzurAgarose-undMagneticBead-Technikeinehoheprobenüberproben-

übergreifende Reproduzierbarkeit und einen vernachlässigbar geringen Hintergrund• Erfasst und dokumentiert automatisch IP-Protokolle und erhöht somit die laborinterne und

laborübergreifende Reproduzierbarkeit

Schnelle ImmunpräzipitationHochwertiges, höher konzentriertes Protein

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Das PureSpeed System von Rainin für die Immunpräzipitation bietet eine unübertroffene Leistung. Sowohl die Agarose als auch die Magnetic Bead-Methode können in der Regel jeweils nur eine Probe auf einmal verarbeiten, während PureSpeed bis zu 12 Proben gleichzeitig und in weniger als 30 Minuten verarbeitet.

Der Vorteil von PureSpeed

PureSpeedimVergleichzurAgarose-undMagneticBead-Methode–Verarbeitungvon12Proben

252 oder 116 min

Agarose-BeadsMagneticBeads

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

26 min

vsPureSpeed

Zum Preis eines manuellen Systems präzipitiert PureSpeedProteinemitGeschwindigkeiten, die mit denen von automatischen Systemen ver-gleichbar sind.

Parallele Probenvorbereitung Sequenzielle Probenvorbereitung

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tzen MaximaleFlexibilität

Für die direkte und indirekte IP validiert

Die meisten IP-Produkte auf dem Markt sind entweder für die direkte oder für die indirekte IP validiert. PureSpeed IP jedoch eignet sich für beide Methoden und bietet Forschern somit ein Höchstmass an Flexibilität. Die direkte Methode beinhaltet die Bindung eines spezifischen Antikörpers an ein immobilisierendes Harz, das in der PureSpeed Spitze enthalten ist, und die Aufnahme des gewünschten Antigens durch das Harz. Bei der indirekten Methode wird der Antikörper-Antigen-Komplex an das Harz in der Spitze gebunden.

Mit PureSpeed IP dauert die direkte IP für 1-12 Proben ca. 50 Minuten, während die indirekte IP für 1-12 Proben in der Regel weniger als 30 Minuten erfordert.

A Direkte IP1 2 3

4 5 6

B Indirekte IP1 2 3

4 5 6

Abbildung1:DirekteundindirekteIP.

Bei der direkten IP wird ein Antikörper einem Antikörper-bin-dendem Harz ausgesetzt (1). Der Antikörper bindet sich und der überschüssige Antikörper wird ausgewaschen (2). Nach der Immobilisierung des Antikörpers wird eine Proteinlösung, die ein Antigen-Protein enthält, dem Harz ausgesetzt (3). Der immobilisierte Antikörper bindet sich an das Antigen-Protein, sodass dieses auf dem Harz immobilisiert wird (4). Nach dem Auswaschen zum Entfernen der nicht spezifisch gebundenen Proteine ist der Antigen-Antikörper-Komplex die vorherrschende Spezies auf dem Harz (5). Abschliessend wird der Antikörper-Antigen-Komplex vom Harz eluiert (6).

Bei der indirekten IP wird eine Proteinlösung vorbereitet, die das Antigen-Protein enthält (1). Der Antikörper wird dieser Pro-be hinzugefügt und bindet sich an das Antigen (2). Danach wird der Antigen-Antikörper-Komplex, der die Proteinmischung enthält, auf das Antikörper-bindende Harz (3) angewendet. Der Antikörper-Antigen-Komplex bindet sich an das Harz sowie an nicht spezifische Proteine (4). Nach dem Auswaschen des Harzes ist der Antikörper-Antigen-Komplex die vorherrschende Spezies auf dem Harz (5). Abschliessend wird der Antigen-Antikörper-Komplex vom Harz eluiert (6).

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WahlderBetriebsartNach der Installation erscheint PureSpeed als Standardbetriebsart im Optionsmenü der E4 XLS.

AnpassungdesProtokollsOb Probenvolumen, Durchflussrate oder Zyklenzahl – jeder Schritt im Protokoll zur Proteinreinigung ist leicht zugänglich und für spezifi-sche Anwendungen optimierbar.

AusführungdesProtokollsDer PureSpeed Modus nutzt alle Vorteile der intuitiven Joystick-Steuerung und der karussellartigen Menüstruktur der E4. Über die Funktionstasten der E4 können Bediener durch die einzelnen Protokollschritte navigieren.

Reproduzierbare IP-Ergebnisse sind ein wichtiger Aspekt für die Validierung von Hypothesen und Publikationen. Wenn Forscher im selben oder anderen Laboren unterschiedliche Ergebnisse erhalten, entstehen oft zusätzlicher Zeitaufwand und Kosten, um das Ergebnis eines Versuchs zu bestimmen.

Die elektronische E4 XLS Pipette von Rainin ist ein Bestandteil des PureSpeed IP Systems. Zusätzlich zur Ausführung der meisten Schritte des IP-Protokolls erfasst die E4 XLS Aufnahme-, Auswasch- und Elutionsvolumen sowie Pipettiergeschwindigkeiten, Aliquots und Anzahlen von Pipettierzyklen. Indem alle Aspekte des Versuchs dokumentiert und erfasst werden, lassen sich die exakten Bedingungen für einen erfolgreichen IP-Versuch einfach und präzise weitergeben.

DieelektronischePipetteE4XLSFührt jedes Schrittprotokoll aus und erfasst es

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PureSpeedIP–schnellereErgebnissemithöherkonzentriertemProteinalsdieMagneticBead-oderAgarose-Bead-Technik

Für diesen Versuch wurden 5 μg GST-getaggtes Antigen-Protein mit 200 μl einer Probe mit insgesamt 625 μg/ml E. coli-Protein versetzt. 10 μg monoklonaler α-GST-Antikörper wurden verwendet, um das GST-getaggte Antigen-Protein mithilfe der direkten und indirekten Methode zu immunpräzipitieren. Für die direkte Methode wurde die IP mithilfe des PureSpeed IP Systems mit 20 μl ProG Spitzen durchgeführt und mit Protein G Magnetic Beads eines anderen Herstellers verglichen. Für die indirekte Methode wurde die IP mithilfe des PureSpeed Systems mit 20 μl ProG Spitzen durchgeführt und mit Protein G Agarose-Beads eines anderen Herstellers verglichen.

Versuchsproben, die sowohl das Antikörper- als auch das Antigen-Protein enthielten, wurden dreifach verarbeitet, um die Reproduzierbarkeit jeder Technik zu analysieren. Kontrollreaktionen ohne den Antikörper, das Antigen oder beide Spezies wurden zur Kontrolle gegen die nicht proteinspezifische Bindung an die Protein G-Harze durchgeführt.Im Vergleich zu anderen Techniken zeigen die Ergebnisse, dass PureSpeed ProG Spitzen eine schnellere erfolgreiche Durchführung von IP-Versuchen gestatten und sowohl mit der direkten als auch mit der indirekten Methode höher konzentrierte Proteine produzieren.

PureSpeed im Vergleich zu anderenIP-TechnikenSchnellere Produktion von höher konzentriertem Protein

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97kDa

66kDa

45kDa

31kDa

LSP50minfür6ProbenSM 69 min für 6 Proben

Abbildung2:DirekteIPmitPureSpeedProGSpitzenundProteinGMagneticBeadseinesWettbewerbers.Bei diesem Versuch wur-den 10 μg Antikörper zur Immunpräzipitation von 5 μg GST-getaggtem Antigen anhand der direkten Methode mit PureSpeed ProG Spitzen oder Protein G Magnetic Beads eines Mitbewerbers verwendet. Die IP-Reaktionen fanden im Kontext von 125 μg E. coli-Protein statt (das Gesamtvolumen betrug 200 μl). Die Proteinleiter ist mit einem L gekennzeichnet, während die Proteinlösungen (die das Antigen für die direkte Methode enthalten) mit SP und SM gekennzeichnet sind (das tiefgestellte P und M geben die Proteinlösung für das PureSpeed bzw. das Magnetic Beads-Protokoll an). Die Probeneluate für PureSpeed und die Magnetic Beads-IP befinden sich in den Bahnen 3-8 bzw. 10-15. Plus- und Minuszeichen geben an, ob eine bestimmte Komponente in einer bestimmen IP-Reaktion enthalten bzw. nicht enthalten war. Die Zeitspanne unten am Gel gibt die benötigte Zeit für jedes Protokoll an.

α-GST-Antikörper

GST-getaggtes Antigen

E. coli-Protein

- - + + + + - - + + + + - + - + + + - + - + + + + + + + + + + + + + + +

PureSpeed MagneticBeads

AbschwereKette

Antigen-Protein

AbleichteKette

97kDa

66kDa

45kDa

31kDa

LSP30minfür6ProbenSA190minfür6Proben

Abbildung3:IndirekteIPmitPureSpeedProteinGSpitzenundlosenProteinGAgarose-Beads.Hier wurden 10 μg Antikörper zur Immunpräzipitation von 5 μg GST-getaggtem Antigen anhand der indirekten Methode mit PureSpeed Protein G Spitzen oder losen Protein G Agarose-Beads verwendet. Die IP-Reaktionen fanden im Kontext von 125 μg E. coli-Protein statt (das Gesamtvolumen betrug 200 μl). Die Proteinleiter ist mit einem L gekennzeichnet, während die Proteinlösungen (die das Antigen für die direkte Methode enthalten) mit SP und SA gekennzeichnet sind (das tiefgestellte P und A geben die Proteinlösung an, die für die PureSpeed bzw. die Protein G Agarose-Proben verwendet wurde). Die Probeneluate für PureSpeed und die Protein G Agarose-IP befinden sich in den Bahnen 3-8 bzw. 10-15. Plus- und Minuszeichen geben an, ob eine bestimmte Komponente in einer bestimmen IP-Reaktion enthalten bzw. nicht enthalten war. Die Zeitspanne unten am Gel gibt die benötigte Zeit für jedes Protokoll an. *Die Zeit für die indirekte IP beinhaltet nicht die Inkubation der IP-Proben über Nacht bei 4 °C. Diese Inkubation ist in Abbildung 1B als Schritt 2 dargestellt.

α-GST-Antikörper

GST-getaggtes Antigen

E. coli-Protein

- - + + + + - - + + + +- + - + + + - + - + + ++ + + + + + + + + + + +

PureSpeed LoseAgarose-Beads

AbschwereKette

Antigen-Protein

AbleichteKette

Für weitere Informationenwww.mt.com/rainin

Mettler-ToledoRainin,LLC Technische Änderungen vorbehalten© 04/2016 Mettler-Toledo Rainin, LLCGedruckt in der Schweiz 17700745 Rev B

MARKEN VON RAININ: Rainin, Pipetting 360°, LTS, E4, XLS, PureSpeed und High Performance IP sind Handelsmarken von Mettler-Toledo Rainin, LLC und Mettler-Toledo, Inc.

Quality Certificate ISO 9001Environment Certificate ISO 14001

PureSpeed for IPHochleistungs-Immunpräzipitation

Das PureSpeed IP System umfasst PureSpeed ProA oder ProG Spitzen, die elektronische E4 XLS Pipette und das PureSpeed Zubehör-Kit. PureSpeed ProA oder ProG Spitzen sind mit 5 oder 20 μl Harz (max. Volumen 200 μl) und 20 oder 80 μl Harz (max. Volumen 1000 μl) erhältlich.

Beschleunigen Sie die Einrichtung Ihrer IP-Versuche mit PureSpeed Starter-Kits. Die Mehrkanal-Kits ermöglichen die gleichzeitige Verarbeitung von 12 Proben.

MTBest.-Nr. Erläuterung

PureSpeed Spitzen und Zubehör

17012561 PT-2-A5 ProA 5 µl Harz, 200-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012562 PT-2-A20 ProA 20 µl Harz, 200-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012563 PT-2-G5 ProG 5 µl Harz, 200-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012564 PT-2-G20 ProG 20 µl Harz, 200-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012568 PT-10-A20 ProA 20 µl Harz, 1000-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012569 PT-10-A80 ProA 80 µl Harz, 1000-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012570 PT-10-G20 ProG 20 µl Harz, 1000-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012571 PT-10-G80 ProG 80 µl Harz, 1000-µl-Spitze, 12 Spitzen

17012588 PT-ACC PureSpeed Zubehör

17012623 LR-P2-96P-5 2,2 ml 96-Deepwell-Platte

PureSpeedEinkanal-Starter-Kits

17012577 PT-S2-A20 Starter-Kit: E4-200XLS + ProA PureSpeed Spitzen

17012578 PT-S2-G20 Starter-Kit: E4-200XLS + ProG PureSpeed Spitzen

17012579 PT-S10-A20 Starter-Kit: E4-1000XLS + ProA PureSpeed Spitzen

17012580 PT-S10-G20 Starter-Kit: E4-1000XLS + ProG PureSpeed Spitzen

PureSpeedMehrkanal-Starter-Kits

17013548 PT-S2-E8 Starter-Kit: E8-200 XLS und Zubehör-Kit

17013546 PT-S10-E8 Starter-Kit: E8-1200 XLS und Zubehör-Kit

17013549 PT-S2-E12 Starter-Kit: E12-200 XLS und Zubehör-Kit

17013547 PT-S10-E12 Starter-Kit: E12-1200 XLS und Zubehör-Kit

Rainin PureSpeed Spitzen passen auf E4 XLS Pipetten mit LTS.