Versuchsübersicht

Mikrobiologische Wasseruntersuchungen

Tag Versuch 13

Bestimmung

der Kolonie-

zahl

Versuch 14

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Flüssigkeitsan-

reicherung

Versuch 15

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Membran-

filtrations-

verfahren

Versuch 16

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Colilert-

Verfahren

Versuch 17

Nachweis

E. coli:

Mikrotiter-

platten-

verfahren

Versuch 18

Identifizierung

mit API 20 E-

System

Montag Anlegen von

Gussplatten

Ansatz von

Flüssigkulturen

Membran-

filtration

Animpfen von

Quanti-Trays

Animpfen

von Mikro-

titerplatten

-

Dienstag - Subkulturen

Endo-Agar

Subkulturen

CASO-Agar

Auswertung - -

Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine

Bunte Reihe

Oxidase-Test,

Auswertung

- Auswertung -

Donners-

tag

Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Ansetzen von

Teststreifen

Freitag Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Auswertung

Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl

1. Tag (Montag)

Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.

Beschreibung der Wasserproben.

Ansatz: - Trinkwasser unverdünnt

- Ruhrwasser 1:10, 1:100

und 1:1000.

Anlegen von Gussplatten mit

Hefeextraktagar.

Bebrütung: 22 °C und 36 °C.

2. – 4. Tag (Mittwoch bis

Freitag)

Auszählung der Kolonien nach

2, 3 und 4 Tagen (Mittwoch bis

Freitag).

Berechnen der Koloniezahlen

pro mL.

Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2006.

Quelle: Süßmuth et al., 1999

Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen

Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 4. und 5. Tag (Donnerstag und

Freitag) Ablesen der Reaktionen aller Bunten

Reihen (positive bzw. negative

Reaktionen)

1. Lactose-Bouillon ( 36 °C, 24 h - 48 h):

Gas- und Säurebildung

2. Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h):

Gas- und Säurebildung

3. Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h):

Indolbildung

4. Nähragar (36 °C 24 h): Oxidase-Test

5. Citratagar (36 °C, 24 h - 48 h): Wachstum

Angabe der Ergebnisse:

Nachweis von E. coli, coliformen

Bakterien bzw. Nicht-Coliformen in

100 mL Wasserprobe.

Versuch Nr. 19: Identifizierung coliformer und

anderer Bakterien mit einem standardisierten

Testsystem (api 20 E)

1. Tag (Donnerstag)

Identifizierung von 4 Reinkulturen

auf Nähragar mit api 20 E-System

(aus Ruhrwasser gewonnene Isolate).

Beimpfen von 4 Teststreifen mit

4 Reinkulturen auf Nähragar aus

Versuch Nr. 14.

Bebrütung der Streifen: 36 °C, 24 h.

2. Tag (Freitag)

Auswertung und Identifizierung.

Mikrobiologisches Praktikum WS 2009/10

3. Woche: Wasseruntersuchungen

Versuchsablauf

Auswertung und Identifizierung Ablesen der Reaktionen und Protokollierung in Auswertebogen

(21 Reaktionen: "ONPG" bis "OX")

Oxidase-Test: Ergebnisse der

Reinkulturen auf Nähragar aus

Versuch Nr. 14 (Flüssigkeitsan-

reicherung)

Auswertung und Identifizierung

Ermittlung eines 7-stelligen Zahlenprofils (numerisches Profil).

Identifizierung anhand des Zahlenprofils im Analytischen-Profil-Index.

Ergebnisse in ausgehängte Tabelle eintragen.

Ergebnisse Praktikum-Mikrobiologie

Mikrobiologische

Wasseruntersuchungen

Bestimmung der Koloniezahl (Versuch Nr. 13)

Gruppe Koloniezahl (KBE/mL) nach 2

und 3 Tagen bei 22 °C

Koloniezahl (KBE/mL) nach 2

und 3 Tagen bei 36 °C

Ruhr Trinkwasser Ruhr Trinkwasser

1 2253/21000 0/0 125/365 3/0

2 643/13800 0/0 275/290 0/0

3 1600/9300 0/0 360/465 3/3

4 1622/11800 0/0 377/536 14/18

5 925/8700 0/0 235/365 0/1

6 1700/10350 0/0 230/371 0/0

7 1680 0 200 3

8 1025/8400 0/0 355/510 0/0

9 827/7000 0/0 221/280 0/0

10 891/17000 0/0 355/400 0/0

11 1275/13000 0/0 130/380 0/0

12 891/17050 0/0 355/405 0/0

E.coli und coliforme Bakterien: Flüssigkeitsanreicherung

(Versuch Nr. 14)

Gruppe E. coli und coliforme Bakterien in 100 mL Ruhrwasser

E. coli Coliforme Nicht-Coliforme

1 + + +

2 + + +

3 + - +

4 - ++ +

5 - - +

6 - - +

7 - + +

8 Nicht auswertbar Nicht auswertbar -

9 - + +

10 - + +

11 + + ++

12 + - +

Trinkwasserbefunde bei allen Gruppen: coliforme Bakterien und E. coli negativ in 100 mL

Identifizierung von Isolaten aus Versuch Nr. 14 mit dem

API 20 E-System (Versuch Nr. 18)

Gruppe Identifizierte Spezies

1 Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Aeromonas hydrophila/Vibrio

fluvialis

2 Shigella spp., Aeromonas hydrophila

3 Escherichia coli

4 Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae,

Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis

5 Serratia marcescens/liquefaciens, Aeromonas hydrophila

6 Serratia sp.

7 Enterobacter cloacae, Aeromonas hydrophila

8 Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae

9 Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

10 Enterobacter cloacae

11 Klebsiella oxytoca

12 Escherichia coli, Vibrio fluvialis

Coliforme Bakterien und E. coli in Ruhrwasser:

Membranfiltration (Versuch Nr. 15)

Gruppe Trinkwasser

(KBE/100 mL)

Ruhrwasser (KBE/100 mL)

Coliforme E. coli Coliforme E. coli

1 0 0 1858 275

2 0 0 2585 275

3 0 0 1190 240

4 0 0 5400 270

5 0 0 260 260

6 0 0 1400 190

7 0 0 1250 500

8 0 0 1450 500

9 0 0 1520 200

10 0 0 4429 290

11 0 0 318 210

12 0 0 1160 350

Coliforme Bakterien und E.coli: Colilert

(Versuch Nr. 16)

E.coli in Ruhrwasser: Mikrotiterplattenverfahren

(Versuch Nr. 17)

Gruppe E. coli

(MPN/100 mL)

Gruppe E. coli

(MPN/100 mL)

1 350 7 368

2 215 8 253

3 368 9 213

4 179 10 289

5 215 11 232

6 213 12 430

Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer

gemäß der EU-Badegewässerrichtlinie (2006)

Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer

Bewertung der Qualität eines Badegewässers anhand

Mikrobiologischer Befunde

Nach EU-Badegewässerrichtlinie:

Die Bewertung der Qualität eines Badegewässers erfolgt auf Basis von

Daten über vier Jahre (vier abgelaufene Badesaisons).

Maßnahmen nach hohen Einzelwerten - nach Badegewässerverordnung

NRW:

Wird bei der Badegewässerüberwachung für den Parameter

Escherichia coli ein Einzelwert von mehr als 1800 KBE/100 ml oder für

den Parameter Intestinale Enterokokken ein Einzelwert von mehr als

700 KBE/100 ml festgestellt, so ist eine sofortige Nachkontrolle durch-

zuführen. Liegen bei dieser Nachkontrolle die Messergebnisse wieder

über diesen Werten, ist ein zeitweiliges Badeverbot zu erlassen.

Badegewässer und Trinkwasser für das Ruhrgebiet

Verbund-Forschungsprojekt im Rahmen der BMBF-Initiative Risikomanagement von neuen Schadstoffen und Krankheitserregern

im Wasserkreislauf (RiSKWa)

Bakteriologische Untersuchungen an der Ruhr

Untersuchungsgebiet „Untere Ruhr“ (Baldeneysee/Ruhr),

8 Probenahmestellen

Boxplot-Diagram: mikrobiologische Parameter, 8 Probenahmestellen, Entnahme alle 2 Wochen,

maximal 184 Proben, Untersuchungszeitraum 13 Monate (April 2010 – Mai 2013). Medianwerte mit

Grenzen der 25. und 75. Perzentile. Striche nach oben und unten: Minimal- bzw. Maximalwerte.

Nachweishäufigkeiten (%) oben angegeben.

Location

Intestinal

enterococci E. coli

E. coli

(without rainfall

events)

RWW Styrum-Ost Excellent Poor Good quality

Löwental Sufficient Poor Good quality

Seaside Beach Good Sufficient Excellent

Polderpumpwerk Excellent Poor Excellent

Fischereiverein Good Poor Sufficient

Rote Mühle Good Poor Good

Zornige Ameise Sufficient Poor Poor

BarCelona Good Poor Sufficient

Klassifizierung der Badegwässerqualität nach

der EU Badegwässerrichtlinie.

Badesaison von Mai bis September 2012.

www.sichere-ruhr.de