Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

33
Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009 Chemie – einfach faszinierend Thomas Hari

Transcript of Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Page 1: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Was bringt Lebewesen zum Leuchten?

Zentralkurs 2009 Chemie – einfach faszinierend Thomas Hari

Page 2: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Das grün fluoreszierende Protein (GFP)

Page 3: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Übersicht

Das GFPExperimente/Idee

ResultateKosten

Page 4: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Das GFP

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 5: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

3 AS bilden das Chromophor

Weitere fluoreszierende Stoffe

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 6: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Mutationen des GFP

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 7: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Experimente / IdeenTransformation von Bakterien mit pGLO

Flüssig-kultur

Zellen lysieren

Isolation von Plasmid-DNA

Restrikitions-verdau

Gelelektro-phorese

Säulen-chromatographie

Native PAGE

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 8: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

pGLO

Gene für araA, araB und araD wurden durch das GFP-Gen ausgetauscht

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Aus: http://www.durham.edu.on.ca/s_links/schools/dunbart/staff/melegos/IDC4U5/pGLO%20Slide%20Presentation.ppt

Page 9: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Genregulation

RNA Polymerase

araC

ara GFP OperonGFP Gene

araC GFP Gene

araC GFP Gene

Effector (Arabinose)

B A DaraC

B A DaraC

RNA Polymerase

Effector (Arabinose)

araC B A D

ara Operon

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Aus: http://www.durham.edu.on.ca/s_links/schools/dunbart/staff/melegos/IDC4U5/pGLO%20Slide%20Presentation.ppt

Page 10: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Resultate

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

Page 11: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Bakterienkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

LB-Medium LB / amp

Page 12: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Bakterienkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

LB / amp /araLB / amp /ara

Ohne UV-Licht Mit UV-Licht

Page 13: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Transformation von pGLO

Aus: http://www.westminster.edu/acad/sim/pdf/SpGLOTransformation.pdf

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Kulturmedium mit Ampicillin

Kulturmedium mit Ampicillinund Arabinose

Page 14: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Flüssigkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 15: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Zellen lysieren

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 16: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Bakterienpellets

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Werden nicht mehr verwendet

Page 17: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Säule auftragen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 18: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Säule auswaschen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 19: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

3 Fraktionen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Säule auftragen

Säule waschen

GFP auswaschen

Page 20: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Native PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 21: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Nicht ganz einfach…

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 22: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

2 fluoreszierende Banden

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

27 und 37 kDa

Page 23: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Vor der SäuleNach der Säule

Page 24: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

250 kDa150 kDa

100 kDa

75 kDa50 kDa37 kDa25 kDa20 kDa15 kDa10 kDa

Page 25: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 26: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 27: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Plasmidverdau

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

pGEM1 mit Bcn1pGLO mit Bcn1 und Bam H1pGLO mit Bam H1

Page 28: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Färbung mit Azur Blau

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 29: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

Page 30: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

Page 31: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Kosten

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

2 Kits mit Material wird geliefertRelativ teuer Zusätzliches Material:ZentrifugeGel-Apparatur vertikalGel-Apparatur horizontalHeizblockMikropipetten (bis 1 ml)Restriktionsenzym

Proteinelektrophorese: http://www3.bio-rad.com/cmc_upload/Literature/221305/1660023A.PDF

Page 32: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Alternative: Genspirale

• Apparaturen werden ausgeliehen(Ausnahme: SDS-PAGE)

• Kosten für Verbrauchsmaterial:SFr. 50.– (Kurs gemacht)

• Zusätzliches Material von BioRad:SäulenPlasmidPuffer selber herstellen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Page 33: Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

Weiter Dokumente auf der Homepage des Gymnasiums Thun-SchadauFachschaft Chemie; Unterrichtsmaterialien Thomas Hari