Zellisolierung · 2011. 1. 11. · reichen Erythrozyten und Zell-trümmer....
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Zur Gewinnung von Zellen aus vitalen Geweben und Organen für die Zellkultur ist eine umfassende Vorbereitung und Abstimmung mit allen beteiligten Personen nötig. Insbesondere müssen alle benötigten Instrumente, Gefäße und Substanzen für Transport und Isolierung gebrauchsbereit sein sowie ein Zeitplan erstellt werden. Nur so lässt sich die Zellisolierung erfolgreich realisieren. Zellisolierung Von der Klinik zur Zellkultur Institut für Veterinär-Anatomie, Freie Universität Berlin Prof. J. Plendl und D. Kühn
Transcript of Zellisolierung · 2011. 1. 11. · reichen Erythrozyten und Zell-trümmer....
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Zur Gewinnung von Zellen aus vitalen Geweben und Organen für die Zellkultur ist eine umfassende Vorbereitung und Abstimmung mit allen beteiligten Personen nötig. Insbesondere müssen alle benötigten Instrumente, Gefäße und Substanzen für Transport und Isolierung gebrauchsbereit sein sowie ein Zeitplan erstellt werden. Nur so lässt sich die Zellisolierung erfolgreich realisieren.
ZellisolierungVon der Klinik zur Zellkultur
Institut für Veterinär-Anatomie, Freie Universität Berlin
Prof. J. Plendl und D. Kühn
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ProbenentnahmeÜbernahme des Organs vom OP-Team unter sterilen Bedingungen.
Entnahme von Geweben und Organen im Schlachthof unter möglichst sterilen Bedingungen. Ein Fortschreiten der Autolyse im Gewebe muss durch raschen Transfer in gekühlte Pufferlösung verhindert werden.
oder
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Transport
In einem sterilen und gekühlten Gefäß mit Pufferlösung erfolgt der zügige Transport des Gewebes zur Zellisolierung ins Labor.
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Isolierung
Die Probe wird mehrmals gespült, zerkleinert und enzymatischaufgeschlossen.
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Aussaat
Die so gewonnenen Zellen werden in einem Medium suspendiert, welches je nach Zellart verschiedene Wachstumsfaktoren enthält (Selektivmedium). Die Zellsuspension wird zügig in speziell beschichteten Kulturschalen ausgesät.
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Inkubation
Bei 37°C und CO2 angereicherter Atmosphäre werden die Zellen inkubiert. Nach 24 Stunden folgt ein Wechsel des Kulturmediums.
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ZellkulturBeispiel: Endothelzellen
Nach 24 Stunden sind auf dem Boden der Zellkulturschale an-haftende Zellen (gelber Pfeil) sichtbar. Die roten Pfeile zeigen die in den ersten Tagen sehr zahl-reichen Erythrozyten und Zell-trümmer. (Phasenkontrast-mikroskop)
Die Kultur zeigt nach 7 Tagen viele adhärente Zellen (gelbe Pfeile). Die roten Pfeile zeigen noch vorhandene Erythrozyten und Zelltrümmer. (Phasen-kontrastmikroskop)
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Zellkultur
Innerhalb von 60 Tagen haben die Endothelzellen ein Netzwerk kapillarähnlicher Strukturen ausgebildet. (Phasenkontrastmikroskop)
Beispiel: Endothelzellen
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Zusammenfassung
Nach Kultivierung der isolierten Endothelzellen in Medien mit spezifischen Wachstumsfaktoren entwickelt sich ein Netzwerk aus kapillarähnlichen Strukturen.
Solche in vitro Modelle bilden heute bereits einen wichtigen Beitrag zur Untersuchung spezifischer Substanzen (z.B. zur Aktivierung oder Inhibierung von Gefäßwachstum), welche zur Therapie verschiedener Erkrankungen beitragen können. Auf diesem Wege führen in vitro Modelle zu einer Reduzierung von Tierversuchen und einer Optimierung der speziesspezifischen Therapiemethoden.
