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Anwendung von Anwendung von MembranadsorbernMembranadsorbern und und Screening Systemen zur gezielten AufarbeitungScreening Systemen zur gezielten AufarbeitungScreening Systemen zur gezielten Aufarbeitung Screening Systemen zur gezielten Aufarbeitung
von Kartoffelproteinenvon Kartoffelproteinen
Th S h Al i G f S B t l M L t R Ulb
Leibniz Leibniz UniversitätUniversität HannoverHannover
InstitutInstitut fürfür TechnischeTechnische ChemieChemie
Thomas Scheper, Alain Graf, S. Beutel, M. Lotz, R. Ulber
CallinstrCallinstr. 3. 3
30167 Hannover30167 Hannover
GGGermanyGermany
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Die Bedeutung der KartoffelDie Bedeutung der Kartoffel
Ca. 220 Wildarten und rund 2000 Sorten heute weltweit bekanntheute weltweit bekannt
Welternte ca. 300 Mio. t jährlich
2004 in der EU 2,7 Mio. ha Anbaufläche; Ertrag 65 Mio. t
Ca 30 % Stärkekartoffeln (25 30 verschiedene Sorten)Ca. 30 % Stärkekartoffeln (25-30 verschiedene Sorten)
Kampagnebetrieb (Speisekartoffel Juni bis September; Stärkekartoffel A t bi J )August bis Januar)
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Die Inhaltsstoffe der StärkekartoffelDie Inhaltsstoffe der Stärkekartoffel
11-21 % Kohlenhydrate0 1 % Fett
KartoffelnWasser72 %
Aminosäuren2 %
0,1 % Fett2 % Proteine2 % Ballaststoffe
weitere Bestandteile
2 %
Fasern
72 % WasserAminosäuren, Vitamine und Mineralstoffe
2 %
Proteins2 %StärkeMineralstoffe Stärke
20 %
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Industrielle Stärkegewinnung (Emslandstärke)Industrielle Stärkegewinnung (Emslandstärke)
Kartoffel-Wäsche Reibe Dekanter UmkehrosmoseKartoffeln
Stärke & Faserstoffeproteinreicher Nebenstrom
Separator(Auswaschen der Stärke)
Kartoffelfruchtwasser(KFW)
Stärke
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Wertschöpfung des KartoffelproteinsWertschöpfung des Kartoffelproteins
Kartoffelfruchtwasser
weitere Bestandteile
Aminosäuren2 %
Wasser 94 %
Ca. 6 Mio. t KFW in EuropaR i h i h d 120 000 t Bestandteile
2 %
Stärke
Proteine2 %
Rein rechnerisch rund 120 000 tKartoffelprotein
Stärke0.5 %
Zusammensetzung der KFW-Proteine:40 % Patatin (majores Glykoprotein)50 % Protease-Inhibitoren (minore Proteine)10 % hochmolekulare Proteine (Polyphenoloxidasen Kinasen Phosphorylasen)
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(Polyphenoloxidasen, Kinasen, Phosphorylasen)
PatatinPatatin
Glykoproteine bestehend aus 362 AminosäurenGlykoproteine bestehend aus 362 Aminosäuren(reich an Lysin und Tyrosin)MW = 40-44 kDa, pI = 4.5-5.2(Isoformen mit unterschiedlichen Glykosylierungsmustern)
Enzymaktivitäten:Li id T f Akti itätLipid-Transferase-AktivitätLipid-Acylhydrolase-AktivitätEsterase AktivitätEsterase-Aktivität
Osborne and Campbell, J. Am. Chem. Soc. 1986, 18, 575Jacusen and Foote J Food Biochem 1980 4 43
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Jacusen and Foote, J. Food Biochem. 1980, 4, 43
Gruppe der ProteaseGruppe der Protease--Inhibitoren (PI)Inhibitoren (PI)
Heterogene Klasse hitzestabiler cysteinreicher ProteineMW 4 23 kD I 5 1 9 0
Spielen für die Abwehr der Pflanze gegen
MW = 4-23 kDa; pI = 5.1-9.0
Spielen für die Abwehr der Pflanze gegen Schädlinge etc. eine RolleInhibierende Wirkung auf Serin- und CysteinproteaseFördern Sättigungsgefühl (Protease Inhibitor II)Mögliche anti-karzinogene Wirkung
Kennedy et al., Pharmacol. Ther. 1998, 78, 167-209.Pouvreau et al., J. Agri and Food Chem 2001, 49 (6), 2864
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Hill et al., Physiol and Behav. 1990, 48, 241
Einsatz von KartoffelproteinfraktionenEinsatz von Kartoffelproteinfraktionen
NutraceuticalsBaby- und Spezialnahrungy p gSportlernahrung (Amino Mass)Vermarktung als Appetitzügler (Satise)
Medizinischer EinsatzBehandlung von Diabetes II und HautkrebsBehandlung von Diabetes II und Hautkrebs
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NutraceuticalsNutraceuticals
Nahrungsmittel mit positiver physiologischer WirkungNahrungsmittel mit positiver physiologischer Wirkung
Krankheitsbekämpfung/Prävention sowie Steigerung der Leistung/WohlbefindenLeistung/Wohlbefinden
Im Vgl. zum Wachstum des Gesamtmarktes für Nahrungsmittel (1-3 % pro Jahr) wächst das Marktvolumen von Nutraceuticals um ca 8 %% pro Jahr) wächst das Marktvolumen von Nutraceuticals um ca. 8 % jährlich (geschätzter Weltmarkt 12 Mrd. EURO)
Anforderungen: gut schmecken praktisch sein leicht verständlicheAnforderungen: gut schmecken, praktisch sein, leicht verständliche Wirkung, preiswert, „gut aussehen“
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Wertschöpfung des KartoffelproteinsWertschöpfung des Kartoffelproteins
Hitzekoagulation der KFW-Proteine liefert denaturiertes Produkt
KFW
Keine Bioaktivität
Vermarktung als geringwertiges f
Proteinfällung110 °C
Standder Technik
TierfuttermittelPreis des Kartoffelproteins pro kg als Viehfutter: 0,5 bis 1 €
denaturiertes Kartoffelprotein Viehfutter: 0,5 bis 1 €
einfacher Lebensmittelzusatz: 4 bis 6 €p
KFWKFW
Membranadsorber-verfahren
Isolierung bioaktiver Proteinfraktionen (nativ)Vermarktung als hochwertige
Vision
fraktioniertesKartoffelprotein
verfahren Vermarktung als hochwertige Fuctional Ingredientsgeschätzer Absatzpreis pro kg: ca. 50 €
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(nativ)
protein mixture(proteins bind according to
isoelectric point)
protein mixture(proteins bind according to
isoelectric point)
-SO3-
SO
- OS-3profile throughmembrane pore
-SO3-
SO
- OS-3profile throughmembrane pore
-SO3-
-SO3-
- OS-3
- OS-3
membrane pore
pore size: about 3.0 µmmembrane thickness: 180 - 200 µm-SO3
-
-SO3-
- OS-3
- OS-3
membrane pore
pore size: about 3.0 µmmembrane thickness: 180 - 200 µm
flat module(analytical purposes)
spiral module(protein downstreaming)
flat module(analytical purposes)
spiral module(protein downstreaming)(analytical purposes) (protein downstreaming)(analytical purposes) (protein downstreaming)
vertical flowto membrane surface
vertical flowto membrane surface
vertical flowto membrane surface
vertical flowto membrane surface
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Diversity of downstream material
downstream conditionsdownstream conditions(e.g. electrical field)
Ligands(cationic groups,
binding chemistry(aldehyde, epoxy)
(cat o c g oups,antibodies, Ni, Cu )2+
Basic material
2+
(membrane, beads)
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target protein ligandtarget protein ligand
immunoglobulines protein A
rt-PA, rh-GH antibodyrt PA, rh GH antibody
glyk. proteins concanavalin A
streptavidine biotin
His-tag-proteins Cu, Ni
plasmides, proteins aptameres
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cation exchanger
anion exchangeranion exchanger
protein A
His tagHis-tag
antibody
C ACon A
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cation exchanger
anion exchangeranion exchanger
protein A
His tagHis-tag
antibody
C ACon A
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sample 6
sample 4
cation exchanger
anion exchanger sample 4
sample 11
sample 3
anion exchanger
protein A
His tag sample 3
sample 10
sample 1
His-tag
antibody
C A sample 1Con A
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0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 1 0 1 1 1 2
sample 6
sample 4
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2
cation exchanger
anion exchanger sample 4
sample 11
l 3
anion exchanger
protein A
His tag sample 3
sample 10
l 1
His-tag
antibody
C A sample 1Con A
sodium chloride gradient
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UpUp--scaling Membranadsorberscaling Membranadsorber
Einfaches Scale-UpVerschiedene Geometrien und BetriebsweisenVerschiedene Geometrien und Betriebsweisen
Spinmodule(1,9 – 7,5 cm2)
Bis 2 mg Protein/cm2Bis 2 mg Protein/cm2
Sartobind MultiSep ModuleSartobind MultiSep-Module(0,1 – 80 m2)
Bis 0,8 mg Protein/cm2
Sartobind-Module(15, 75, 100 cm2)
Bis 0,8 mg Protein/cm2
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g
Proteintrennung mittels MembranadsorberProteintrennung mittels Membranadsorber
Einsatz von Anionen-(Q)- und Kationenaustauscher-(S)-Membranmodulen (Sartobind 15-100 cm2)
Puffer A Puffer B
(Sartobind 15-100 cm )
LC Pumpe LC PumpeMischzelleMischzelle
Injektionsventil
Membranmodul
Probe
Membranmodul
UV-Detektor
LeitfähigkeitLeitfähigkeit
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Fraktionssammler
Ergebnisse im LabormaßstabErgebnisse im Labormaßstab
Q-Fraktion: Patatin S-Fraktion: Minore Proteine
2,00 1,0
Q Fraktion: Patatin S Fraktion: Minore Proteine
1,25
1,50
1,75
60
80
100
Enm] 0,7
0,8
0,9
60
80
100
nm]
Elue
0,50
0,75
1,00
20
40
60
Eluent in %AU [2
80 n
0,3
0,4
0,5
0,6
20
40
60
AU [2
80 n nt in %
0 5 10 15 20 25 30 350,00
0,250
Zeit t in [min]0 5 10 15 20
0,1
0,20
Zeit t in [min]
Beladungs- und Elutionsprofil eines Q15- Moduls Elutionsprofil eines S15-Moduls
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Ergebnisse im LabormaßstabErgebnisse im Labormaßstab
ProzessschritteE ilib i d M b d l it 50 M N PP ( H 7)Equilibrierung des Membranmoduls mit 50 mM NaPP (pH 7)Beladung mit KFW (1:5 verdünnt, pH 6,5)Spülen mit 50 mM NaPP (pH 7)Spülen mit 50 mM NaPP (pH 7)Elution mit 0,5 M NaCl-LösungMembranregeneration mit 1M NaCl-Lösung
Beladungsvolumen0 7 L/m² Membranfläche0,7 L/m² Membranfläche
BindungskapazitätenBindungskapazitätenS-Adsorber: 0,67 mg/cm²Q-Adsorber: 0,23 mg/cm²
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Proteintrennung mittels MembranadsorberProteintrennung mittels Membranadsorber
SDS-PAGE(Tris-HCL, 18%,Coomassiefärbung)
S 1 M l k l i ht kSpur 1: MolekulargewichtsmarkerSpur 2: Kartoffelfruchtwasser 1:10 verdünntSpur 3 und 4: Elutionsfraktion (0,5 M NaCl,
Q 15)Q 15)Spur 5: WaschfraktionSpur 6: Elutionsfraktion (0,5 M NaCl, S 15)
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Charakterisierung der QCharakterisierung der Q--Fraktion Fraktion -- MALDIMALDI--MSMS
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Charakterisierung der SCharakterisierung der S--Fraktion Fraktion -- MALDIMALDI--MSMS
4153
7857
Appetitzügler: SATISES-FraktionKunitz Inhibitor KI
20305
7879
Kunitz Inhibitor KIBowman Birk Inhibitor BBICarboxypeptidase Inhibitor CPI
1004271
60
80
41443890
20227
BBI
CPI
tens
ität [
%]
20
40
4292 8058 10101
20227
S-Fraktion
KI
relat
ive
Int
5000 10000 15000 20000 250000
Appetitzügler
Masse (m/z)
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UpUp--scaling in den Prozessmaßstabscaling in den Prozessmaßstab
Sartobind-Module(15, 75, 100 cm2)
Sartobind MultiSep-Module(6600 cm2)
(15, 75, 100 cm )
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Innovativer MembranInnovativer Membran--DownstreamDownstream--Prozess Prozess KFW
Feststoffe
Membranadsorption
Vorklärung/Mikrofiltration Feststoffe( Proteine, Stärke, Fasern etc)
(Q)- Membranadsorption6600cm²
(S)-Membranadsorption6600cm²
EnteiweißtesKFW
EnteiweißtesKFW
Ultra-/Diafiltration
6600cm²
Ultra-/Diafiltration
6600cm²
SalzlösungSalzlösung
Eluat Eluat
Lyophilisierung/Sprühtrocknung
Lyophilisierung/Sprühtrocknung
Retentat Retentat
Sprühtrocknung Sprühtrocknung
Patatin Protease-Inhibitoren
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xx.xx.2007 32
Ergebnisse im ProzessmaßstabErgebnisse im Prozessmaßstab
Prozessschritt V [L] t [min] P [bar]Equilibrierung 5 3 2 2 0Equilibrierung
(20 mM NaPP, pH 7)5 3,2 2,0
KFW-Beladung 10 5,6 2,2(Mikrofiltriert, 1:5 verdünnt, pH 6,5)
Spülen(20 mM NaPP, pH 7)
10 4,2 2,2
Elution Q-Modul(0,5 M NaCl)
7,5 3,0 0,8
Elution S-Modul 6 0 2 3 1 0Elution S Modul(0,5 M NaCl)
6,0 2,3 1,0
Membranregeneration(1 M NaCl)
5,0 2,0 0,8(1 M NaCl)
BindungskapazitätenS-Adsorber: 1,00 mg/cm² (klein: 0,67 mg/cm2), Q-Adsorber: 0,37 mg/cm²
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(klein: 0,23 mg/cm2)
Mit der 1m2 Membran werden gewonnenMit der 1m Membran werden gewonnen(erreichbar sind zur Zeit die Bindung und Elution
80% d i d KFW th lt P t i )von 80% der in dem KFW enthaltenen Proteine):- 3,7 g Patatin - 10 g Proteaseinhibitoren- dazu sind 20-25 Minuten Zeit nötig einedazu sind 20 25 Minuten Zeit nötig, eine
Vergrößerung der Membranfläche führt nichti V lä d Z itzu einer Verlängerung der Zeiten.
Einsatz KFW 1:5 verdünnt 5 L pro 1 m2
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xx.xx.2007 34
ProduktanalytikProduktanalytik
Gel- und KapillarelektrophoreseElutionsfraktionenWaschfraktionen
Q-Fraktion100857060
Q-Membran S-MembranKFWkDaElutionsfraktionenWaschfraktionen
S-Fraktion
Au (2
14 n
m)
6050
40
30
0 5 10 15 20 25
Migrationszeit [min]
25
20
15
MMigrationszeit [min]
Enzymatische Aktivitätsassays PIPatatin
M
(Lipid-Acyl-Hydrolase)-Test für Patatin Bestimmung der Protease-Inhibitor-Aktivität gegenüber TrypsinP l h l id Akti ität
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Polyphenoloxidase-Aktivitätsassays
Störkomponenten: GlykoalkaloideStörkomponenten: Glykoalkaloide
Hauptanteil findet sich in Kartoffelschale und Keimen20 25 /100 F i h d kt l t i h S h ll20-25 mg/100g Frischprodukt als toxische Schwelle
Symptome: Halsschmerzen, Übelkeit/Erbrechen, Durchfall, Magen-Symptome: Halsschmerzen, Übelkeit/Erbrechen, Durchfall, Magenund Darmkrämpfe, Kopfschmerzen, Fieber, Atemnot, Schwindel, Bewusstseinsverlust
O
N
OHOH OH
D-Galactose
O
N
OH
D-Glucose
O
OO
OO
OOH
OHOH
OHOH
CH3
OH
ββ
αL-RhamnoseL-Glucose
O
O
OO
O
OHOH
CH3
OH
O
OHOH
OHCH3 OH
β
αL-Rhamnose
L-Rhamnose
α
Maga; Crit Rev Food Sci Nutr 1980; 12 (4) 371
α-Solanin: MW 868,08 g/mol α-Chaconin: MW 852,08 g/mol
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Maga; Crit. Rev. Food Sci Nutr 1980; 12 (4), 371Lee et al; J Agric Food Chem. 2004; 52 (10), 2832
HPLCHPLC--GlykoalkaloidanalytikGlykoalkaloidanalytik
essigsaureExtraktion
Festphasen-Aufreinigung
HPLC-Analytik Ergebnis
Kartoffelprotein(-fraktion)
0,15 Solanin-Standard Chaconin-StandardKartoffelprotein-Extrakt
0,10
Cha
coni
n
Kartoffelprotein-Extrakt
lani
n
m)
0 00
0,05
C
So
AU
(200
nm
-0,05
0,00
Quantitative Glykoalkaloid-Bestimmung bis 20 ppm, über
0 5 10 15 20 25 30 35
Retentionszeit [min]
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Membranadsorber gewonnene Fraktionen sind alkaloidfrei!!
Fazit Fazit
Kartoffelfruchtwasser enthält große Mengen biologisch wertvoller g g gProteine
Die Proteine werden bisher durch Hitzekoagulation denaturiert gewonnen (Viehfutter)
Durch Einsatz eines innovativen Membranverfahrens können die Proteine schonend in bioaktiver Form fraktioniert und isoliert werden
H h W t hö f i i d t i ll Abf ll t (KFW)Hohe Wertschöpfung eines industriellen Abfallstroms (KFW)
eine Übertragung vom Labormaßstab in den industriellen Maßstab möglich istmöglich ist
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Industrielle StärkeIndustrielle Stärke-- und Proteingewinnungund Proteingewinnung
Kartoffel-Wäsche Reibe Dekanter UmkehrosmoseKartoffeln
KFW
ProteinfällungSeparator
KFWStärke & Faserstoffe
Innovatives Proteinfällung110 °C
Separator(Auswaschen der Stärke)
Innovatives Membranverfahren
fraktioniertes denaturiertesStärke Kartoffelprotein(nativ)
denaturiertes Kartoffelprotein
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ProteingewinnungProteingewinnung
Native bioaktive Proteinfraktionen
KartoffelfruchtwasserMembran- Proteinfraktionen
Downstreaming-Prozess
Patatin Protease Inhibitor FraktionPatatin Protease-Inhibitor-Fraktion
Enzymaktivitäten:Lipid-Transferase-Aktivität
Inhibierende Wirkung auf Serin- und Cysteinprotease
Lipid-Acylhydrolase-AktivitätEsterase-Aktivität
MW = 40-44 kDa, pI = 4.5-5.2
MW = 4-23 kDa; pI = 5.1-9.0
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xx.xx.2007 41
MW 40 44 kDa, pI 4.5 5.2
Übersicht der ProteinfraktionenÜbersicht der Proteinfraktionen
Protein Anteil [%] Molmasse [kDa]P t ti 38 40 (80)Patatin 38 40 (80)
Potato Inhibitor I (PI-1) 4,5 7,7-7,9 (39)Potato Inhibitor II (PI-2) 22 10,2 (21)Potato Inhibitor II (PI 2) 22 10,2 (21)Potato Aspartyl Protease Inhibitor (PAPI) 6 19,9-22Potato Cysteinyl Protease Inhibitor (PCPI) 12 20,1-22,8Potato Kunitz Protease Inhibitor (PKPI) 4 20 2Potato Kunitz Protease Inhibitor (PKPI) 4 20,2Other Serine Protease Inhibitors (OSPI) 1,5 21-21,8Potato Carboxypetidase Inhibitor (PCPI) 1 4,3
Polyphenoloxidases (PPO) no info 60; 69Phosphorylase isoenzymes no info 180-600Starch Synthases no info 140Starch Synthases no info 140Protein Kinases no info no infoLectin 1 65,5
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Nachwachsende RohstoffeNachwachsende Rohstoffe
„…land- und forstwirtschaftlich erzeugte Produkte, die einer „ g ,Verwendung im Nichtnahrungsbereich zugeführt werden…“(vor allem für Bioenergieerzeugung)
Landwirtschaftliche ReststoffeMolke (Milchverarbeitung)Melasse (Zuckerrübenverarbeitung)Kartoffelfruchtwasser (Stärkegewinnung)
Ulb CIT 2005 77 N 4 363
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xx.xx.2007 43
Ulber; CIT 2005, 77 No4, 363
KartoffelstärkeKartoffelstärke
Jährliche Produktion in EU 9,1 Mio t,
Stärkekartoffeln haben einen Stärkegehaltvon bis zu 21 % (Speisekartoffeln ca. 15 %)
Reis ca 70 75 % Weizen 58 64 % Mais 60 70 %Reis ca. 70-75 %, Weizen 58-64 %, Mais 60-70 %
Stärke besteht aus 20 % Amylose und 80 % Amylopektiny y p
Quelle: Fachverband der Stärkeindustrie
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xx.xx.2007 44
Quelle: Fachverband der Stärkeindustrie
Industrielle Stärkegewinnung (Emslandstärke)Industrielle Stärkegewinnung (Emslandstärke)
Kartoffel- Reibe Dekanter UmkehrosmoseKartoffeln Wäsche Reibe Dekanter UmkehrosmoseKartoffeln
proteinreicherStärke & Faserstoffe
proteinreicher Nebenstrom
Separator(Auswaschen der Stärke)
Kartoffelfruchtwasser(KFW)
Stärke
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Verwendung der StärkeVerwendung der Stärke
Technische ProdukteTechnische Produkte (Papier, Klebstoffe, Baustoffe, Textil)
Kosmetikprodukte
50 % werden heute im Nahrungsmittelsektor verarbeitet
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Gruppe der ProteaseGruppe der Protease--InhibitorenInhibitoren
Anteil amProtein
Anteil am KFW-Protein
[%]
Molmasse [kDa]
Potato Inhibitor I (PI-1) 4,5 7,7-7,9 (39)
Potato Inhibitor II (PI-2) 22 10,2 (21)Potato Inhibitor II (PI 2) 22 10,2 (21)
Potato Aspartyl Protease Inhibitor (PAPI) 6 19,9-22
Potato Cysteinyl Protease Inhibitor (PCPI) 12 20 1-22 8Potato Cysteinyl Protease Inhibitor (PCPI) 12 20,1-22,8
Potato Kunitz Protease Inhibitor (PKPI) 4 20,2
Other Serine Protease Inhibitors (OSPI) 1 5 21 21 8Other Serine Protease Inhibitors (OSPI) 1,5 21-21,8
Potato Carboxypetidase Inhibitor (PCPI) 1 4,3
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Qualität des KartoffelproteinsQualität des Kartoffelproteins
Hohe nutritive Qualität:limitierend: Tryptophan 100
120FAO/WHOStandardlimitierend: Tryptophan
max. Amino Acid Score (AAS)rein pflanzlichhoher Anteil an Glutamin
60
80
100
orde
rung
g Pr
otei
n]
StandardKartoffelproteinEmslandstärke
hoher Anteil an Glutamin
0
20
40Anf
o[m
g/g
FAO/WHO E f hl (1990) 0
Ile Leu
Lys
Met+Cys Tyr Thr Trp Val
FAO/WHO-Empfehlung (1990):Protein Digestibility Corrected AAS
= AAS x fecal true digestibility
FAO/WHO/UNU Expert Consultation (1985), Energy and Protein Requirements, Technical Report Series 724. World Health
Protein BiologicalValue
Digestibility[%] AAS PDCAAS
Beef 80 98 0.94 0.92Egg 100 98 1 00 1 00 Report Series 724. World Health
Organization, Geneva
Schaafsma, G. (2000), The protein digestibility-corrected amino acid score. Journal of Nutrition 130, 1865-1867
Egg 100 98 1.00 1.00Cow's Milk 91 95 1.00 1.00
Soy 74 95 0.96 0.91Wheat 64 91 0.47 0.42P t t 69 1 00
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Potato 69 - 1.00 -
Charakterisierung der QCharakterisierung der Q--Fraktion Fraktion -- MALDIMALDI--MSMS
Aminosäuresequenz:
1 MATTKSFLIL FFMILATTSS TCAKLEEMVT VLSIDGGGIK GIIPAIILEF 51 LEGQLQEVDN NKDARLADYF DVIGGTSTGG LLTAMITTPN ENNRPFAAAK 51 LEGQLQEVDN NKDARLADYF DVIGGTSTGG LLTAMITTPN ENNRPFAAAK
101 DIVPFYFEHG PHIFNYSGSI LGPMYDGKYL LQVLQEKLGE TRVHQALTEV 151 AISSFDIKTN KPVIFTKSNL AKSPELDAKM YDICYSTAAA PIYFPPHHFV 201 THTSNGARYE FNLVDGAVAT VGDPALLSLS VATRLAQEDP AFSSIKSLDY 251 KQMLLLSLGT GTNSEFDKTY TAEEAAKWGP LRWMLAIQQM TNAASSYMTD 251 KQMLLLSLGT GTNSEFDKTY TAEEAAKWGP LRWMLAIQQM TNAASSYMTD
301 YYISTVFQAR HSQNNYLRVQ ENALNGTTTE MDDASEANME LLVQVGETLL 351 KKPVSKDSPE TYEEALKRFA KLLSDRKKLR ANKASH
Tryptischer Verdau liefert Peptidmassen, die mit dem theoretischen Verdau übereinstimmenVerdau übereinstimmenEindeutige Identifizierung von Patatin über Datenbankabgleich
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xx.xx.2007 49
CharakterisierungCharakterisierung der Sder S--Fraktion Fraktion -- MALDIMALDI--MSMS
Kunitz Inhibitor
100(ca. 20 kDa)Carboxypeptidase Inhibitor (ca. 4300 Da)
60
80 S 75 fraction~ 20305 Da
nsitä
t[%]
40 S 75 fraction~ 4300 Da
Inte
n
0
20
5000 10000 15000 20000 25000 30000
m/z
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xx.xx.2007 50
cation exchanger
anion exchangeranion exchanger
protein A
His tagHis-tag
antibody
C ACon A
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cation exchanger
anion exchangeranion exchanger
protein A
His tagHis-tag
antibody
C ACon A
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sample 6
sample 4
cation exchanger
anion exchanger sample 4
sample 11
sample 3
anion exchanger
protein A
His tag sample 3
sample 10
sample 1
His-tag
antibody
C A sample 1Con A
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0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 1 0 1 1 1 2
sample 6
sample 4
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2
cation exchanger
anion exchanger sample 4
sample 11
l 3
anion exchanger
protein A
His tag sample 3
sample 10
l 1
His-tag
antibody
C A sample 1Con A
sodium chloride gradient
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