Plasmid ohne Resistenzgenen
5
Plasmid ohne Resistenzgenen Plasmid mit Resistenzgenen Ampicillin Tetracyclin Transformation erien besitzen die Fähigkeit Antibiotika hrer Wirkung abzuschwächen oder total rksam zu machen. Die dafür notwendige rmation findet sich auf den sogenannten stenzgenen. Befindet sich innerhalb des stenzgens eine Schnittstelle für ein Restrik- senzym, so kann das Plasmid für die Identifi- ung transformierte Bakterien verwendet en. Öffnung des Plasmidringes erfolgt innerhal der Gensequenz für die Antibiotikaresisten Dadurch wird die Resistenz gegen Tetracycl zerstört! Grundlagen:
description
Transformation. Grundlagen:. Ampicillin. Tetracyclin. Plasmid ohne Resistenzgenen. Plasmid mit Resistenzgenen. Bakterien besitzen die Fähigkeit Antibiotika In ihrer Wirkung abzuschwächen oder total - PowerPoint PPT Presentation
Transcript of Plasmid ohne Resistenzgenen
Plasmid ohneResistenzgenen
Plasmid mit Resistenzgenen
Ampicillin Tetracyclin
Transformation
Bakterien besitzen die Fähigkeit AntibiotikaIn ihrer Wirkung abzuschwächen oder totalunwirksam zu machen. Die dafür notwendige Information findet sich auf den sogenannten Resistenzgenen. Befindet sich innerhalb desResistenzgens eine Schnittstelle für ein Restrik-tionsenzym, so kann das Plasmid für die Identifi-zierung transformierte Bakterien verwendetwerden.
Öffnung des Plasmidringes erfolgt innerhalb der Gensequenz für die Antibiotikaresistenz. Dadurch wird die Resistenz gegen Tetracyclinzerstört!
Grundlagen:
Ablauf:
Das Restriktionsenzym schneidet Plasmidring und Fremd-DNA an den durch das Restriktionsenzym bestimmten Stellen auf. A A T T C G C
A G C T T A A G C GT C G
Plasmid Fremdgen
Restriktionsenzym
Ablauf:
Das Restriktionsenzym schneidet Plasmidring und Fremd-DNA an den durch das Restriktionsenzym bestimmten Stellen auf. A A T T C G C
A G C T T A A G C GT C G
Plasmid Fremdgen
Restriktionsenzym
Dadurch entstehen sticky ends.Diese sind spiegelbildlich undlagern sich auf Grund des „klebrigen Effektes“ leicht wiederzusammen
Jedoch ist auch der Einbau einer Fremd-DNA auf Grund der gleichartigen sticky ends möglich.
Im Versuchsansatz sind zwei strukturell unterschiedliche Plasmidringe vorhanden.
Bakterienzelle Bakterienzelle
Das Einbringen der Plasmideerfolgt durch eine Kombination von Hitze- und Kälteschock beigleichzeitiger Zugabe von Calcium-Chlorid. Dies führt zu einer Per-foration der Zellmembran, die dasEindringen erleichtert.
Die Plasmidringe sollen nun in eine Bakterienzelle eingebracht werden
Für den Wissenschaftler stellt sich nun die Frage welches Bakterium die Fremd-DNA enthält und damit transformiert ist.
Die Lösung des Problems erfolgt mit Hilfe einer Stempeltechnik
Die Bakteriensuspension, die beide Typenvon Bakterien enthält, wird auf eine Agar-platte mit Ampicillin ausgebracht.
Da beide resistent sind werden sie auf dem Nährboden heranwachsen.
Durch Verwendung eines Stempels, derauf die Kolonien gedrückt wird, kanndas Muster auf einen Nährboden über-tragen werden der Tetracyclin enthält.
Diejenigen Bakterien , die daraufheranwachsen sind nicht trans-formierte Zellen, da sie ihre Re-sistenz gegen Tetracylin nochbesitzen.
Die transformierten Bakterienzellen können nun aus dem Nährboden herausgestochen, in eine Nährlösung überführtund darin vermehrt werden. Sie stehen für weitere Experimente zur Verfügung.
