Biochem. Physiol. Pflanzen 181, 359-368 (1986) VEB Gustav Fischer Verlag Jena

Quantitative Struktur-Aktivitats-Beziehungen fur die Hemmung des autotrophen Wachstums

synchroner Chlorella-vulgaris-Kulturen r " •

durch substituierte 2-Methy,l~isothioharnstoffe

THOMAS SCHELENZ und PIA BORDES Sektion Biologie/Chemie der Padagogis('hrn Hochschllle "Wolfgang Ratke"

Kiithen, DDR

Quantitative Structure-Activity Relations for the Inhibition of the Autotrophic Growth of Synchronous Chlorella vulgaris Cultures

hy Substituted 2-Methyl-isothioureas

Key Term Index: substituted 2-methyl-isothioureas, growth inhibition, quantitative structure­activity relationships; Chlorella vulgaris

Summary

In continuation of earlier works a series of 16 mono- and disubstituted 2-methyl-isothioureas was synthesized by S-methylation of corresponding thioureas. The compounds were isolated as hydroio­(lides and quantitatively tested for growth·inhibiting activity against autotrophic Chlorella vulgaris ('ultures under standardized test conditions.

Isoeffective inhibitory values p(501 ) determined from dosage· effectivity relations were us('d as activity parameters beside selected series of substituent constants for QSA}t studies.

In this way a simple linear relationship between pe50 data and hydrophobic molecule parameters was obtained which allowes to predict biological activities of yet uninvestigated compounds possessing isothionrea structure.

The results of this paper are discussed and compared with those found for corresponding thio­IIreas.

Einleitung

In einer unHtngst erschienenen Publikation (SCHELEXZ und KRAMER 1985) wird iibcr Ergebnisse quantitativer Testungen der algicidell bzw. algistatischen Aktivitat verschie­denartig substituierter Thioharnstoffe gegeniiber autotroph kultivierten Chlarella-1'ldgaris-Suspensionen berichtct. Die dabei gefundenen und im Zusammenhang mit ex­perimentellen Daten verwandter Wirkstoffgruppen diskutierten quantitativen Struktur­Aktivitats- (Wirkungs-) Beziehungen (QSWB) belegen eindrucksvoll die vorwiegend hydrophobe Deter iniertheit der betrachteten Wirkqualitat und ermoglichen eine geniigelld siehere Abschatzung der biologischen Eigenschaften strukturell starker diffe-

1) Abbreviations: peso = -lg (ED50), see Table 1; QSA}t = quantitative structure-activity relationship( s).

360 TH. SCHELENZ und P. BORDES

S S II + A,R,NH

R3-N=C R, II

'N-C-NH-R +SCN

CR"R2 = H, Alkyl,Aryl;

113= Alkyl, Aryl)

/ 3 R2

II + Mel

R SMe

(R I =- Aryl;

R,= Ii. AI.kyl. Aryl, R,=1i )

I, I N- C=N-R3 ' HI R;

IV Abb.1. Synthese substituierter 2-Methyl-isothiohamstoff-hydroiodide (Reaktionsschema).

renzierter Harnstoffderivate (Harnstoffe, Thioharnstoffe, Isothioharnstoffe) liber den Umfang der jeweils untersuchten Stichproben hinaus,

In Weiterflihrung dieser Arbeiten werden im Rahmen der vorliegenden Publikation Ergebnisse gleichgearteter Testungen an korrespondierenden 2-Methyl-isothioharn­stoffen beschrieben, welche sich von den erstgenannten Verbindungen lediglich durch den zusatzlichen Einbau einer konstanten Methylgruppe in 2(S)-Position der tautomeren Thioharnstoffstruktur unterscheiden.

Material und Methoden Synthese

Substituiertc 2-Methyl-isothioharnstoff-hydroiodide IV (s. Reaktionsschcma) entstehcn in nahezu quantitativer Ausbeutc durch S-Mcthylierung entsprechend substituierter Thioharnstoffe II (KIRSTEN und SMITH 1936; FINNEGAN et aJ. 1953), welche kommerziell verfiigbar sind oder naeh ebenfalls bekannten Verfahren aus Isothiocyanaten I (DYSON und GEORGE 1924; MOORE und CROSSLEY 1941) bzw. Aminhydrochloriden III (SCHUBERT und SCHUTZ 1934; KURZER 1951) synthetisiert werden kiinnen.

Die in Tabelle 1 aufgeftihrten Verbindungen wurden durch mehrmalige Umkristallisatioll aus Ethanol/Ether gereinigt, anhand geeigneter Analysenmethoden identifiziert und aus praktischcn Erwagungen (Stabilitat, Liislichkeit) in der primar anfaHenden Salzform auf algistatische Wirksam­kcit gegentiber Chlorella vulgaris untersucht.

Biologische Testung Grundlage der Ermittlung quantitativer Aktivitatsdaten bildetc die Anwendung eines mehrfach

beschriebcnen Chlorella-Testsystems nach BOHM et al. (1972), welches tiber die Beeinflussung kom­plexer Wachstums- und Entwicklungsparameter des thermophilen chlorococcalen Einzellers Chlo­rella vulgaris BEIJERINCK 1890 var. vulgaris FOTT et NOVAKOVA 1969 Stamm: Biihm/Borns 1972/1 (As der Aigensammiung der PH Kiithen) eine effektive Charakterisicrung algicid und phytotoxisch wirksamer Verbindungen ermiiglicht. Anzucht und Entwicklungssynchronisation des Testorganismus in einem modifizierten Nahrmedium nach KUHL und LORENZEN (1964) wurden mit einer von nOm! (1973 b) entwickelten, weitgchend automatisierten Apparatur durchgeftihrt.

Das Prinzip des gewahlten autotrophcn Wachstumstests (BOHM 1973a) besteht in der mehrstiin­digen parallelen Konfrontation synchroner Chlorella-Fliissigkeitskulturen konstanter Zelldichte (etwa 7,5· 1()6 Autosporen/ml) mit Konzentrationsreihen des jeweiligen, in Ethanol gelosten Wirk­stoffs. Dabei garantiert ein Licht-Thermostat (unveriiffentlicht) ftir 23 Kultivicrungsplatze (Reagenz­glaser 30/200 mm) identischc, artspezifisch optimierte Wachstumsbedingnngen (37,5 DC, 51 Luft mit 2 Vol.-% CO2/h, 2·4 Leuchtstofflumpen NARVA LS 65 WeiB 20).

Hemmung des autotrophen Wachstums bei Chlorella 361

100

80

60

40

20

5,5 5,0 4,5 4,0 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 - 19 te}

Abb.2. Grafische Ermittlung der Aktivitiitsparameter pCso aus Dosis-Wirkungs-Beziehungen (exem­plarische Darstellung). We80 nm = nach Extinktionsmessnngen bei 680 nm gemiW GJ. (1) erhaltene relative prozentuale Wachstumshemmungen, -lg{ c} = negative dekadische Logarithmen der eingesetzten molaren Wirkstoffkonzentrationen; 1,g-(4-Mc-Ph), = 1,g-Di-(4-methylphenyl)-, 1,1-Ph2 = 1,1-Diphenyl-, I-Hex" = 1-Cyclohexyl-2-methyl-isothioharnstoff-hydroiodid.

Der dosisabhiingigc Wachstumsverlallf ist iiber kontinllicrliehe Extinktionsmessungen bei 680 bzw. 750 nm (Spckol 10, VEB Carl Zeiss JENA) zu crfassen und ge miiB Gleichung (1) als rrlative prozentllalc Wachstllmshemmllng W zu qllantifizieren.

EK-Ew W = 100· ---,­

EK-Eo (1)

(Eo = standardisierte Anfangsextinktion, Ew/EK = Extinktionen wirkstoffbehandelter bzw. parallel belichteter, gleichfalls ethanolversetzter Kontrollsuspcnsioncn naeh t Stunden Testdauer).

Aus der Konzentrationsabhiingigkeit der nach 6 h Einwirkzeit ermittelten relativen prozentualcn Wachstllmshemmungen sind di e als Aktivitiitsparameter defini('rt en negativen dekadischen Log­arithmen der molaren Effektorkonzentrationen, welche eine 50%ige Hemmllng des autotrophen Algen­wachstnms bewirken (peso), dlmh grafische Intrrpolation entsprechend Abb. 2 zllgiinglich (Tabelle 1).

Ergebnisse und Diskussion

Substituierte 2-Methyl-isothioharnstoff-hydroiodide hemmen liber eine verstiirktc Bceinflussung der Chlorophyllentwicklung [Abb. 3, Gleichung (2)] substituenten- und dosisabhangig das autotrophc Wachstum synchroner Chlorella-vulgaris-Fllissigkeits­kulturen (vgl. KRAMER et al. 1984; SCHELENZ und KRAMER 1985).

362 TH. SCHELENZ und P. BORDES

Tabelle 1. Logarithmen der reziproken isoeffektiven J(onzentratiollen (peso) fur die Hemmung des autotrop/ten Wachstums synchroner Chlorella-vulgaris-I(ulturen durch substituierte 2-Methyl-isothio­harnstoff-hydroiodide der Ill/gemeillen Struktur R1RzN-C(SCH3) = NRa . HI

Nr. Rl) ~ Ra P<-S'O(680 nm)2) }l('SO(7S0 nm)Z)

1 II II II 1,4:3 1,B6 2 ~le II H 1,26 1 .)') ,--:3 Et II II 1,:39 1,8;1 4 Prn II II 1,223) 1,223 )

5 Pri 1I II 0,983)4) 0,9.13)4) 6 All II II 1,41 1,81 7 Bun II IT 1,86 1,74 8 Bu i II II 1,673 ) 1,623)

9 Hexe II II 2,16 2,09 10 NHz II II 2,96 2,86 11 Ph H H 2,04 2,04 12 Ph Me H 2,06 1,98 18 Ph H Me 2,09 1,94 14 Ph Ph H 8,85 8,25 15 Ph II Ph 4,00 8,98 16 4-Me-Ph II 4-Me-Ph 4,12 4,00

1) 1\[e = Methyl, Et = Ethyl, Prn = n-Propyl, Pri = i-Propyl, All = Prop-2-enyl (Allyl), Bun = n-Butyl, Bui = i-Butyl, Hexe = Cyclohexyl, 4-Me-Ph = 4-Methylphenyl (p-Tolyl); bei Mono­substitution werden die Substituenten unabhiingig vom Syntheseweg (Abb.1) mit Rl bezeichnet.

2) pCSO = 19 {-~-} = -lg {EDso}, [EDsol = mol· 1-1 ; aus Dosis-Wirkungs-Beziehungen gcmaf.i EDso

Abb.2 ermittelte negative dekadische Logarithmen der molaren Effektorkonzentrationen, welche eine 50%ige Hemmung des autotrophen Wachs turns synchroner Chlorella-vulgaris-Suspensions­kulturen bewirken; den Werten liegen jeweils Extinktionsmessungen bei 680 (PCSO (680 nm») bzw. 750 nm (PCSO(7S0 nm») nach 6 h Testdauer zugrunde.

3) Yerbindungen kristallin nicht zuganglich und daher in der ethanolischen Mutterlaugc definierter Ausgangskonzentration getestet.

4) Extrapoliertc WertI'.

Die dabei aus Extinktionsmessungen bei 680 bzw. 750 nm erhaltenen wirkstoff­spezifischen Aktivitatsparameter pCso (Tabelle 1) korrelieren infolge kompatibler Sub­stituentenabhangigkeit hochsignifikant [Gleichung (2)], weshalb zur Ermittlung der im Folgenden diskutierten quantitativen Struktur-Wirkungs-Beziehungen ausschlieBlich die erstgenannten Aktivitatsdaten (pc50 (680 nm») Berucksichtigung fanden.1)

pc50 (680 nm) = 1,010 pC50 (750 nm) + 0,049 n = 16 r = 0999 s = 00442) , " ,

(2)

1) Die jeweiligen QSWB beziiglich PCSO(7S0 nm) unterscheiden sich bei vergleichbaren Regressions­koeffizienten (Anstiegen) von den hier aufgefiihrten Zusammenhangen lediglich in ihren Regressions­konstanten (absoluten Beitragen) und sind iiber Gleichung (2) abzuschiitzen.

2) n = Stichprobenumfang, r = Korrelationskoeffizient, s = Standardabweichung (Wurzel aus der Streuung urn die empirische Regressionsgerade(-ebene).

Hemmung des autotrophen Wachstums bei Chlorella 363

Tabelle 2. Elektronische (a*), sterische (v:x.) und hydrophobe (;n;) Substituentenparameter zur Wirkstoff-beschreibung

Nr. R1) a*2) vx3) ;n;4)

1 H 0 0 0 2 Me -0,490 0,52 0,57 3 Et -0,590 0,56 1,00 4 Prn -0,605 0,68 1,50 5 Prj -0,680 0,76 1,30 6 All -0,3405) 1,2()6) 7 Bun -0,620 0,68 2,00 8 Bu! -0,615 0,98 1,93 9 Hexc -0,640 0,87 2,517)

10 XH2 -1,237)

11 Ph 0,110 1,66 1,967)

12 4-Me-Ph -0,03748) 2,18 2,509)

1) VgI. Tabelle 1. 2) Auf a*H = 0 bezogene polare Substituentenkonstanten nach TAFT (1956). 3) Uber Van-dcr-Waals-Radien abgeleitcte sterische SUbstituentenparameter (CRARTON 1975). 4) Aus molalen Wasserliislichkciten aliphatischer Alkohole crmittelte Hydrophobizitatsparameter

gesiittigtcr acyclischer Alkylgruppen (KRAMER 1981), Werte gerundet. 5) Nach KRA:~[ER (1986) berechnet. 6) Doppelbindung: .1n = -0,3, bezogen auf den korrespondierenden n-Alkyl-Substituentcn (vgI.

LEO et al. 1971). 7) Aus Verteilungsdaten (lg P) substituierter Benzene im System n-Octanol/Wasser ermittelte hydro­

phobc SUbstituentenparameter nach HANSCR et aI. (1973b). 8) Mit a*x.Ph = 0,720 ax + 0,575 (vgI. FRANKE 1980) berechnet. 9) Zur quantitativen Beschreibung des hydrophoben Einflusses der am Phenylring in 4(para)­

Position gebundenen ~Iethylgruppe wurde n4-Me = 0,54 (Benzamid-Standardserie, HANSCR et aI. 1973a) herangezogen und zu nph = 1,96 zuaddiert.

Multiple lineare Korrelationen/Regressionen auf der Grundlage der in den Tabellen 1 und 2 ausgewiesencn Aktivitats- bzw. Strukturparameter fiihren hinsichtlich der Ge­samtheit des verfiigbaren Datenmaterials lediglich zu sachlich oder mathematisch wenig gesicherten Zusammenhangen [Gleichungen (3)-(5)], welche anzuzweifeln bzw. im Ergebnis statistischer Vberpriifungen (t-Test, <X = 0,05) abzulehnen sind.

pc50 (680 nrn) = 0,561 Z n + 0,996 Z a* + 1,2101) (3) 11 = 142), r = 0,970, s = 0,265

pc50 (6S0 nrn) = 0,331 Z n + 0,384 Z Vx + 0,786 11 = 14, r = 0,937, s = 0,381

pc50 (680 nrn) = 0,662 Z n + 1,116 Z a* - 0,128 1: Vx + 1,228 11 = 14, r = 0,970, s = 0,274

( 4)

(5)

1) Dei 1Ichrfachsubstitution wird gcnerell Additivitiit der in Tabelle 2 ausgewiesenen Substi­tucntenparameter angenommen (~Jr, ~ a*, ~ Vx ).

2) Antler Verbindnngen Nr. 6 und 10 (Tabelle 1).

25 Biochern. Physiol.PfJanzen, Bd.1Sl

364

-0,2

-0,3

-0,4

1-0,5 I I !

19 E

1-0,7

-0,8

-0,9 680 nm

-1,0 < 750 nm .........

-1,1

TH. SCHELENZ und P. BORDES

. .-- .

----

.---- .

----

K

,/1

2

._._._.-.-3

. _. -.- 4 _.-'-.-' ..-

II,

Abb.3. Zeitliche Anderung der als Wachstumsparameter fungierenden Logarithmen der ExUnktionen wirkstoffbehandelter Chlorella-vulgaris-Suspensionen (Wirkbilder). -- Ig E680 nm (Charakterisierung des Zellvolumens und der Chlorophyllentwicklung), -' -lg E7,o nrn

(Beurteilung des Zellvolumens); Wirkstoff: 1,3-Di-( 4-methylphenyl)-2-methyI-isothioharnstoff­hydroiodid; 1: 2,44· 10-· M:; 2: 7,32· 10-· M:, 3: 1,34' 10-4 M:, 4: 2,44.10-4 M:, K = Kontrolle.

Eine nach Abb. 4 mogliche, im wesentlichen aber nur durch die Verbindungen Nr.1 und 10 (Tabelle 1) gestiitzte parabolische Beziehung zwischen Aktivitats- und Hydro­phobizitatsparametern ist zwar durch einen statistisch signifikanten, theoretisch jedoch schwer zu interpretierenden Ausdruck zu beschreiben und sollte zufallig sein [Gleichung (6)].

pc50 (680 nm) = 0,205 (Z n)2 - 0,407 Z n + 1,693

n = 16, r = 0,928, s = 0,390

(6)

Dagegen werden bei Vernachlassigung der im Sinne iiberhohter Wirksamkeit abwei­chenden Verbindungen Nr. 1 und 10 sachlich fundierte (FRANKE 1970, 1980) lineare Hydrophobizitats-Aktivitiits-Beziehungen nachgewiesen [Gleichung (7)], welche a,uch

Hemmung des autotroph en Wachstums bei Chlorella 365

4,5 [

R SMe l ' I + _ ;:N-C=NH-R3 I

R2 .J

4,0

3,5

0'0 \

3,0

PC SO (680nnlJ

2,5

2,0

1,5

1,0

-1 3 4 5

Abb.4. Beziehungen zwischen den Logarithmen der algistatischen Wirkquantitiiten (PC50(680 nrn) sub­stituierter 2-Methyl-isothioharnstoff-hydroiodide und hydrophoben SUbstituentenparametern (2:n). I: QSWB gemaB Gleichung (6), II: QSWB gemaB Gleichung (7); Daten, Symbole und Bezifferung entsprechend Tabelle 1 und 2.

bei zusatzlicher Beriicksichtigung elektronischer und sterischer EinfluJ3groJ3en keine wesentliche Verbesserung erfahren. Auf die Angabe dieser statistisch nicht signifikanten Zusammenhiinge wurde deshalb verzichtet.

pCSO (680) = 0,767 Z n + 0,368 n = 14, r = 0,957, s = 0,304

(7)

Werden die Substituentenpositionen 1 (N1) und 3 (N2) hinsichtlich der Starke und Richtung des Hydrophobizitatseinflusses getrennt behandelt, resultiert Gleichung (8) als mathematisches Modell zur quantitativen Beschreibung hydrophober Substituenten­effekte auf die betrachtete Wirkqualitat.

25*

pCso (680 nm) = 0,645 Z nRl/Rl) + 0,892 nR3 + 0,558 n = 14, r = 0,965, s = 0,284

(8)

366 TH. SCIIELENZ und P. BORDES

4,0

3,5

3,0

PC SOt680nm, ITH)

2,0

1,5

1,0

1,0 1,5 2,0 -- PC SO(680n m,T HI --

4,0 .:I,'; 5,0

Abb. 5. KorTelativer Zusammenhang zwischen den an Chlorella vulgaris ermittelten Aktivitiitspara· metern gleichartig substituierter Thioharnstoffe (PCao(680 nm. TIl') und 2-Methyl-isolhioharnsloff-hydroio­dide (PC60(880 nm. ITH') It. Gleichung (9). Daten, Symbole und Bezifferung entsprechend Tab. 1 bzw. SCHELENZ und KRAMER (1985).

Allerdings sind den in Gleiehung (8) enthaltenen partiellen Regressionskoeffizienten auf einem Signifikanzniveau IX = 0,05 Konfidenzintervalle von 0,645 + 0,215 bzw. 0,892 + 0,217 zuzuordnen, womit Gleichung (8) aus statistischer Sieht in Gleiehung (7) ubergeht.

Unter diesen Voraussetzungen sind die im Rahmen dieser Arbeit ermittelten experi­mentellen Daten mit den en korrespondierender Thioharnstoffe (SCHELENZ und KRAMER 1985) vergleiehbar und berechtigen zu einer quantitativen Betrachtung der fUr beide Wirkstoffgruppen erhaltenen Aktivitatsparameter [Gleiehullg (9), Abb. 5].

pcso (680 nm IT H) = 1,007 peso (680 nm, TH) - 0,444 n = 131), r = 0,928, s = 0,320

(9)

Nach Gleichung (9) erweisen sich die hier getesteten Isothioharnstoff-hydroiodide bei generell kompatibler Substituentenabhangigkeit deutlich weniger aktiv als die ent-

I) AuBer Verbindungen Nr. 11,14 und 16 (Tabelle 1) 2) Ursachen hierfiir sind neb en dem ionischen Charakter der getesteten Vel'bindungen vor allem

in einem veranderten Bedingungsgefiige (Losungsmittel Ethanol fiir DimethyIsuIfoxid) zu sehen.

Hemmung des autotrophcn Wachstums bei Chlorella 367

sprechenden Ausgangsverbindungen (J pc50 (680 nm) = -0,43) und ordnen sich nicht in die bisher fur 77 Harnstoffderivate der allgemeinen Struktur

XR3

Ii R1 RzN--C=NR4 R5

(s. SCHELENZ und KRAMER 1985; KRAMER et al. 1985) an Chlorella vulgaris gefundene QSWB ein.2)

Dessen ungeachtet erlauben die vorgeschlagenen quantitativen Struktur-Wirknngs­Beziehungen eine genugend sichere Abschiitzung der algistatischen Aktivitiit weiterer Analoga der behandelten Wirkstoffserie.

Sie ermoglichen somit als praxisrelevante Konsequenzeine spurbare Verringerung des erforderlichen Synthese- und Testaufwandes bei der Suchforschung nach potentielJen Wirkstoffen mit Isothioharnstoffstruktur.

Herm Prof. Dr. se. nat. C.-R. KRAMER danken fiir wir Anregungen und Hinweise.

Literatur

BOHM, H.: Das Chlorella-Testsystem (eine Ubersicht). Wiss. Hefte d. Pad. lnst. Kothen 2, 9-16 (1973a).

BOHM, H.: Konzeption fiir eine Anlage zur automatischen Produktion synchronen Zellmaterials einzelliger Griinalgen in Suspensionskultur. Wiss. Hefte d. Pad. Inst. Kothen 2, 217-220 (1973 b).

BOHM, H., KOCIlMANN, W., BARTH, A., GUNTHER, G., KRAMER, W., KRUGER, H., und LOTTGE, W.: Verfahren zur Selektion biochemisch wirksamer Substanzen. DD-Pat. 94234 (1972).

CRARTON, M.: Steric Effects. I. Esterification and Acid-Catalyzed Hydrolysis of Esters. J. Amer. chern. Soc. 97, 1552-1556 (1975).

DYSON, G. M., and GEORGE, H. J. : The Reactions of Thiocarbonyl Chlol"ide. Part 1. Reaction with Aromatic Primary Aminocompounds. J. chem. Soc. (London) 125, 1702-1708 (1924).

FINNEGAN, W. G., HENRY, R. A., and LIEBER, E.: Preparation and Isomerization of 5-Alkylamino­tetrazoles. J. org. Chemistry 18, 779-791 (1953).

FRANKE, R.: Homologe Serien hydrophober Verbindungen im Gleichgewicht zwischen einer wallrigen und einer hydrophoben Phase. II. Biologische Aktivitat und hydrophobe Wechselwirkungen mit dem Rezeptor. Acta bioI. med. germ. 25, 789-803 (1970).

FRANKE, R.: In: "Optimierungsmethoden in der Wirkstofforschung - Quantitative Struktur­Wirkungs-Analyse" (LoTZ, G., ETZOLD, G., DORING, D., SCHULZE, D., und KOSTER, T., Hrsg.), S. 27-165. Akademie-Verlag, Berlin 1980.

HANS CR, C., KIM, K. H., and SARMA, R. H.: Structure-Activity Relationship in Benzamides Inhibit­ing Alcohol Dehydrogenase. J. Amer. chern. Soc. 95, 6447-6449 (1973a).

HANSCIl, C., LEO, A., UNGER, S. H., Kn!, K. H., NIKAITANI, D., and LIEN, E. J.: "Aromatic" Substituent Constants for Structure-Activity Correlations. J. Med. Chem.16, 1207-1216 (1973b).

KIRSTEN, G. W., and SMITH, G. B. 1.: Reduction of Nitroguanidine. V. The Synthesis of (a')lX-Mcthyl-, (b) lX-Ethyl-, (c) lX-n-Butyl-y-arninoguanidine. J. Amer. chern. Soc. 58, 800-801 (1936).

KRAME R, C.-R.: n-Werte gesattigter acyclischer Alkylgruppen. Z. physik. Chern., (Leipzig) 262, 137-144 (1981).

KRAMER, C.-R.: Statistische Untersuchungen zwischen Substituentenkonstanten. VI. Zur Addithitat polarer Effekte aliphathcher Substituenten. Ein neuer Satz polarer Substituentenkonstanten (]w. Z. physik. Chern., Leipzig 267 (1986), im Druck.

368 TH. SCHELENZ und P. BORDES, Hemmung des autotrophen Wachstums bei Chlorella

KRAMER, C.-R., SCHELENZ, TH., und ARNDT, H.: Quantitative Struktur-Aktivitats-Beziehungen fiir die Wachs turns hem mung von Chlorella-vulgaris-Suspensionen durch 1-Amino-3-aryl-guanidine. Biochem. Physiol. Pflanzen 180, 565-577 (1985).

KRAMER, C.-Ro, SCHELENZ, Tn., und BORNS, E.: Quantitative Struktur-Aktivitats-Beziehungen fiir die Wachstumshemmung von Chlorella vulgaris-Suspensionen durch 1-Aryl-2-methyl-isothio­harnstoffe. Biochem. Physiol. Pflanzen 179, 419-431 (1984).

KUHL, A., and LORENZEN, H.: In: "Methods in Cell Physiology", Vol. 1 (PRESCOTT, D., Ed.), pp. 159 to 187. Academic Press, New York 1964.

KURZER, F.: o-Chlorophenylthiourca. Org. Syntheses 31,21-22 (1951). LEO, A., HANSCH, C., and ELKINS, D.: Partition Coefficients and their Uses. Chern. Reviews 71,

525-616 (1971). MOORE, }L L., and CROSSLEY, F. S.: Methylthiourea. Org. Syntheses 21, 83-84 (1941). SCHELENZ, TH., und KRAMER, C.-R.: Quantitative Struktur-Aktivitats-Beziehungenfiir die Hemmung

des autotrophen Wachstums synchroner Chlorella-vulgaris- Kulturen durch substituierte Thio­harnstoffe. Biochem. Physiol. Pflanzen 180, 353-369 (1985).

SCHUBERT, M., und SCHUTZ, K.: Verfahren zur DarsteIIung von unsymmetrischen Thioharnstoffen. DR-Pat. 604639 (1934).

TAFT, R. W.: In: "Steric Effects in Organic Chemistry" (NEWMAN, l\L S., Ed.), pp. 556-675. Wiley, New York 1956.

Eingegangen am 15. August 1985; akzeptiert am 3. J anuar 1986

Ansehrift der Verfasser: Dr. rer. nat. THOMAS SCHELENZ und Dipl.-Lehrer PIA BORDES, Padago­gisehe Hoehsehule "Wolfgang Ratke" Kothen, Sektion BiologiejChemie, LohmannstraBe 23, DDR - 4370 Kothen.