VECTOR Laboratories - Blocking Reagenzien · Abb. 1: Endogene alkalische Phosphatase (AP) und Per-...

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FORSCHUNGSPRODUKTE

VECTOR Laboratories - Blocking Reagenzien

BLOXALL Endogenous Peroxidase/Alkaline Phosphatase Blocking Solution

Gewebe können endogene Peroxidasen, Pseudo-peroxidasen und/oder alkalische Phosphatasen ent-halten. Bei der Anwendung eines alkalischen Phos-phatase- und/oder Peroxidase-Detektionssystems mit dementsprechenden Substraten kann deren Ak-tivität den Hintergrund unspezifisch erhöhen. Hier bietet BLOXALL von VECTOR eine elegante Lösung, dieses Problem zu eliminieren.

Abb. 1: Endogene alkalische Phosphatase (AP) und Per-

oxidase (HRP) Aktivitäten in gefrorenen Darmschnitten

gezeigt mit Vector Red AP Substrate (rot) und ImmPACT

DAB HRP Substrate (braun, links). Das Gleiche unter

Verwendung von BLOXALL (rechts), welches diese endo-

genen Enzymaktivitäten eliminiert.

Eigenschaften

� Inhibiert endogene Peroxidasen, Pseudoperoxi-dasen und alkalische Phosphatasen

� „Ready-to-use“ Format � Einfaches „one-step“-Protokoll � Kompatibel mit Formalin-fixierten, Paraffin-

eingebetteten Gewebeschnitten, gefrorenen Ge-webeschnitten und Zellpräparationen

� Effektiver als konventionelle Blockiermethoden

Levamisole Solution

Unspezifische Färbungen endogener alkalischer Phosphatasen können bei der Verwendung eines De-tektionssystems für alkalische Phosphatasen und dem dazugehörigen Substrat mittels Levamisol Blockierreagenz eliminiert werden.

(Strept-)Avidin/Biotin Blocking Kit

Mit diesem Kit können alle endogenen Biotin-, Bio-tinrezeptor- und (Strept-)Avidin-Bindestellen eines Gewebes blockiert werden. Der Kit ist dafür ausge-legt, mit Biotin/(Strept-)Avidin Detektionssystemen (z.B.: VECTASTAIN ABC Kits, VECTASTAIN Univer-sal Quick Kits) hervorragende Ergebnisse zu erzielen und ist vor allem dann ein wesentlicher Vorteil, wenn (Strept-)Avidin oder biotinylierte Reagenzien unspezifisch in Gewebeproben oder an Proteinen binden.

Produktinformation

Art.bezeichnung Menge Kat.Nr.

BLOXALL Blocking Solution

100 ml VECSP-6000

Levamisole Solution 18 ml (konz.)

VECSP-5000

Avidin/Biotin Blocking Kit

1 Kit VECSP-2001

Streptavidin/Biotin Blocking Kit

1 Kit VECSP-2002

April 2013

Forschungsprodukte … 1 diAgnostik … 6 Zellkultur … 9 geräte … 10 hlA-diAgnostik … 15

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Weitere Blocking-Reagenzien

VECTOR bietet neben diesen speziellen Lösungen zusätzlich auch konventionelle Blocking-Reagenzien an. Zu diesen zählen folgende Produkte: � Normalseren aus Ziege, Pferd, Huhn, Schwein

oder Hase � 2,5% Normalserum (Hase) � BSA („Immunohistochemical Grade“):ultrareines

Reagenz zur Verdünnung oder zum Blockieren. Es eignet sich ideal für IHC-Färbungen, ELISAs oder verschiedene Blotting Techniken, da es frei von Verunreinigungen ist und somit keine Artefakte oder Hintergrundfärbungen in diesen Anwendun-gen produziert.

� Casein-Reagenz: dient generell zum Blockieren bei histochemischen und Nukleinsäure-bezogenen Anwendungen, sowie beim Blotten von Proteinen.

� Carbo-Free Blocking-Lösung: bietet im Gegensatz zu Serum, Magermilchpulver, Casein und anderen etablierten Blocking-Möglichkeiten den Vorteil, dass es frei von Glykoproteinen ist. Es eignet sich deshalb besonders für Anwendungen mit Lekti-nen, wo eine Kontamination mit Glykoproteinen zu unspezifischer Färbung des Hintergrunds oder zu falsch-positiven Ergebnissen führen kann.

� Animal-Free Blocker-Reagenz: stammt aus Pflan-zen und bietet den Vorteil, dass es somit kein tie-risches Protein enthält. Man kann es als Alterna-tive zu Serum, BSA, Casein oder Magermilchpul-ver verwenden.

Produktinformation

Art.bezeichnung Menge Kat.Nr.

Normal Serum 20 ml je nach Spezies

2,5% Normal rabbit serum

50 ml VECS-2012

Bovine Serum Albumin (BSA)

500 mg VECSP-5050

10x Casein Solution 250 ml VECSP-5020

Carbo-free Blocking Solution

125 ml VECSP-5040

Animal-free Blocker 250 ml VECSP-5030

Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an

Mag. Simon Brandstetter Tel.: 01/4893961-30 [email protected]

DAKO – Durchflusszyto-metrie: neuer Farbstoff CD19/PerCP-Cy5.5

CD19 ist ein Transmembranglykoprotein und ein Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie. Dieses Molekül ist ein kritischer Bestandteil der Signal-transduktion, welche die Entwicklung, Aktivierung und Differenzierung von B-Lymphozyten reguliert. Die Expression von CD19 ist auf B-Zellen be-schränkt – T-Zellen, Monozyten und Granulozyten weisen keine Expression von CD19 auf. Das CD19-Antigen erscheint bereits früh bei der Reifung von B-Zellen an deren Oberfläche, wahrscheinlich während des späten pro-B-Zell-Stadiums (in etwa zu der Zeit in der sich die schweren Ketten neu anordnen). Es bleibt dann während allen Stadien der B-Zell Rei-fung bestehen und verschwindet mit der abschlie-ßenden Differenzierung zu Plasmazellen. Weiters wird CD19 auch auf follikulären Zellen exprimiert. Bei B-Zell Leukämien und Lymphomen zeigt sich, dass dieses Antigen kaum verloren geht. PerCP-Cy5.5 ist ein Tandem-Fluorochrom, welches sich bestens für die Verwendung zur Mehrfarben-Durchflusszytometrie eignet. Dabei wird der Peridi-nin Chlorophyl Proteinkomplex (perCP) – ein ca. 35 kDa schweres karotinoides Pigment welches in pho-tosynthetischen Dinoflagellaten (Glenodinium) vor-kommt – mit einem Standardlaser bei 488 nm an-geregt.

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Die dabei absorbierte Energie wird auf das daran gekoppelte Cy5.5-Konjugat übertragen, welches das Licht im langwelligen roten Bereich bei einem Emis-sionsmaximum von 691 nm emittiert. Deshalb ist der störende Effekt in den PE- und APC-Kanal mi-nimal.

Abb. 1: Knochenmarksanalyse eines Patienten

Produktinformation

Bezeichnung Menge Kat.Nr. CD19/PerCP-Cy5.5

1ml DAKPR703

IgG1/PerCP-Cy5.5

1ml DAKX7914


Mag. Simon Brandstetter Tel.: 01/4893961-30 [email protected]

Endotoxin-Testsysteme von LONZA: Technische Tipps

Seit Februar dieses Jahres können wir Ihnen von un-serem Partner LONZA auch alle Endotoxin-Tests an-bieten. LONZA bietet in diesem Bereich eine breite Produktpalette an. Welcher der verfügbaren Tests für Sie der am besten geeignete ist, liegt letzten En-des an Ihnen selbst.

Eine Frage ist die Probenanzahl, die Sie in einem bestimmten Zeitraum testen möchten. Weiters ist zu bedenken, welche Aussage Sie treffen möchten. Ist es nur eine einfache „Ja/Nein“ Aussage oder müssen Sie auch eine quantitative Aussage erhalten? Haben Sie Erfahrung in diesem Bereich und welches Equipment steht Ihnen zur Verfügung? Natürlich sind wir Ihnen gerne bei der Auswahl des richtigen Tests für Ihre Ansprüche behilflich. Anhand von zwei unterschiedlichen Methoden soll hier aufgelistet werden, was Sie noch beachten soll-ten. Außerdem zeigen diese Beispiele auch mögliche Probleme auf, an die man grundsätzlich denken muss, wenn man sich mit der Materie Endotoxin-Tests beschäftigt.

PyrogentTM Gel Clot

Dieser Test wird gerne gewählt wenn man einen En-dotoxin-Test ohne quantitative Aussage machen möchte. Doch auch ein auf den ersten Blick einfach durchzuführender Test birgt gewisse Fallen, die zu einem falschen Ergebnis führen können. Häufige Ur-sachen sind das verwendete Material, die Gerät-schaften oder die Techniken. Um die Endotoxin Kontrollstandards (CSE, Control Standard Endotoxin) in den nötigen Verdünnungen herstellen zu können muss in pyrogenfreien Glasröhrchen wie Artikel LONN207 gearbeitet werden. Der Grund für Glas ist, dass sich Endotoxin an Plastik heftet. Ein weite-rer wichtiger Punkt ist das sorgfältige Vortexen der Standards und der Proben. Alle Reagenzien sollten auf Raumtemperatur gebracht werden. LONZA emp-fiehlt bei der Durchführung eines LAL-Tests die Ver-wendung von 10x75 mm pyrogenfreien Reaktions-röhrchen aus Glas.

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Für die Gel Clot Tests werden die Röhrchen mit der Katalognummer LONN201 oder LONN205 empfoh-len.

Für die Inkubation bei 37°C (± 1°C) für 60 Minuten (± 2 Minuten) sollte entweder ein Wasserbad ohne Zirkulationsfunktion oder ein Thermoblock mit ak-zeptabler Temperaturuniformität verwendet werden.

In jedem Fall sind Inkubatoren oder ähnliches zu vermeiden, da hier kein konstanter Temperaturtrans-fer gewährleistet werden kann. Die Geräte sollten auch auf einer vibrationsfreien Oberfläche platziert werden.

Das LAL-Reagens (LAL = Limulus Amöbocyten Ly-sat) muss entsprechend der Kit-Beschreibung be-handelt werden. Das bedeutet, dass das rekonstitu-ierte LAL nie gevortext werden darf. Weder vor und schon gar nicht nach der Zugabe zu CSE und Probe. Das Röhrchen sollte nur sanft bewegt und dann in-kubiert werden. Während der vorgeschriebenen 60 Minuten Inkubation dürfen die Röhrchen weder be-wegt noch darf die Inkubation unterbrochen werden. Der Aufbau des Clots beruht nur auf elektrostati-schen Wechselwirkungen.

Nach der Inkubation werden die Röhrchen in ei-ner einzigen, durchlaufenden, sanften Handbewe-gung um 180° gedreht.

Das Ergebnis ist nur dann positiv, wenn der Clot in der 180° Position am Boden des Röhrchens voll-ständig haften bleibt. Ein positives Ergebnis muss auf alle Fälle bei 2� gegeben sein. Das ist das Dop-pelte der auf der Packung indizierten Sensitivität. Man sollte vermeiden, das gesamte Rack aus der Inkubation zu entnehmen und irgendwo abzustellen.

Es besteht auch die Möglichkeit eines falsch-positiven Ergebnisses. Dazu kann es durch eine Kontamination mit Endotoxin kommen. Mögliche Quellen hierfür sind die falschen Röhrchen, Pipet-tenspitzen, serologischen Pipetten und natürlich das Wasser, das für Rekonstituierung und Verdünnung verwendet wurde.

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QCL-1000TM: Endpoint Chromogenic LAL Assay

Dieser Assay passt für Anwender, die schnelle Re-sultate benötigen oder für kleine Labore mit limitier-ten Ressourcen.

Dieser quantitative Endpunkt-Assay kann in 16 Mi-nuten erledigt werden. Der Sensitivitätsbereich liegt zwischen 0,1 und 1 EU/mL und das Endotoxin wird photometrisch bestimmt.

Auch wenn der Test an sich einfach durchzuführen ist können anfänglich Probleme auftauchen.

Einige davon werden hier samt möglicher Lösung beschrieben. Es ist auch hier unbedingt notwendig, Glas-Röhrchen für die Verdünnungsschritte zu verwen-den. Natürlich gibt es Kunststoffmaterial, welches auf Endotoxin-Gehalt getestet wurde. Häufig verges-sen wird aber die Tatsache, dass Endotoxin an Kunststoffe bindet und die Ergebnisse damit ver-fälscht werden und nicht mehr reproduzierbar sind.

Darüber hinaus können Kunststoffprodukte undicht sein bzw. können im Rahmen der Herstellung Sub-stanzen verwendet worden sein, die mit dem Test interferieren. Generell sollten alle Gefäße aus Glas sein, egal ob darin der Test durchgeführt oder etwas gelagert wird. An dieser Stelle sei auf die Test-Röhrchen LONN207 verwiesen.

Die Inkubation ist ein kritischer Schritt im Test. Da die Inkubationszeit sehr kurz ist können schon ge-ringe Zeitänderungen Einfluss auf das Ergebnis ha-ben. Weiters ist es wichtig, auf eine gleichmäßige Temperaturverteilung zu achten. Wenn Sie in einer 96 Well Platte arbeiten, sollten Sie eine von LONZA zertifizierte Platte verwenden.

Weiters können Fehler bei der Herstellung des 1 EU/Standards passieren. Der Gehalt des lyophili-sierten Endotoxins ist von LOT zu LOT unterschied-lich und die entsprechende nötige Verdünnung ist dem beigefügten Analysenzertifikat (COA) zu ent-nehmen. Zur Verdünnung muss LAL-Wasser ver-wendet werden und das rekonstituierte Endotoxin muss mindestens 15 Minuten gevortext werden. Je-der Standard muss vor jeder weiteren Verdünnung mindestens eine Minute gevortext werden. Das Lysat hingegen sollte nicht auf den Vortex. Es handelt sich um eine Mischung aus Proteinen, diese würden bei zu starkem Schütteln eventuell denaturieren. Die Folge wäre ein Verlust von Sensitivität.

Auch bei diesem Test kann es zu falsch-positiven Ergebnissen kommen. Die Gründe sind an sich die gleichen wie beim Gel Clot Test.

Grundsätzlich sind die Endotoxin Tests von LONZA einfach durchzuführen und liefern verlässliche Re-sultate.

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Hier noch einmal ein Überblick aller von LONZA er-hältlichen Endotoxin-Tests:

Endotoxin Detection Methods

Quantitative MethodsQualitative Methods

PYROGENT Gel Clot Assay

Photometric

FluorescentPyroGene rFC Endpoint

Fluorescent Assay Chromogenic LAL

Turbidimetric LALPYROGENT-5000

Kinetic Turbidimetric Assay

Kinetic Chromogenic LALKinetic-QCL Kinetic

Chromogenic LAL Assay

Endpoint Chromogenic LALQCL-1000 Endpoint

Chromogenic LAL Assay


Dr. Andreas Bergmann Tel.: 01/4893961-40 [email protected] oder an Mag. Norbert Wahler Tel.: 01/4893961-55 [email protected]

DIAGNOSTIK

CML-Diagnostik: Von der Detektion bis zum Monitoring

Die chronische myeloische Leukämie (CML) ist eine chronische Leukämie, die mit einer starken Vermeh-rung von Leukozyten einhergeht. Die CML hat eine Inzidenz von etwa 1,6 Neuerkrankungen pro 100.000 Erwachsenen im Jahr und macht etwa 20 Prozent aller Leukämien aus. Sie ist überwiegend eine Erkrankung des Erwachsenenalters und weist eine stetige Zunahme mit zunehmendem Alter auf.

Männer sind etwa 1,4-mal häufiger betroffen als Frauen1. In fast allen Fällen findet man als Ursache ein sogenanntes Philadelphia-Chromosom, das durch eine reziproke Translokation zwischen den Chromosomen 9 und 22 (geschrieben t(9;22)) ent-standen ist2.

Der Chromosomenbruch liegt auf beiden Chromo-somen im Bereich von Genen, nämlich ABL auf Chromosom 9 und BCR ("breakpoint cluster regi-on") auf Chromosom 22. Durch die Translokation kommt es also zur Bildung von Fusionsgenen: BCR-ABL auf dem veränderten Chromosom 22 (mit dem Ende des Chromosoms 9) und ABL-BCR auf dem veränderten Chromosom 9 (mit dem Ende von Chromosom 22). Das ABL-Gen kodiert für eine Ty-rosinkinase und spielt eine wichtige Rolle bei der zellulären Wachstumsregulation. Kommt es zur Bil-dung des Fusionsgens BCR-ABL, dann ist ABL ent-scheidend in seiner Funktion gestört, die Tyrosin-kinase-Aktivität ist dauerhaft aktiviert. Das BCR-ABL-Gen wirkt damit als Onkogen und führt zu einer gesteigerten und unkontrollierten Vermehrung der betroffenen Zelle, wobei es drei klinisch relevante Varianten des Fusionsgens p190, p210 und p230 gibt. Die Translokation ist im Laufe des Lebens er-worben und nicht vererbt oder vererbbar. Warum sie auftritt, ist nicht bekannt. Als Risikofaktoren werden ionisierende Strahlung oder Chemikalien diskutiert3. 1 SEER Stat Fact Sheets: Chronic Myeloid Leukemia

2008; 2 Nowell PC, Hungerford DA 1960; J Natl Cancer Inst

25:85-109; 3 Hochhaus A 2007 in Therapiekonzepte Onkologie,

Springer-Verlag Heidelberg, S. 293

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PHILADELPHIA NESTED PCR

Die Firma ELITech Molecular Diagnostics bietet eine komplette Lösung für die Detektion und Therapie-Monitoring der CML an.

� Sensitiver als FISH � Bestätigung der Translokation

(Philadelphia-Chromosom) � Unterscheidung der Fusionsgene:

p190, p210, p230 � Philadelphia oligomix Alert Kit (NAGBANG07) � Philadelphia – Positive Kontrolle (NAGCTRG07)

� Quantifizierung der Transkriptmenge � Definition der richtigen Medikamentation � Philadelphia p210 Q-PCR Alert Kit

(NAGRTSD07-210) � Philadelphia p210 Q-PCR Standard

(NAGSTDG07-210) � Philadelphia p190 Q-PCR Alert Kit

(NAGRTSG07-190) � Philadelphia p190 Q-PCR Standard (NAG-

STDG07-190) Die Quantifizierung des Transkripts erfolgt mittels der Standardkurve. Die 2 in 1 Standards (105, 104, 103, 102) beinhalten sowohl das Fusionsgen wie auch das Haushaltsgen ABL in einem Plasmid im Verhältnis 1:1, um das korrekte molekulare Ergebnis zu garantieren.

Diese neue Plasmidstruk-tur vermeidet die Verwen-dung von zwei Plasmiden, was zu Fehlern aufgrund unterschiedlicher Kinetik führen könnte. ELITech Molecular Diagnostics bietet zusätzlich die Philadelphia p210 RNA Reference (NAGSPG07-210) an. Dabei ist RNA von t(9,22) von K562 Zel-len in gesunder HL60 Zelllinie in vier BCR-ABL Kon-zentrationen erhältlich. Dies ist ein wichtiges Hilfs-mittel, empfohlen von European Leukemia Net und Europe Against Cancer, für die Standardisierung der BCR-ABL RT-PCR Analytik von Home-Brew RT-PCRs entsprechend internationaler Standards.


Dr. Kamilla Nawrot-Wawrzyniak Tel.: 01/4893961-26 [email protected]

Die Firma CLONIT ist spe-zialisiert auf End-Point (Einzel oder Nested) PCR Produkte.

Die neuen FAST-Taq PCR Kits/Reagenzien und Multiplex FAST PCR Kits/Reagenzien zum Nach-weis von Bakterien, Viren, Parasiten sowie einigen genetischen Parametern mittels vorgefertigter Gele (EtBr-frei) weisen folgende Vorteile auf: � Eine einzige DNA/RNA-Extraktion von einer Probe

für Multiplex-Produkte � Einheitliches Amplifikationsprotokoll � 17µl Mastermix + 3µl DNA � One-Step Gel-Trennung: einfach 10µl vom Ampli-

kon in die Geltaschen pipettieren � Keine weiteren Reagenzien notwendig � „FAST“ Protokoll: in weniger als eine Stunde von

der Extraktion bis zum Ergebnis � Hohe Sensitivität und Zuverlässigkeit � Wenige manuelle Arbeitsschritte � Keine toxischen oder gefährlichen Reagenzien � Kostengünstig: bis zu 5 Ergebnisse auf einmal bei

Multiplex-Produkten

rd ((NAG

Kit

(N

PHILADELPHIA REAL TIME

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Verfügbare Produkte:

Viren: HCV, HBV, HDV, HIV, HHV-6, HPV-Screening, HPV-11, HPV-16, HPV-18, HPV-33, Parvovirus B19, Poliovirus, CMV, JCV, HSV 1 und II, EBV, VZV Bakterien: Helicobacter pylori, Mycobaterium tu-berculosis, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniea, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Borrelia burgdorferi, Neisseria gonor-rhoeae, Ureoplasma urealyticum, Clostridium diffi-cile, Mycoplasma hominis, E.coli O157;H7, Sal-monella spp., Listeria monocytogenes Parasiten/Protozoen: Toxoplasma gondii, Plasmodi-um Screening, Plasmodium falciparum, Plasmodi-um ovale, Plasmodium vivale, Plasmodium mala-riae, Leismania spp. Genetische Parameter: Factor V Leiden, Factor II, MTHFR (G20210A), MTHFR (A1298C), HLA-B27 Multiplex FAST PCR-Kits detektieren simultan ver-schiedene Pathogene im gleichen Probenamplifikat. Derzeit werden folgenden Panels angeboten: Multiplex STD Panel (sexualübertragene Krankhei-ten) - CLOCL95: Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Ureoplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium Multiplex HPV Screening und High Risk Nachweis - CLOCLO7HR: L1 Gen für Screening-Zwecke, onko-gene Region E6/E7 Multiplex Atypische Bakterien Pneumoniae - CLOCL96: Chlamydophila pneumoniae, Mycoplas-ma pneumoniae, Legionella pneumophila Multiplex Fäkale Enterokolitis Bakterien 1 - CLOCL97: Shigella spp., Salmonella spp. , Cam-pylobacter spp Multiplex Fäkale Enterokolitis Bakterien 2 - CLOCL99: E.coli O157:H7, Yersinia enterocolitica, Clostridium difficile Multiplex Fäkale Parasiten - CLOCL98: Cryptospor-idium parvum, Entamoeba histolytica, Giardia lamblia Multiplex Parodontal Erkrankungen - CLOCL65 A.actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Porhyromonas gingivalis

Abb.: Beispiel einer simultanen Detektion von verschie-denen Pathogenen. 1. 100bp Basenmarker 2. Entamoeba histolytica (308 bp) 3. Criptosporidium parvum (138 bp) 4. Positive Kontrolle für Fäkale Parasiten Panel 5. Yersinia enterocolitica (151 bp) 6. Campylobacter jejuni (344 bp) 7. Positive Kontrolle für Fäkale Bakterien Panel 8. Chlamydia trachomatis (323 bp) 9. Mycoplasma hominis (137 bp) 10. Ureaplasma urealyticum (219 bp) 11. Positive Kontrolle für STD Panel

Die Firma bietet zusätzlich ein innovatives Detekti-onssystem mit dem Markennamen CLONPACT an. Dabei werden die DNA und RNA Trennungen mittels Gel-Elektrophorese mit integrierter Elektrophorese-Kammer, Elektroversorgung und UV-Illuminator durchgeführt. Die Amplifikationsprodukte werden in die Slots des gebrauchsfertigen, vorgefertigten Aga-rose-Gels (CLONGEL) pipettiert, das Ethidiumbro-mid-frei in einem 11-Slot-Format geliefert wird. Mit Hilfe des USB-Kamera Systems (CLONIT KAMERA SYSTEM) inklusive Software zum Nachweis von elektrophoretischen Mustern werden die PCR-Produkte überprüft. Aufnahmen und Daten können abgespeichert werden.

ZELLKULTUR _________________________________________________________________________________________________ NEWSLETTER

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Vorteile:

� Anwenderfreundlich Komplettes System Keine Gel-Manipulation Direkte Übertragung der elektrophoretischen Muster zum PC in Echtzeit

� Schnell 10 Minuten bis zu den Ergebnissen und zur Datenspeicherung

� Sicherheit Agarose-Gel ohne EtBr Elektrophorese ohne Berührung des Gels Zugabe von Zusatzreagenzien nicht erforderlich

� Kostengünstig Vergleichbare Kosten wie bei traditioneller Agarose-Gel Vorbereitung


Dr. Kamilla Nawrot-Wawrzyniak Tel.: 01/4893961-26 [email protected]

ZELLKULTUR

CORNING - Neue Cryo-Röhrchen mit farbigen Kappen

Unsere Partnerfirma CORNING-Costar hat ihre Pro-duktpalette der Cryo-Röhrchen um 6 Artikel erwei-tert. Die neuen selbst-stehenden Röhrchen mit ei-nem Volumen von 2 ml haben ein internes Gewinde und sind gleich dem bereits bestehenden Artikel COR430488. Neu ist die Verfügbarkeit fünf ver-schiedener Farben für die Kappen: Gelb, Blau, Grün, Rot und Weiß.

Darüber hinaus ist ein Artikel verfügbar, in dem alle Farben gemischt sind. Art.Nr. Beschreibung VPE

COR431416 Cryo-Röhrchen, alle Farben

50/Pk, 500/Cs

COR431417 Cryo-Röhrchen, gelbe Kappe

50/Pk, 500/Cs

COR431418 Cryo-Röhrchen, blaue Kappe

50/Pk, 500/Cs

COR431419 Cryo-Röhrchen, grüne Kappe

50/Pk, 500/Cs

COR431420 Cryo-Röhrchen, rote Kappe

50/Pk, 500/Cs

COR431421 Cryo-Röhrchen, weiße Kappe

50/Pk, 500/Cs


Dr. Andreas Bergmann Tel.: 01/4893961-40 [email protected]

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GERÄTE

Automatische Detektion von verstopften Waschnadeln in ELx405TS und ELx405LS Mikrotiterplattenwasch-geräten

Patentierte Verify™ Technologie von BIOTEK

Selbst wenn alle Wartungsvorschriften ordnungsge-mäß durchgeführt werden, können nicht immer Salz- und Proteinablagerungen in/an den Wasch-nadeln eines Mikrotiterplattenwaschgeräts vermie-den werden. Die ständige Einsatzbereitschaft in der bestmöglichen Geräteperformance ist für manche Labore entscheidend. Vor allem wenn viele Platten in einem Durchgang gewaschen werden, sollte in-nerhalb eines Laufs der Ausfall des Waschgeräts verhindert werden. Mit der Verify-Technologie, von BIOTEK neu patentiert, können bereits am Beginn ei-nes Waschvorgangs verkrustete Nadeln detektiert werden. Die eingebaute on-board-Software stellt zu-dem die genaue Position verkrusteter Nadeln fest.

Abb.: Das eingebaute Verify-Modul (oberhalb des

Waschmoduls) sendet in ein Referenzwell Ultraschall-

wellen. Ein Sensor detektiert in jedem Well sowohl die

richtige Abgabe von Waschflüssigkeit als auch die Ab-

saugeffizienz des Geräts.

BIOTEK Geräte mit eingebauter Verify-Technologie bieten einen vorprogrammierten Ablauf für die Quali-tätskontrolle, der in regelmäßigen Abständen durch-geführt werden kann. Dabei wird eine Flüssigkeit in die Test-Mikrotiterplatte dispensiert. Ein Abstands-sensor überprüft anschließend die Flüssigkeits-

niveaus und die Aspirationseffizienz nach dem Ab-saugen der Flüssigkeit. Basierend auf einem Pass/Fail-Ergebnis wird der Anwender aufgefordert den Waschkopf zu reinigen, wobei das eingebaute Ultraschallbad (Ultrasonic Advantage) diesen Vor-gang durchführt. Für die Überprüfung, ob detektierte Verkrustungen entfernt worden sind, empfehlen wir, die Verify-Routine ein zweites Mal zu starten.

Die Verify-Routine kann unkompliziert über ein gra-phisches Display auf „405 Touch -Modellen intuitiv bedient werden. Alle notwendigen Schritte sind ein-fach und verständlich dargestellt. Dieser Vorgang kann ebenfalls über die LHC-Software (Liquid Hand-ling Conrol) gestartet werden, bzw. die LHC Secure, wenn CFR part 11-Bestimmungen in der Laborpra-xis erforderlich sind.

Abb.: Die Grafik zeigt 10 Verify-Tests (4% CV). Das

Waschgerät wurde mit Casein befüllt und 3 Stunden

lang stehen gelassen. Die nächsten 5 Verify-Tests zeig-

ten einen hohen CV-Wert als Indiz für eine Nadelver-

stopfung. Nach 1 Stunde Autoclean (Ultrasonic Advan-

tage) konnte der ursprüngliche Zustand von 4% CV wie-

der hergestellt werden.


Dipl.Ing. Danut Laes Tel.: 01/4893961-43 [email protected]

oder an Mag. Norbert Wahler Tel.: 01/4893961-55 [email protected]

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BioTek Tipps

Waschen von 384-well Mikrotiterplatten

Wenn die Waschpuffer keine Tenside (Netzmittel) enthalten, kann es aufgrund der geringen Oberflä-chenspannung der Flüssigkeit und der kleinen Well-Geometrie zu einem höheren Restvolumen während des Absaugvorgangs kommen. BIOTEKs Dual-Action Tube-in-Tube-Waschkopf für die Modelle 405TS und 405LS Select Waschgeräte wurde speziell ent-wickelt, um bei dieser Art von Waschpuffern das Restvolumen in den Wells gering zu halten.

Vorheizen der Inkubationskammer und der Tungsten Lampe – Synergy Reader

In der Gen5 Software können Sie unter dem Menü-punkt „System″ und „Instrument Control″ sowohl die Inkubationskammer auf die gewünschte Temperatur als auch die Halogen-Lampe auf die erforderliche Arbeitstemperatur vorwärmen. Eventuelle Verzöge-rungen können somit vor der Messung vermieden werden.

Die einfachste Art Waschprotokolle zu übertragen

Das neue 405 Touch Mikrotiterplattenwaschgerät verfügt über eine USB-Schnittstelle. Mit wenigen Be-fehlen kann über das Touch Screen User Interface jedes Waschprotokoll auf einen USB-Stick hochge-laden und auf weitere 405 Touch installiert werden.




Take3 Multi Volume Platte + Epoch Spektralphotome-ter

Das Epoch™ Mikroplatten Spektralphotometer in Verbindung mit der Take3 Multivolumen-Platte ergibt ein System, das eine Vielzahl an Assays mit unterschiedlichen Probengefäßen und Probenmen-gen ermöglicht. In Kombination bieten Epoch™ und Take3™ folgende Funktionen und Vorteile: � Sparsame Probenverwendung, da mit Take3™ für

DNA, RNA und Proteine Probenvolumina von nur 2 µL dosiert werden können

� Überwachung des Zellwachstums mit Hilfe der Well-Scan-Funktion des Epoch™

� Spektral-Scans für Proben mit einem Volumen von 2µl in einer Mikrotiterplatte, einer Standard-küvette oder in der patentierten BioCell Quarz-küvette

� Individuell einstellbare Wellenlängen von 200 bis 999 nm

� Schnelle qualitative und quantitative Analysen in Mikroplatten mit 6 bis 384 Wells

� Kinetik-Messung � Schnelle Ermittlung des 260/280-Verhältnisses in

2-µL-Proben sowie in Mikrotiterplatten � Validierung der Assay-Miniaturisierung - von einer

Küvette über eine Mikrotiterplatte bis hin zum Mikrovolumen

� Schnelle und einfache Durchführung von Multiplex-Assays

� Geringer Platzbedarf � Einsparung bei Wartungskosten durch die robuste

und sorgfältig konstruierte Optik und Hardware � Keine Absorptionsfilter – Auswahl der Wellen-

länge erfolgt über einen Monochromator

Jubiläumsaktion

Bis Ende Dezember 2013 bekommen Sie zu jedem zu Listenpreis bestellten Epoch Spektralphotometer zusätzlich eine Take3 Platte kostenlos.


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Unsere Thermocycler auf einen Blick und bis Ende Juni zu Aktionspreisen

TProfessional

High Speed Silberblock

Die Blockmodule des TProfessional 96 und 60 sind aus Silber gefertigt. Aufgrund der hervorragenden Wärmeleitfähigkeit von Silber gleicht sich der Block extrem schnell Temperaturänderungen an und er-reicht dadurch maximale Heiz- und Kühlgeschwin-digkeiten und genaue Temperaturuniformitäten. Zum Schutz des wertvollen Silberblocks vor Korrosion ist die Blockoberfläche mit einer Goldschicht veredelt.

Austauschbare Blockmodule

Die TProfessional Produktserie bietet verschiedene Blockmodule, die sich in weniger als 10 Sekunden austauschen lassen an. Die Wechselblöcke werden

automatisch vom Basissystem erkannt und initiali-siert. Das 96 Well und das 60 Well Modul sind op-tional mit einer Gradientenfunktion für die schnelle Optimierung von neuen PCR-Protokollen erhältlich. Mit einer extrem weiten Gradientenspanne von 40°C können die Blöcke darüber hinaus für eine Reihe anderer Anwendungen wie zum Beispiel dem Rest-riktionsverdau bei verschiedenen Temperaturen oder der Proteinkristallisation eingesetzt werden. Für An-wendung mit hohem Durchsatz steht ein 384 Well Block ebenso zur Verfügung.

Real-Time PCR

Durch das TOptical Modul lässt sich der TProfessio-nal zum Real-Time PCR Thermocycler aufrüsten. Der Blockaustausch erfolgt genau so einfach wie bei den Blockmodulen für die Standard PCR. Das TOp-tical Modul ist wahlweise mit oder ohne Gradienten-funktion verfügbar.

� TProfessional Gradient 60 - Sonderpreis 7.400,-

statt 9.150,- � TProfessional Gradient 96 - Sonderpreis 7.400,-

statt 9.150,- � TProfessional 60 - Sonderpreis 6.500,-



statt 8.150,-

TProfessional Standard

Der TProfessional Standard Thermocycler bietet die gleichen technischen Leistungsmerkmale wie der TProfessional Thermocycler, arbeitet aber im Unter-schied zu diesem mit fest eingebauten Blöcken.

GERÄTE _____________________________________________________________________________________________________ NEWSLETTER

Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

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� TProfessional Standard Gradient 96 - Sonderpreis 7.000,- statt 8.650,-

� TProfessional Standard 60 - Sonderpreis 6.100,- statt 7.650,-



TProfessional Basic

Der TProfessional Basic ist die kostengünstige Alter-native für Routine-Anwendungen. Das Gerät verfügt über einen Gold eloxierten 96 Well Block für Stan-dardvolumina bis zu 70 µl bzw. in der XL-Block Ver-sion über einen eloxierten Block für die Inkubation extra großer Volumina bis zu 100 µl, z.B. zur Pro-benvorbereitung für Next Generation Sequencing Anwendungen oder zur Bisulfidkonversion von DNA in Methylierungsstudien. Beide Blockvarianten bie-ten identische Heiz- und Kühlraten und eine hervor-ragende Temperaturuniformität. Der TProfessional Basic beinhaltet die volle Funktionalität der tabella-rischen und grafischen Programmieroption und die benutzerspezifische Schnellstartfunktion der letzten fünf Programme. Eine gradientenfähige Version für die schnelle Optimierung von neuen PCR-Protokollen ist für beide Blockvarianten ebenfalls verfügbar.

� TProfessional Basic Gradient 96 –

Sonderpreis 5.900,- statt 7.490,- � TProfessional Basic 96 -

Sonderpreis 4.600,- statt 5.950,-

TProfessional TRIO

Der TProfessional TRIO Thermocycler bietet drei un-abhängige Blöcke in einem Gehäuse, daher können drei verschiedene PCR-Protokolle zur gleichen Zeit auf dem Gerät laufen. Darüber hinaus können durch die neue Temperatur-Optimierungsfunktion gradien-tenähnliche Programme mit drei verschiedenen An-nealingtemperaturen einfach erstellt werden.

Mit einer maximalen Kapazität von 3 × 48 Well bietet der TProfessional TRIO die Möglichkeit für ei-nen hohen parallelen Durchsatz von bis zu 144 Proben. Das Gerät ist in drei verschiedenen Block-versionen für 48 × 0,2 ml Gefäße, 30 × 0,5 ml Ge-fäße oder als Kombi-Block Version für 48 × 0,2 ml bzw. 18 × 0,5 ml verfügbar.

� TProfessional TRIO 30 - Sonderpreis 9.500,-

statt 11.500,- � TProfessional TRIO 48 - Sonderpreis 9.500,-

statt 11.500,- � TProfessional TRIO combi - Sonderpreis 9.500,-

statt 11.500,-

TPersonal

Der TPersonal Thermocycler ist ein sehr kompaktes Instrument. Mit einer Stellfläche von nur 22 × 31 cm nimmt der TPersonal nur einen mini-malen Platz auf Ihrem Labortisch ein.

Der TPersonal ist mit drei verschiedenen Block-formaten erhältlich. Die 48 Well Version kann mit 0,2 ml Gefäßen, Streifen und 48 Well-Mikroplatten verwendet werden. Nur wenige andere Thermocycler dieses Segments ermöglichen eine so hohe Proben-kapazität. Die 20 Well Version bietet Platz für eine


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entsprechende Menge 0,5 ml Gefäße. Für maximale Flexibilität bietet BIOMETRA eine Kombi-Block Ver-sion an. Der Kombi-Block bietet Platz für 48 × 0,2 ml Gefäße (Streifen oder Mikrotiterplatten) oder 18 × 0,5 ml Gefäße.

� TPersonal 20 - Sonderpreis 3.400,-

statt 4.200,- � TPersonal 48 - Sonderpreis 3.400,-

statt 4.200,- � TPersonal combi - Sonderpreis 3.400,-

statt 4.200,-

TOptical

Der TOptical Thermocycler setzt sich aus der Basis-einheit des TProfessional Thermocyclers und dem TOptical Modul zusammen. Dieses modulare System ermöglicht die Aufrüstung von bestehenden TProfes-sional Thermocyclern durch das TOptical Modul zum vollwertigen Real-Time PCR Thermocycler. Das pa-tentierte optische System des TOptical Thermocyc-lers ist mit einem Filterrad für 6 Farbfiltermodule ausgestattet. Die Ausstattung mit Farbfiltermodulen lässt sich frei konfigurieren und kann nachträglich aufgerüstet werden, um das Einsatzspektrum zu er-weitern. Insgesamt stehen 10 verschiedene Farbfil-termodule zur Auswahl mit denen sich das gesamte Spektrum gewöhnlich verwendeter Real-Time PCR-Farbstoffe und FRET-Anwendungen abdecken lässt.

LED Technologie

Die Anregung der Fluoreszenzfarbstoffe erfolgt über drei LEDs in den Farben blau, weiß und rot. Die Kombination dieser drei LEDs erlaubt die optimale Anregung der Fluoreszenzfarbstoffe über einen wei-ten Spektralbereich.

Anders als mit sogenannten »wide blue« LEDs las-sen sich insbesondere der kurzwellige blaue Spekt-ralbereich und der langwellige rote Bereich optimal anregen. In Verbindung mit der Lichtleitung durch Hochleistungs-Optikfasern und dem hoch-sensitiven Channel Photo Multiplier werden Intensitätsverluste in der Quantenausbeute vermieden und die maxima-le Sensitivität sichergestellt. Bedingt durch die Ein-zelanregung jedes Wells ist zudem die Verwendung von passiven Referenzfarbstoffen überflüssig, was das Multiplexing mit bis zu 6 Farbstoffen erlaubt. Die Langlebigkeit der LEDs macht einen regelmäßi-gen Austausch der Lichtquelle überflüssig und hilft damit wiederkehrende Folgekosten zu vermeiden.

Software

Der TOptical Thermocycler wird über die PC-Software qPCRsoft angesteuert. Bei der Entwicklung der Software wurde insbesondere auf leichte Be-dienbarkeit und übersichtliche Anordnung der Funk-tionselemente geachtet. Die Software enthält die gleiche tabellarische bzw. graphische Programmier-funktion wie der TProfessional Thermocycler. Infor-mationen zu den Proben lassen sich in einem über-sichtlichen Plattenschema leicht eingeben und auf einen Blick erfassen. Typische Auswertemethoden der Real-Time PCR wie zur Absoluten Quantifizie-rung, Relativen Quantifizierung, delta-delta Ct-Methode, Allelischen Diskriminierung und Effizienz-berechnung sind in die Software integriert. Darüber hinaus sind Export-Tools für weitere externe Analy-senprogramme wie Excel, REST und qBASE vorhan-den und die Software gewährleistet eine MIQE-konforme Dokumentation von Experimenten.

HLA-DIAGNOSTIK _____________________________________________________________________________________________ NEWSLETTER

Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

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� TOptical Gradient - Sonderpreis für Vorführgerät 9.900,- statt 26.500,-

� jedes TOptical Filtermodul - Sonderpreis 1.871,- Verfügbarkeit des TOptical-Sonderpreises auf Anfrage!


Mag. Norbert Wahler Tel.: 01/4893961-55 [email protected]

HLA-DIAGNOSTIK

ONE LAmbda News -iBeadsTM

HLA Klasse I Antigene in nativer Konformation

iBeadsTM stellen einen einzigartigen Forschungsassay dar. iBeadsTM sind Mikrokügelchen, welche mit einer reduzierten Anzahl von denaturierten HLA Klasse I Antigenen beladen sind. Dieses Produkt basiert auf dem Lambda Array Beads Multi-Analyte System (LABMAS). Die Generierung der Daten erfolgt über den LABSCanTM100. Das iBeadsTM System ermög-licht die Charakterisierung der Antikörperreaktivität von Antikörpern, welche an native Konformationen von HLA-Klasse I Antigenen binden.

Produktinformation

Artikelbezeichnung Kat.Nr.

iBeads™ Class IBEADS1 ONEIBEADS1

MicroSSP Ambi StripsTM

Aufgrund der Komplexität der HLA Nomenklatur kann die Interpretation der Allelspezifität von be-stimmten Heterozygoten problematisch sein. MicroSSP AmbiStrips basieren - anstelle der her-kömmlichen 96 Well Platte - auf einem 8 Well Strip Format und sind speziell für die Auflösung von Am-biguitäten entwickelt. Ambiguitäten, bedingt durch Polymorphismen in den Exon/Intron Regionen von Allelen oder durch spezifische Allelkombinationen, die zwei oder mehrere unterschiedliche HLA-Typisierungsergebnisse durch cis/trans Motivpositio-nen generieren.

Das neue 8 Well Stripformat bietet eine effiziente Plattform zur Auflösung von Ambiguitäten und Null Allelen und ermöglicht die heterozygoten Varianten der B27 Typisierung zu bestimmen.

Das 8 Well Strip Format wurde entwickelt um dem Anwender eine effiziente Plattform zu bieten, bei Bedarf einzelne Allelspezifitäten mit einer schnellen und einfachen PCR Methode zu adressieren.

NEWSLETTER _____________________________________________________________________________________________ HLA-DIAGNOSTIK

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Produktkatalog

Micro SSP™ AmbiStrips™ HLA Klasse I Aufgelöste Ambiguitäten

Produktbeschreibung Kat.Nr.

AmB15 — 15:GTCC, 35:FMTY / 35:XX1, 35:XX2

ONESSPT1-B2

AmB1836 — 18:KCXA, 56:HXPW / 18:36, 55:XX1

ONESSPT1-B3

AmB3587 — 35:FXED, 41:WG / 35:63, 35:87

ONESSPT1-H3

AmB4080 — 07:HKET, 40:80 / 40:CVR, 81:MN

ONESSPT1-D2

AmB46 — 15:GUVW, 48:02 / 46:RXE, 48:02

ONESSPT1-G3

AmB4803 — 35:63, 48:03 / 40:EPTJ, 48:02

ONESSPT1-C2

AmB5001 — 44:HAMH, 45:KBCW / 44:GMVY, 50:01 and 44:KBHE, 45:KBCW / 44:JZSJ, 50:01

ONESSPT1-F3

AmB5201 — 49:GW, 51:01 / 49:GW, 52:01

ONESSPT1-E3

AmB55 — 37:GNSP, 55:GNUM / 37:13, 56:19N

ONESSPT1-D3

AmB5619N — 55:GXMA, 55:GMWT / 55:GXMA, 56:19N

ONESSPT1-C3

AmB5623 — 35:FMEE, 59:AD / 53:GMWM, 56:23

ONESSPT1-A2

Micro SSP™ AmbiStrips™ HLA Class I Resolved Null Alleles


A0101N — A*01:01:01:02N ONESSPT1-E1

A0301N — A*03:01:01:02N ONESSPT1-D1

A2409N — A*24:09N ONESSPT1-C1

B5111N — B*51:11N ONESSPT1-B1

C0320N — C*03:20N ONESSPT1-A1

C0409N — C*04:09N ONESSPT1-H2

Micro SSP™ AmbiStrips™ HLA Klasse I Aufgelöste B27 Varianten


B27 Combo — B*27 with B*73:02 & B*27 with B*81:01

ONESPT1MX01

B27+ B73 — B*27 with B*73:02 ONESSPT1-G1

B27+ B81 — B*27 with B*81:01 ONESSPT1-F1

Micro SSP™ AmbiStrips™ HLA Klasse II Aufgelöste Null Alleles


DRB40103N — DRB4*01:03:01:02N

ONESSPT1-G2

DRB50108N — DRB5*01:08N ONESSPT1-F2

DRB50110N — DRB5*01:10N ONESSPT1-E2

Micro SSP™ AmbiStrips™ Kontrolle


Negative Control ONESSPT1-H1

In der Tabelle der aufgelösten Ambiguitäten kennzeichnet

das Fettgedruckte jeweils die gezielten Allelgruppen.


Dr. Grazia Kocian Tel.: 01/4893961-32 [email protected]

VECTOR Laboratories - Blocking Reagenzien · Abb. 1: Endogene alkalische Phosphatase (AP) und Per-...

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