VL Reihe – „Weiße Biotechnologie“ Beiträge der AG Maskow - interessante... · Bisherige...
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14.11.16 – Extremophile Mikroorganismen – interessante Biokatalysatoren?
21.11.16 - Thermodynamik zellularer Prozesse
28.11.16 - Von der gläsernen zur maßgeschneiderten Zelle?
05.12.16 - Nachhaltige Energieerzeugung mittels Biotechnologie
VL Reihe – „Weiße Biotechnologie“
Beiträge der AG Maskow
Extremophile Mikroorganismen
–
interessante Biokatalysatoren?
Stand: 14.11.2016
Für Anfragen und Anregungen :
PD Dr. Thomas Maskow
Helmholtzzentrum für Umweltforschung - UFZ
Department Umweltmikrobiologie
Permoserstr. 15
E-mail: [email protected]. 0341/235-1328
Fax: 0341/235-1351
Inhalt:
• Warum sind extremophile Mikroorganismen interessant ?
• Quellen extremophiler Mikroorganismen
• Pheno- und genotypische Besonderheiten
• Technische Bedeutung extremophiler Mikroorganismen
• Potential extremophiler Mikroorganismen und Ausblick
We teach
microbiology
But we learn
from microbes
Das versteckte Potenzial der Mikroorganismen:
• Die Zahl der prokaryotischen Zellen6,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000 (6 x 1030)
• 50% des Weltkohlenstoffes, 90% des Stickstoffs undPhosphors, sowie 108 Spezies.
• 1 Gramm Boden < 109 Bakterien mit 1 000 – 5 000 Spezies.• Stammsammlungen beinhalten < 105 Spezies• > 90% manchmal >99% der Spezies einer Umweltprobe sind noch nicht
kultivierbar. • Versteckte Diversität von Pilzen + Protisten kaum untersucht. • E. coli etwa 2000 metabolische Reaktionen
Gewaltiges Synthesepotenzial technische Anwendungen !!!
Extremophile(überleben unter „lebensfeindlichen“ Bedingungen)
Resistenzmechanismen Besondere Produkte Autosteriles Arbeiten
• Extremozyme
Temperatur – vR
Halotolerant – C(Edukt, Produkt)
pH – Waschmittelzusätze
• Protektormoleküle
Sterilität –
Kostenfaktor biotechnologischer
Verfahren
Quelle: www.mibi.uni-bonn.de/extremophile.jpg
Endolithe – Leben im Gestein
Häufig autotroph, nutzen Gase oder gelöste Mineralien:
Cryptoendolithotroph: leben im Gestein in Oberflächennähe
Subsurface-Endoliths:-15 bis 100 Grad C; Dunkelheit, hoher Druck (Beispiel: südafrikanische Goldminen 2700 m tief,Radioaktiv gebildeter H2 als Energiequelle,Verdopplungszeiten 40 – 300 Jahre, 10- 30 % der gesamten Biomasse.)
Quelle: www. serc.carleton.edu
Gestein aus der Antarktis; Quelle: www.en.wikipedia.org
Radioresistenz:Resistent gegen ionisierende Strahlung
Organismus Lethale Dosis LD 50 OrganismenklasseHund --- 3,5 SäugetiereMensch 4-10 4,5 SäugetiereMaus 4,5-12 8,6-9 SäugetiereSchildkröte --- 15 ReptilienGoldfisch --- 20 FischeKakerlaken 64 InsektenSchalentiere --- 200 GliederfüßlerAmöben --- 1000E. coli 60 --- BacteriaDeinococcus radiodurans 15 000 --- BacteriaThermococcus gammatolerans 30 000 --- Archaea
Alle Angaben in Gy (Gray) – Quotient aus aufgenommener Energie (durch ionisierende Strahlung) pro Körpermasse 1J/kG = 1 Gy .
Piezophile/Barotolerant:Piezophile leben bei Drücken bis zu 38 – 117 Mpa auf dem Boden der Tiefsee. Barotolerate tolerieren bis 100 Mpa bei 3 Grad C.
• Membranfluidität geht verloren, Membran wird undurchlässig für Nährstoffe
• Wachsen in Dunkelheit,• Sehr UV-emfindlich• Viele Mechanismen zur DNA Reparatur fehlen
Ein Einzeller (Protist). Axenophyophore photographed inthe Galapagos Rift by the USNational Oceanic andAtmospheric Administration'sOcean Explorer. Photograph bythe NOAA
Quellen (Habitate) extremophiler
Mikroorganismen
Extremophile::
• Hyperthermophile (-> 105°C)• Psychrophile (-7 –> 15oC)• Halophile (-> Sättigung)• Acidophile (pH > 0,5)• Alkaliphile (pH < 11)• Baro- o. Piezophile (P > 800 atm)
Tiefsee
Bauwerke Heiße Quellen
Sodaseen/-wüsten
Gletscher Tiefsee
Salzseen
Nutzung von Extremophilen
HYPERTHERMOPHILE (Quelle) Nutzen
DNA polymerase DNA amplification by PCR
Alkaline phosphatase Diagnostic
Proteasen und Lipasen Milch produkte
Lipasen, pullulanases and proteases Detergentien
Proteasen Bäckerei und Brauerei, Aminosäure produktion aus Keratin
Alkoholdehydrogenase Chemische Synthesen
Xylanases Papierbleiche
S-layer proteine und Lipide Molekulare Siebe
Oil abbauende Mikroorganismen Surfactants für die Ölgewinnung
Schwefeloxidierende Bakterien Bioleaching, Kohle & Abgas Entschwefelung
Hyperthermophilic consortia Abfallbehandlung und Methan-
produktion
PSYCHROPHILE Nutzen
Alkaline phosphatasen MolekularbiologieProteasen, Lipasen, DetergentienZellulasen und AmylasenLipasen und Proteasen Käseherstellung und MilchverarbeitungProteasen Reinigungslösung für KontaktlinsenUngesättigte Fettsäuren Nahrungsmittelergänzung, Diätzusätzeb-galactosidasen Laktosehydrolyse in MilchproduktenIce nucleating proteins Künstlicher Schnee, EiskremIce minus microorganisms Frostschutz für empfindliche PflanzenVerschiedene Enzyme Bioremediation, Biosensoren(e.g. oxidases) Methanogene Methanproduktion
ALKALIPHILE (Quelle) Nutzen
Proteasen, Cellulasen, Xylanasen, DetergentienLipasen and PullulanasenProteasen Gelatine Entfernung von
RöntgenfilmenElastasen, Keritinasen EnthaarungCyclodextrine Lebensmittel, Transport und Schutz von
Wirkstoffen, Enantiomerentrennung,Pharmazie
Alkaliphile Halophile ÖlgewinnungVerschiedene Mikroorganismen Antibiotika
ACIDOPHILE (Quelle) Nutzen
Schwefel oxidierende Metallgewinnung und Entschwefelung vonMikroorganismen KohleMikroorganismen Organische Säuren und Lösemittel
Alkohol dehydrogenase
Alkohol dehydrogenase (ADH) von der Archaea Sulfolobus solfataricus
Arbeitet unter harschen (vulkanischen) Bedingungen 88°C (fast siedendes Wasser), pH= 2 – 3.5 (Schwefelsäure-konzentrationen wie in Autobatterien)
ADH katalysiert die Konversion unterschiedlicher Alkohole und hat erhebliches biotechnologisches Potential wegen seiner besonderen Stabilität
Nutzung von Acidophilen
Leaching
Leaching
FeS2 + 6 Fe3+ + 3 H2O -> 7 Fe2+ + S2O32-+ 6 H+
Eisen:
FeAsS -> Fe2+ + As3+ + S6+
CuS2 oder CuS
4 Fe2+ + O2 + 4 H+ -> 4 Fe3+ + 2 H2O
UO2 + Fe2(SO4)3 -> UO2SO4 + 2 FeSO4
Kupfer:
Gold: Befreiung des Goldes aus dem umgebenden Erz
Uranium:
UO3 + H2SO4 -> UO2SO4 + H2O
Halo- und osmophile Mikroorganismen
Extrem durch niedrige WasseraktivitätenWasseraktivität Habitat Bewohner
1.000 Reines H2O Caulobacter, Spirillum
0.995 Menschliches Blut Streptococcus, Escherichia
0.980 Meerwasser Pseudomonas, Vibria
0.800 Marmelade, Obstkuchen Penicillum
0.750 Gesalzener Fisch, Salzseen Halobacterium, Halococcus
0.700 Getreide, Trockenobst Xerophile Pilze
1 g gereinigtes Meersalz enthält 106 Mikroorganismen !!!
Wasseraktivität beeinflusst durch: • Salze
• Zucker
• Wassermangel
• Halotolerant/-phil
• Osmophil
• Xerophil
Halotolerant oder Halophil ?
Tolerieren höhere Salzgehalte, sind aber nicht darauf angewiesen
NaCl-Gehalt Bezeichnung
1 – 6 % Schwach halophil
6 – 15 % Moderat halophil
> 15 % Extrem halophil
Salzsee Südrussland, Luftbildaufnahme
Quelle von Halophilen
Sodaseen: Etoscha-Pfanne, Namibia
Künstliche Habitate: Salzgewinnung aus Meerwasser
Oren A (2002) Halophilic microorganisms and their environment. Klywer Academic Press
Trockene Oberflächen
ResistenzmechanismenSalt – in Strategie Compatible-Solute Strategie
Osmotisches
Gegengewicht:
K+ Kleine, organische Moleküle;
Kompatibel zum Metabolismus (Compatible Solutes)
Nachteil: Benötigt spezielle, salz-tolerante Enzyme
Energetische Kosten der Synthese von Compatible Solutes
Vertreter: aerobe extrem halophile Archea,
Halobacteriales
anaerobe extrem halophile Archea, Haloanaerobiales
Vertreter aus allen 3 Domänen des Lebens
• Archea
• Bacteria
• Eucarya
Vorteil: Standard-Enzyme„kostet“ wenig Energie;
Na+/H+ Antiporter; 1:2 - 2:3
primäre Na+ Pumpen
Bisherige technische Anwendungen Habitat• Quelle für Carotinoide (Bacterioruberine) als Nahrungsergänzungs-
mittel, -färbemittel
• Produzenten während der Fermentation von Sojasoße und Thaifischsoße
Oren A (2002) Halophilic microorganisms and their environment. Klywer Academic Press
Halophile Enzyme
Widerstehen hohen Ionenstärken
Interessant für hohe ionische Edukt-/ Poduktkonzentrationen
Halophile dihydrofolat Reductase des Aarchaeon Haloferax
volcanii, isoliert aus dem Toten Meer
• Einzigartige molekulare Struktur (aktiv, stabil und löslich bei hohen Ionenstärken)
• Hoher Anteil saurer AS• Kleiner Anteil
hydrophober AS• viele
Ionenpaare/Salzbrücken• Aber: noch vieles
unbekannt
Ionenpaare/Salzbrücken
Vergleich der dihydrofolat Reductase
• Halophil nicht-halophil
Anwendungen
• Viele mögliche Anwendungen von Halophilen werden untersucht:– Erdölextraktion – Gentechnischer Einbau halophiler Enzyme in
Pflanzen um die Salztoleranz zu steigern. – Behandlung von Abwässern.
Bacteriorhodopsinaus Halobacterium salinarum
Physiologische Funktion: Licht grüner Spektralbereich 570 nm - protonenmotorische Kraft
Arbeitsweise: Ändert Protonisierung/Farbe in 10 ms -> technische Anwendungen
pumpt ein Proton pro Photon
Technisches Potential von BR folgt aus Licht ->Signal zu wandeln:
• Ladungstrennung
• Farbänderung
Technische Anwendungen:• Elektrostatische Energie -> photovoltaische Zelle
• Während der Lichtspeicherung ändert BR die Farben• Lichtmodulatoren
• Hochauflösende Displays
• Genetische Techniken helfen:• Variation der Lebensdauer der Zustände
• Anregungswellenlänge
• Grundlage für 3D Speicher extrem kleiner Größe (1 Molekül reicht), hoher
Speicherkapazität pro Volumeneinheit
• Bewegungssensoren
• künstliche Netzhaut
• Licht -> elektrisches Signal -> Photozelle
Primär osmotisches Gegengewicht aber auch generelle Schutzfunktion!
Compatible Solutes – Protektormoleküle !
Schützen: Enzyme, biologische Strukturen aber auch ganze Zellen
gegen:
• Hohe Ionenstärken
• Trockenheiten
• Hohe Temperaturen
• Niedrige Temperaturen
• Gefrieren
• Denaturierende Lösemittel
• UV-Strahlung
Ursachen der generellen Schutzfunktion?
Preferential exclusion theory:• Unterstützen die Wasserstruktur
Arakawa, T und Timascheff SN (1985) The stabilisation of proteins by osmolytes. Biophys. J. 47: 411-414
Suenobu K, Nagaoka M (1998) Ab into molecular orbital study on molecular and hydration structure of ectoine.
J. Phys. Chem. A 102: 7505-7511
Held C, Neuhaus T, Sadowski G (2010) Compatible solutes: thermodynamic properties and biological impact of ectoines and prolines. Biophysical Chemistry 152(1–3): 28–39
• CS verstärken hydrophobe Kräfte
• CS wirken der Entfaltung von Proteinen entgegen
Compatible Solutes – Protektormoleküle !
Compatible Solutes: Struktur -> Funktion ?
Anderer Typen:
Dimethylsulfoniumpropionat
Vom Polyoltyp:
Glycerol Mannitol
Vom Kohlenhydrattyp:
SucroseTrehalose
Vom Aminosäuretyp:
EctoinProlinGlycinbetain
N+
CH2CH3
CH3
CH3
COO- N+
HHCOO-
N
N COO-CH3
+
O
OH
OH
OH
O
O
CH2OH
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
CHOH
CH2OH
C H2O H
C H
C H
OH
OH
CH O H
CH O H
C H2O H
S+COO-H3C
CH3
O
OH
OH
OH
O
CH 2OH
O
OH
OH
CH2OH
HOH2C
Welche Compatible Solutes kommen woher?
Mikroorganimus Compatible SolutesNichtphototrophe, grampositive Bakterien Glycinbetain, Prolin
Nichtphototrophe, gramnegative Bakterien Glutamat
Süßwasser-Cyanobakterien Saccharose, Trehalose
Marine Cyanobakterien Glycosylglycerin
Marine Algen Mannit, verschiedene Glykoside, Prolin, Dimethylsulfonpropionat
Salzsee-Cyanobakterien Glycinbetain
Halophile anoxygene phototrophe Bakterien
Glycinbetain, Ectoin, Trehalose
Extrem halophile Archea KCl
Halophile Grünalge Dunaliella Glycerin
Xerophile Hefen Glycerin
Xerophile fadenförmige Pilze Glycerin
Bakterienmelken 1. Phase (Wachstum und Synthese)
Wachstum und Ectoinbildung in Gegenwart hoher Ionenstärken
Quelle: www.bitop.deVorzüge:
• 3-4 Zyklen möglich
• funktioniert mit Molekülen bis 10 kDa
• erprobt von 1-3500 L
2. Phase (Produktabtrennung)
Biomasse angereichert cross-flow Filtration.
hypoosmotischen Shock -> Freisetzung der CS durch die MSC.
Zelllyse findet nicht statt, hohe Produktreinheit
Biomasse wird angereichert, CS im Permeat
3. Phase (Synthese)
Auffüllen mit hochkonzentrierter Salzlösung,
Synthese von CS
CS - Compatible Solutes
MSC - Mechanosensitive Kanäle
Eigenschaften des CS Ectoin in der Kosmetik
Beispiele für die Nutzung dieses neuesten Produktes am Markt
Ectoin ist Bestandteil der Salben der Marktführer
• Shiseido• Kanebo• Sebamed• Marbert• Dadosens
Es gibt “nach heutiger Erkenntnis” 3 Anforderungen für Leben: WasserEnergieKohlenstoff
Astrobiologen suchen gegenwärtig Leben auf dem Mars, dem Jupiter Mond Europa und dem Saturn Mond Titan
Solches Leben sollte unseren Extremophilen ähnlich sein, weil es extremer Kälte, Drücken und Trockenheit widerstehen muss.
“Schlammlawinen” wurden auf dem Mars gefunden (links). Diese könnten durch Wasserabgänge verursacht sein. Psychrophile könnten dort noch existieren.
Extremophile im Weltall?
Extremophile im Weltall?
Europa soll eine Eiskruste haben, die einen 30-Meilen tiefen Ozean umgibt. Die rötlichen Sprünge im Eis werden als Hinweise auf Leben gesehen.
Der Mond Titan ist von einem dunstigen Gas umgeben, das organische Moleküle wie Methan enthalten soll. Das könnte die Basis für Leben auf der Titanoberfläche liefern.
Samstag, 25. Mai 2013Extremophiles Arktis-Bakterium erlaubt Rückschlüsse auf mögliches Leben auf Mars und Saturnmonden
Meteorite enthalten Amino säuren und einfache Zucker. Wichtige Bausteine für Leben. Meteorite können als “Transporter”dienen um Lebenskeime im Universum zu verteilen.
Eine probe von stratospherischer Luft zeigt ein bakterielle Diversität 41 km über der Erdoberfläche. (Lloyd, Harris, & Narlikar, 2001)
Indeed, we may not be alone
Leben im Weltall?
Taken from: Kane and Celino „The habitable zone and the extreme planetary orbits. Submitted to Astrobiology journal
Neues• Am 26. April 2012 wurde über Flechten berichtet, die 34 Tage unter Mars-
Bedingungen aktiv blieben.• Am 29. April 2013, berichten französische Wissenschaftler über die
Anpassung von Mikroorganismen an Weltraumbedingungen.
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OHCHHCO esMethanogenropheHydrogenot2422 24
Kleines Pepetitorium:
• Was charakterisiert Extremophile und warum sind sie technologisch
besonders interessant?
• Welche Abwehrmechnanismen hat die Natur gegen Salzbelastungen
entwickelt? Nennen Sie Vor- und Nachteile.
• Welche Besonderheiten der Halophilen haben technisches Interesse erregt
und warum?
Empfehlungen für weiteres LesenZur Vertiefung der Vorlesung:
Madigan TM: Brock Mikrobiologie, Spektrumverlag Heidelberg Berlin ISBN 3-8274-0566-1
Margesin R, Schinner F (2001) Potential of halotolerant and halophilic microorganisms for biotechnology. Extremophiles 5:73-83
Mehr Details:
Oren A (2002) Halophilic microorganisms and their environment. Klywer Academic Press ISBN 1-4020-0829-5
Oren A (1999) Bioenergetic aspects of holophilism. Microbiology and Molecular Biological Reviews. 63: 334-348
Madern D, Ebel C, Zaccai G (2000) Halophilic adaptation of enzymes. Extremophiles (2000) 4:91-98
Fragen ?