PflanzlicheAn-malariami0el
Dr.BarbaraFreiHallerApothekerin,Dozen-n
Ethnopharmazie,molekularePharmakognosieIns-tutfürPharmazeu-scheWissenschaDenIPW
ETHZürich
WorkshopSAPP„ReiseninSchwangerschaDundS-llzeit“Do16.3.2017,USZ,Zürich
«PflanzlicheAn-malariami0el»Dr.BarbaraFreiHallerApothekerin,Dozen-n
Ethnopharmazie,molekularePharmakognosieIns-tutfürPharmazeu-scheWissenschaDenIPW
ETHZürich
WorkshopSAPP„ReiseninSchwangerschaDundS-llzeit“Do16.3.2017,USZ,Zürich
B.FreiHaller16/03/2017
«PflanzlicheAn-malariami0el»ArtemisiaZubereitungenPflanzlicheInterven-oneninAfrikaRepellen-en
B.FreiHaller16/03/2017
B.FreiHaller16/03/2017
1.ArtemisiaZubereitungen:Inhalt• Extrak)onsmethoden,Vielstoffgemische,Einzelstoffe:unterschätztePhytopharmaka!
• Entwicklung,ProdukteaufdemMarkt,ersteResistenzen
• Wirkungsweise:Phytopharmakavs.Synthe)ka• Posi)onderWHO:Wirkstoffgehalt,Unterdosierung,Rekrudeszenzen,Resistenzen!
• Posi)onvonRITAMundAnamedInterna)onal:HilfezurSelbsthilfe,mitminimalenMiOelnzumaximalerHilfe,potenteGesamtextrakte
Literatur:Schlenger2016„EingefährlicherIrrweg“DAZ156(23)64-70.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenWich-geInhaltstoffeArtemisiaketon KetonimätherischenÖlArtemisinin Sesquiterpenlactonperoxid,ingrünenTeilenderPflanzeArteannuinB SesquiterpenlactonderivatArteannuinsäure SesquiterpenlactonderivatArtemether halbsynthe-schArzneistoff,Bioverfügbarkeit↑,Riamet®,Coartem®
ACT(Artemisinin-basedCombina-onTherapy)mitLumefantrinArtesunat
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenWirkungsweisevonArtemisininderivaten
- Peroxidstruktur:durchhoheKonzentra-onvonEisenioneninstabil,zerfälltinfreieRadikale- inErythrozyten,inEisenakkumulierendenPlasmodien- freieRadikalezerstörenParasiten- VermutetespezifischeWirkung:HemmungeinerCa-ATPase
Artesunat
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenExtrak-on- Unbeliebtinchem.Industrie:Rohmaterialbeschaffungevtl.nichtkon)nuierlich- AusbeutevonArtemisinin(bis0,1%)nichtsehrhoch- ArtemisininsäurehöherSynthese- TotalsynthesevonArtemisininaufwändigfürkostenbewusstenMarkt- ArtemisininsäureausPflanzeingrossenMengenextrahierbar- Dihydro/ArtemisinisäureauchausgentechnischveränderteHefen- DihydroartemisinisäurealsAusgangsverbindungfüreinfachereSynthesevonArtemisinin:Kon)nuierlichephotochemischeSynthese- SemisynthesezustarkreduziertenKostenLiteratur:Lévesque,F.,Seeberger,PH2012KonRnuierlicheSynthesedesMalariawirkstoffsArtemisinin.Angew.Chem.1247,1738.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenVielstoffgemisch
- 245SubstanzenvonArtemisiaannuaheutebekannt
- Über150SubstanzenalleineausdemätherischenÖl
- einmul)-target–Phytotherapeu)ka
- VielstoffgemischtrihaufeinemkomplexenOrganismusmitWirkungenanverschiedenenmolekularenZielstrukturen:
Rezeptoren Enzyme Transporter Ionenkanäle
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenVielstoffgemisch• zahlreicheak)vePrinzipien• einzelneWirkstojestandteileliegenmeistnurinsehrgeringenMengenvor,dadurchkeinevollständigenBlockaden/S)mulierungen/Säkgungen
• mul)ple,pleiotrope(voneinanderunabhängige)Mechanismenunddadurchgleichzei)geReak)onmehrererMechanismenimNetzwerkOranismus
• schwacheBindungen• ausgeprägtePlas)zitätderWirkstoffe,d.h.ihredynamischeKomplexitätkannsichderdynamischenMul)modalitätderTargetsanpassen,nochdazumitrela)vwenigNebenwirkungen.
Literatur:Schwabl,H.,Vennos,C.2013PflanzlicheVielstoffgemischealsNetzwerk-Arzneien.ArsMediciThemaPhytotherapie,5(2013),983.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenEntdeckungvonqinghaosu
1960ssystema)schesScreeningderChinesischenMateriaMedica
1971erstmalsan)plasmodischerEffekteeinesExtraktes
1970sProf.TuYouyou,China:IsolierungArtemisinin
1986pharmazeu)scheProduk)on
1990sWHOUntersuchungenvonArtemisininundDerivaten
2004WHOlargescalepromo)on
2015ProfessorTuYouyouerhältNobelpreis
Quelle:Hsu,E.2006ReflecRonsonthe‘discovery’oftheanRmalarialqinghao.Brit.J.Clin.Pharmacol.616,666.Prof.TuYouyou
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenEntwicklungderExtrakte
EmergencyPrescripRonsKeptupone’sSleevedesberühmtenArztesGeHong(284–363):
“EinanderesRezept:qinghao,einBüschel,nimm2sheng[2x0.2l]WasserzumEinweichen,wringesaus,nimmdenSal,nimmihnganzein”.
ArbeitsgruppevonProf.TuYouyouübersetztdiesin„Laborsprache“:trockenesPflanzenmaterial,Extrak)onunter)efenTemperaturen,pH7.0
→vageInterpreta)ondesWortes«frisch»(sheng)und«auswringen»(Jiao)nichtberücksich)g
Literatur:Hsu,E.2006ReflecRonsonthe‘discovery’oftheanRmalarialqinghao.Brit.J.Clin.Pharmacol.616,666.
ArztGeHong
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenExtrak-onsmethodeninderPraxisundinStudien- Extrak)onsratenvon20–95%möglich- AbhängigvomMaterial(BläOer,Kraut),TemperaturundZeit(Kaltmazera)on,Aufguss,Dekokt)- BesteMethodeDekokt:9gtrockeneBläOer,1ltWasser,2-5min.kochen:90%- GehaltbeiRTmind.24hstabil
- Kaltmazera)on,12h,auspressen,ethnopharmakologischeMethode:73mg/lt
Literatur:F.VanDerKooy,F.,Verpoorte,R.2011TheContentofArtemisininintheArtemisiaannuaTeaInfusion.PlantaMed.7715,1754.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenStandpunktWHOBerechnungenderWHO:1ltArtemisiateetäglichenthältca.100mgArtemisininsubtherapeutsicheDosisfür7TageImVergleich:Riamet®:2x80mgArtemetherfür3TageEurartesim®:120mgDihydroartemisininfür3Tage→DerivatezusätzlichstärkerwirksamalsArtemisinin,kurzepotenteTherapieUnverantwortlichTee-ZubereitungeninderBehandlungeinzusetzen:→Wirkstoffgehaltzu)ef,UnterdosierungfördertRekrudeszenzenundResistenzen
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenGrossePlayerinderMalariaforschug:• TDR/UNICEF,UNDP,WorldBank,WHO
• BillandMelindaGatesFounda)on
• MMV,MedicineforMalariaVentureKomplementärer,ethnophamakologischerAnsatz:• RITAMResearchIni)a)veonTradi)onalAn)malarialMethods• Anamedinterna-onal→PropagierenheimbasierteBehandlung,wennkonven)onelleTherapiennichtverfügbarsind,mitpotentenGesamtextrakten,HilfezurSelbsthilfe,mitminimalenMiOelnzumaximalerHilfe
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenExtrak-onsmethodenachAnamedInterna-onal- A-3,ArtemisiaannuaSortemithohemWirkstoffgehalt- 1ltkochendesWasser,5gBläOer,min.15min.ziehenlassen- Teenichtfiltrieren,BläOermiOrinken- KeineEisen-undAlugefässe,fördernSpaltungderPeroxidgruppedesArtemisinins- Alle6Std¼ltTeetrinken,in24h1ltTee- SüssmiOel:HonigoderZucker,erstvorunmiOelbarerEinnahmeUmganzesInhaltsstoff-Spektrumzunutzen:- ZerstosseneBläOerkauen- inJoghurt,Bananenbrei,ErdnussbuOer- TrockenextrakteinKapselabfüllenLiteratur:Schlenger2016„EingefährlicherIrrweg“DAZ156(23)64-70.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungen
Extrak-onsmethodenachRITAM- Mazera)onmitfeOhal)gerMilch- AnteilPflanzenmaterialerhöhen:50bis125gDroge/ltWasserWillcox,M.,Bodeker,G.,Rasoanaivo,P.2004"TradiRonalMedicinalPlantsandMalaria"-TradiRonalHerbalMedicinesforModernTimes,CRCpress.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenBeobachtungeninStudien- SchnellereResorp)onvonArtemisininausBläOernalsausTableOen- BegleitstoffeimTee,dieBioverfügbarkeitvonArtesininiimVergelichezurTabelOeerhöhen
- Mausmodell:mehrArtemisininimBlut,höhereAk)vitätgegenPlasmodienalsnachGabevonTableOenmitReinsubstanzen
RäthK.,Heide,L.etal.2004PharmacokineRcstudyofartemisininaleroralintakeofatradiRonalpreparaRonofArtemisiaannuaL.(annualwormwood).Am.J.Trop.Med.andHyg.702(2004)128.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenPharmakokine-scheStudie- 132Pa)enten,7TageBehandlung,randomisiert:5g,9g,1500mg/dChinin- Material:Gehalt1,4%Artemisinin- Teeaufgüsse:47mg/ltbzw.94mg/lt- Alle4h,¼lt- Tag3und4:BefragungzuSymptomenundBes)mmungderParasitämie
RäthK.,Heide,L.etal.2004PharmacokineRcstudyofartemisininaleroralintakeofatradiRonalpreparaRonofArtemisiaannuaL.(annualwormwood).Am.J.Trop.Med.andHyg.702(2004)128.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenPharmakokine-scheStudieII- Endpunkt:HeilungsrateamTag7,d.h.Parasitenfreiheit- Resultate:77%(A5-Arm),70%(A9-Arm),91%Chininsulfat,alleGruppenzeigenVerbesserungderSymptomenach3Tagen
- Probleme:WiederkehrderParasitämienach4Wochen=Rekrudeszenz- Defini)on:Therapieversagen- Kri)k:ohnegenotypischeAbklärungeinerNeuinfek)on!!- Tee:HeilungsrateNUR34%,Chinin-Arm79%- 2008Studienresultatebestä)gt,ABER:KontrolleFansidar®auchauffällig)ef!RäthK.,Heide,L.etal.2004PharmacokineRcstudyofartemisininaleroralintakeofatradiRonalpreparaRonofArtemisiaannuaL.(annualwormwood).Am.J.Trop.Med.andHyg.702(2004)128.
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenAnwendunginSchwangerschaDundS-llzeitgemässEmpfehlungenvonAnamed• 1.TM:WHO(2010)erlaubtBehandlungmitArtesunate.FolglichA-3Tee(plus2LiterLemongrastee/d)zurTherapieunterAufsichtundVerantwortungeinesArztes
• 2./3.TM:A-3Tee,1lt/d,mind.7d,(plus2LiterLemongrastee).Evtl.zusätzlichChininTableOen(20mgprokgKörpergewichttäglich,7d).MitArztberaten.
• S)llzeit:wie2./3.TM.Evtl.EinläufewennPa)en)nnichttrinkenkann:500mlWasserüber10ggetrockneteoder50gfrischeBläOer,15Minutenziehen,filtern,alsEinlaufverabreichen,in4-5odermehrPor)onen,nichtabs)llen!
Quelle:hpp://www.anamed.org/de/malaria-behandlungsvorschlaege.html
B.FreiHaller16/03/2017
ArtemisiaZubereitungenDiskussionspunkte• InakzeptableRückfallraten• KeineRückfallraten–Neuinfek)onen!• ResistenzeninAsien:RegionendieMonotherapienverwendethaben• Artemisinin–basedCombia)onTherapie(ACT):nuranfangseineZweifachtherapie!• KeinParasitbekannt,dergegeneinenGesamtextraktresistentist!• Semi-imuneTropenbewohnervs.Touristen• Schwangerscha~• Zwischenziel,VerhütungvonKomazuständen,ErreicheneinerKrankensta)on!
Literatur:Schlenger2016„EingefährlicherIrrweg“DAZ156(23)64-70.
B.FreiHaller16/03/2017
2.PflanzlicheInterven-oneninAfrika:Inhalt• VernichtungvonMückenlarvenmitNeem-Produkten(AzadirachtaindicaL.)
• adulteAnopheles-Mücken:MosquitoScoutsinMalindi/Kenia
• Präven)onundAu�lärung:DieChancefürSchwangere• Neue,nichtpflanzlicheForschungsrichtungen:Bakterien,Detektoren,Flugrouten,
molekulareTestsQuellen:Biovision,SRlungfürökologischeEntwicklung,Zürich/SchweizundicipeNairobi/Kenia.Fisch,F.2017KleineMückegrosseAnstrengungen,Horizonte112.
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Neem,Niem• Niembaum• AzadirachtaindicaL.syn.MeliaazadirachtaL.
• Ursprünglich:Indien• TropischesKlima
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Verarbeitung• Öl,Presskuchen,Rinde• Azadirach)n(C35H44O14,Tetranortriterpenoid)
• Insek)zid(Schädlinge),fungizid,an)viral,an)bakteriell
• fürSäuger,Insekten(Nützlinge)unbedenklich
B.FreiHaller16/03/2017
Ziegelsteinproduzenten• Hochland-Malaria!
• BrutstäOen?
• NahederWohnhäuser
• SaisonalvieleMalariaerkrankungen
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Niem-“Teebeutel“• ÜberdimensionaleTeebeutelmitgeraspelterNiemrinde
• DezimierungderAnopheles-Larven
• Malariafällekönnensignifikantreduziertwerden
• ZahlenderBehandlungenimSpitalfallensignifikant
B.FreiHaller16/03/2017
Malindi/Kenia • urbanundperi-urban,Stadtander
Küste,touris)sch
• Au~eilungin16Zellen:1x1km
• 1MosquitoScoutistfür1Zelleverantworlich
BioVision: Mosquito-Scouts
B.FreiHaller16/03/2017Offene Tränke Kanalisation
Unbenutzte Swimmingpools Verstopfte Abflüsse
BioVision: Mosquito-Scouts
B.FreiHaller16/03/2017
Swimmingpools
Zierbrunnen
BioVision: Mosquito-Scouts
B. Frei Haller 04/10/2016
B.FreiHaller16/03/2017
Malindi/Kenia • 1MosquitoScoutverantworlich:
! Proben,wöchentlich
! WasserundLich�allen
! Überwachung:Anzahl,Mückenarten
! EntwicklungderLarvenzahlen
! Interven)onmitBR
" Spitälernichtmehrüberfüllt!
BioVision: Mosquito-Scouts
B.FreiHaller16/03/2017
BioVision:Präven)on,Au�lärung• SchwangereFrauen• Kinder<5Jahre• mitInsek)zidimprägniert
Probleme/Stolpersteine:• Löcher• Neuimprägnierung• kulturelle:Schule,Impotenz?
B.FreiHaller16/03/2017
3.Repellen-en:Inhalt• Repellen)enaufdemMarkt:Chemieundwenigpflanzliches
• PflanzlicheRepellen)en:warumsiesichnochnichtdurchgesetzthaben!• EntwicklungvonRepellen)enunterEinbezugvontradi)onellemWissen
• Repellen)enundIntegratedVektorMamgementIVM
Quellen:unine,Neuchâtel/Schweiz,SwissTPH,Basel,Biovision,SRlungfürökologischeEntwicklung,Zürich/SchweizundicipeNairobi/Kenia.Kröber,Kessler,Frei,Bourquin,Guerin2010JAmMosqControlAss.26(4):381-6.
B.FreiHaller16/03/2017
Factorsinfluencingmosquitobi-ngHost=Mensch
• CO2outputinhumanbreath(minimal:300ml/min.)• bodytemperature• humidityandpHofskinsurface• bodyodour:breath,perspira-on• nutri-on • microfloraofskin:Brevibacteriumepidermis
• producingshortchainfa0yacids,a0rac-vesmell
• age,gender,textureofbodysurface• e.g.hairyarmsandlegsareadvantage
• healthsitua-on
• acuteclinicalmalaria:fever,microflora• gametocytes:allomonesareevaporated,a0ractmosquitoes
• otherdiseases
B.FreiHaller16/03/2017
Anophelesgambiaes.l.
Anopheles gambiae sensu stricto Giles Anopheles arabiensis Patton Anopheles quadriannulatus Theobald Anopheles bwambae White Anopheles merus Dönitz Anopheles melas Theobald
B.FreiHaller16/03/2017
Factorsinfluencingmosquitobi-ng
Vector = Mücke • gender • age • circadian rhythm: dusk and dawn • status of nutrition: starving • sporozoites in saliva: - high desire to bite - visits to several hosts possible
B.FreiHaller16/03/2017
Factorsinfluencingmosquitobi-ng
Environment=Umwelt
• rainyseason• hightemperature/humidity(>65%rel.ah)• al-tude(<2400mosl.)• notmuchwind• lighta0rac-ve
• waterstagna-on:• Aloe• Bromelia
• manmadeenvironment
B.FreiHaller16/03/2017
Factorsinfluencingmosquitobi-ng
Measuresforprotec-on• Repellents- onskin- roomspraying- impregnatedcloths
• Netsforthebed• Trapswithlightorodour• Insec-cides
• Spraying• impregnatednets,curtains
B.FreiHaller16/03/2017
Repellen-enaufdemMarkt:Chemie,kaumpflanzlicheProdukte
• DEET,Diethyltoluamid z.B.An-BrumForte(0)• (P)Icaridin,Bayrepel z.B.An-BrumNightLo-on(0)• DEET+Icaridin z.B.NobiteExtreme(0)• DMP,Dimethylphtalat• EBAAPEthylbutylacetylaminopropionat,IR3535 z.B.AkileineAkipicLo-on • Permethrin adus.vet.,spotonInsek-zid,
Scabies,Impregnierungsmi0el• ätherischeÖleodereinzelneBestandteile:
• CitriodioloderPMDausEucalyptuscitriodora z.BAn-BrummNaturel• Citronellöl z.B.Armbänder,DuDlampen
Wirkungsweise:DuDmanteloder„Tarnkappe“Quelle:pharmavistaArchive7/2008und6/2016«RepellenRen»
B.FreiHaller16/03/2017
Repellen-enSchwangerschaD- MechanischeSchutzmassnahmen:hellebedeckendeKleider,mitPyrethroidenimprägnierteMosquitonetze- Sehrsparsam,fürkurzeZeitundnurinHochrisikogebieten- Max.3xtgl.aufunbedeckteKörperstellen:≠Schleimhäute,≠Augen,≠Wunden- ÄtherischeÖle:sparsam,Allergien!KurzeWirksamkeit!- DEET:plazentagängig,teratogen?
S-llzeit- DosierungwiealleanderenErwachsenen- Brüstenichteinreiben,besprühen- Händewaschen!
Quelle:pharmavistaArchive7/2008und6/2016«RepellenRen»
B.FreiHaller16/03/2017
Repellen-enKinder- MechanischeSchutzmassnahmen:hellebedeckendeKleider,mitPyrethroidenimprägnierteMosquitonetze- Sehrsparsam,fürkurzeZeitinHochrisikogebieten- Ab6M-1J:1xtgl.,1J-12J:2xtgl.,>12J:3xtgl.aufunbedeckteKörperstellen- ≠Schleimhäute, ≠Augen,≠ Wunden,≠ Hände,≠ Mund- ÄtherischeÖle:sparsam,Allergien!KurzeWirksamkeit!Konvulsionen!
AllgemeinfüralleBenutzer- aufKleidersprühen:DEETbeschädigtbest.synthe)scheFasern,BaumwolleundLeinennicht- Sonnenschutz,nach15bis20min.ErstRepellen)enau~ragen,sonstUV-FiltermitverminderterWirkung- Abwaschen,wennnichtmehrbenö)gt
Quelle:pharmavistaArchive7/2008und6/2016«RepellenRen»
B.FreiHaller16/03/2017
Wirkstoff SchwangerS S-llzeit Säuglingeabab6M/ab1J
Kleinkinderab2J./ab3J.
Wirkdauer Zecken Bemerkungen
DEET 30% 30(-50%) 30% 30% 8h(-12h) 2-4h Literaturunklar
(P)Icaridin 20% 20% 10% 20% 8h 4h BessereVerträglichkeit
DEET+Picardin
30%20%
30%20%
30%20%
30%20%
8h(-12) 4h Kombina)on,DEETKonz.↓
EBAAP 25% 25% 25% -/25% <8h KeinProd.CHDMP <8h KeinProd.CHPermethrin ne ne ne Tox.f.Fische,
KatzenCitriodiol kD 20-35% 20/25% 20-35% 6-8h 4h Tropen?Äther.Öle sparsam sparsam Konvulsionen
AllergienKonvulsionenAllergien
2h KurzeWirkung
Konzentra-oneninRepellen-en
Quelle:pharmavistaArchive7/2008und6/2016«RepellenRen»
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Ethnobotanik
• Befragungen:PflanzenalsRepellen)en?
• Schulkinder:Pokot
• Haushalte
• Bauern
• Hirten
• icipe–Angestellte
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Ethnobotanik
• Befragungen:PflanzenalsRepellen)en?
• Schulkinder
• Haushalte:Luhya
• Bauern
• Hirten
• icipe–Angestellte
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Ethnobotanik
• Befragungen:PflanzenalsRepellen)en?
• Schulkinder
• Haushalte
• Bauern:Luo
• Hirten
• icipe–Angestellte
B.FreiHaller16/03/2017
icipeForschung:Ethnobotanik• Befragungen:PflanzenalsRepellen)en?
• Schulkinder
• Haushalte
• Bauern
• Hirten:Samburu
• icipe–Angestellte
B. Frei Haller 04/10/2016
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Ethnobotanik
• Befragungen:PflanzenalsRepellen)en?
• Schulkinder
• Haushalte
• Bauern
• Hirten:Maasai
• icipe–Angestellte
B.FreiHaller16/03/2017
icipeForschung:Ethnobotanik
• 19(von42)PflanzengegenAn.gambiaeuntersucht
• 12Lamiaceae
• 5Asteraceae
• 2Verbeneaceae
Ga0ungen:Tagetes,Ocimum,HypRs,Lantana,Lippia,………
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:Methoden
ÄtherischesÖlaufVorderarmgetestet6Testpersonen:600weibliche,hungrigeAnopheles-Mücken5verschiedeneKonzentra)onen
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:K&DModell
ÄtherischesÖlaufOberschenkelnvon5Testpersonengetestet6Kammernmit5weiblichen,hungrigenMückenverschiedeneKonzentra-onen,gleicheFläche
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:GC-EAG
Quelle: Forest Insect Research USDA Forest Service Southern Research Station Pineville, LA
B.FreiHaller16/03/2017
Forschung:warmbodyassay
Kröber, Kessler, Frei, Bourquin, Guerin 2010 J Am Mosq Control Ass.26(4):381-6.
Top Related