Tipps und Tricks zur schnellen LC

Sebastian KraheProduktspezialist LCAgilent Technologies Deutschland & Österreich

LC Forum, Mai 2011

Agilent 1290 Infinity

1290 Pumpe

• Binäre Pumpe mit zwei Pumpenköpfen pro Eluent

• Eluentschaltventil für 4 Eluenten

• Eingebauter Degasser• Eingebauter Degasser

1290 Pumpe - Pflege

• Pause am Wochenende schwierig für jedePumpe

• Vorsicht bei Puffern

1290 Pumpe - Was ist Prime und Purge??

• Volumen des Degasers:

• => 1,5 mL

• Volumen des Leitungen:

• => 10 mL

• Nach dem Wochenende PURGE:• Nach dem Wochenende PURGE:

• => Spülen der Pumpe unter definierten Fluss, Komposition und Zeitfenster

• PRIME: für schnellen und rapiden Fluss zum Spülen der Pumpe

• Gut gegen Luftblasen in den Leitungen, da maximaler Fluss aller Motoren der Pumpe eingestellt wird

1290 Pumpe – noch besser als Purge und Prime

• Geringer Fluss für Nacht und Wochenende einstellen, z.B. 10 µL/min

• Eventuelle Schwebeteilchen setzen sich nicht ab

• Pumpenventile bleiben in Bewegung

• Eluent Recykler einsetzen• Eluent Recykler einsetzen

• Isokratischer Fluss im Kreislauf

1290 Pumpe – Eluenten und Puffer

• Partikel und Bakterien stören das System, daher

• => Wasser filtrieren.

• Puffer mit filtrierten Wasser ansetzen und

• => nochmal filtrieren.

• Organische Lösemittel benötigen i.d.R. keine Filtration

• Aktive Hinterkolbenspülung verhindert, dass Salzkristalle beim Pumpenstillstand sich auf die Kolbenoberflächen legen.

• Was passiert mit Kapillaren, der Detektorzelle, den Säulen?

• Besser: Puffer bei kurzer Systemstilllegung entfernen!

• => Bei TCC mit Ventil: Säule auskoppeln und System über Restriktorkapillare spülen

Anschlüsse Ventile und Degasser

•Drehmomentschlüssel verwenden

1290 Infinity Autosampler

•Spülvials – Regelmässig Spülmittel tauschen

•Vial ohne Septum einstellen

•Bei viskosen Probe – Draw Speed und Equilibration Time anpassen – langsamer aufziehen und länger equilibrieren

•Flush Port – Nadelaussenseite wird nach Aufziehen der Probe •Flush Port – Nadelaussenseite wird nach Aufziehen der Probe gespült in a) Spülvial b) Flush port

Injektionsprinzip: 1) vor Injektion

2) Probe aufziehen – Ventil auf Bypass geschaltet

11Agilent Confidential

3) Nadelaussenseite spülen

12Agilent Confidential

4) Nadel in Flussweg

13Agilent Confidential

5) Probe injiziert – Fluss auf Mainpass

14Agilent Confidential

Beschleunigung durch Überbrückung

•Nach der Injektion schaltet nach der Injektion auf Bypass –Gradient umgeht den Autosampler

⇒Einstellung über Aktivierung der Automatic Delay Volume Reduction und Sample Flush out Factor

Overlapped Injection

•Vor Start des neuen Laufes wird die Probe aufgezogen

•Injektion startet durch Umlegen des Ventils sofort

•Zeitgewinn

Sandwish Injektion

•Problem: schlechte Injektionspräzision

•Eluent wässrig

•Probe in Aceton

•=> Probe hängt an Nadelspitze und verdampft

•Reihenfolge beachten:

•Erst Probe, dann Eluent (dann Luftblase)

1290 Infinity Inline Filter

Designed for low carryoverDirect connection to the injection valve or the column1200-bar compatibilityDead volume 1.3ulFilter 0.3umRigid or flexible capillaries

Group/Presentation TitleAgilent Restricted

Month ##, 200XPage 18

1290 Infinity Inline Filter (0.3um) 5067-4638

1 Filter cap Non orderable

2 Filter housing Non orderable

3 Fitting insert Non orderable

4 SST capillary rigid 5067-4637

5 SST capillary flexible 5067-4636

6 Filter frits (0.3um) 5023-0271 (5/pk)

TCC - Säulenofen

•Säulenofen mit zwei Heizzonen und mehreren Heatexchanger (6 µL, 3 µL, 1.6 µL)

•Temperiert bis zu 100°C

•Herausforderung: Temperaturgradient zwischen TCC und Detektor sorgt für unruhige BasislinieDetektor sorgt für unruhige Basislinie

Lösung

Verwendung der zweiten Heizzone zum Kühlen!

Edelstahl oder Polymer-Fittings für Agilent Säulen

• Edelstahl ist die beste Wahl(SS) für einezuverlässige Hochdruckdichtung> Agilent benutzt Swagelok Typ Fittings 1/16” mit front and

back ferrules in Edelstahl – erzielt besteVerbindungsergebinsse – für verschiedene LC-Systeme

• PEEK (< 400 bar Systemdruck) ist ideal wenn> Wenn häufig Verbindungen geändert werden

> Fingerfest, kein Werkzeug notwendig

May 30, 2011Confidentiality Label

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> Fingerfest, kein Werkzeug notwendig

• Edelstahl Fitting mit Back Ferrule Edelstahl und Front Ferule PEEK

> wiederverwendbar

> Verwendbar bis 1380 bar p/n 5067-4733

> Für Standard 1.6 mm (1/16”) Edelstahlrohr