Post on 06-Apr-2015
James P. Allison, Bradley W. McIntyre, und David Bloch
Turmor-specific antigen of murine T-lymphoma defined with monoclonal antibody
Anna Summerer 01.03.2011
Fachmodul Immunologie WS 10/11
Übersicht
AutorStand der Wissenschaft um 1980Herstellung spezifischer AntikörperStruktur von Ag 124-40SchlüsselexperimentHeutiger StandZusammenfassungQuellen
James P. Allison
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• Forscher auf dem Gebiet der T-Zellen
• Mitglied der National Academy of Sciences
• Die Isolierung des T-Zell-Rezeptors war eine der wichtigsten Entdeckungen der Immunologie in den letzten 20 Jahren
Stand der Wissenschaft um 1980
Herstellung spezifischer Antikörper
Hybridomzellen: Fusion von Myelomzellen mit Milzzellen von einer, mit
einem Lymphom (C6XL) immunisierten, Maus Ein Hybridom sekretiert Mab 124-40
Mab 124-40: spezifisch für C6XL Lymphomzellen Nicht reaktiv mit normalen lymphatischen Zellen Bezieht sich nicht auf MuLV Glycoproteine
Ag 124-40: individuelles Tumor-spezifisches Antigen
Struktur von Ag 124-40
Zwei-dimensionale Gelelektrophorese des Antigen Präzipitats mit Mab 124-40
• Erste Dimension:Isoelektrische Fokusierung unter reduzierenden Bedingungen
• Zweite Dimension:SDS-PAGE
Struktur von Ag 124-40
• Glycoprotein• Besteht aus zwei Hauptkomponenten
1. pI: 5,5 ; 39000 m.w.2. pI: 7 ; 41000 m.w.
Exprimieren andere T-Zellen ähnliche Oberflächenmoleküle?
Zwei-Dimensionelle SDS-PAGE mit verschiedenen lymphatischen Zellen
• Erste Dimension: Nicht reduzierende Bedingungen
• Zweite Dimension: reduzierende Bedingungen
• A: Ag 124-40 Präziitat mit Mab 124-40
• B: Gesamt Extrakt von C6XL Lymphomzellen
• C: Gesamt Extrakt von Milz T-Zellen• D: Gesamt Extrakt von Milz B-Zellen• E: Gesamt Extrakt von Thymocyten• F: Gesamt Extrakt von
Knochenmarkszellen
A B
C D
E F
68K-43K-29K-
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Exprimieren andere T-Zellen ähnliche Oberflächenmoleküle?
Fragment von T-Zell Extrakt liegt auf exakt der selben Stelle wie Ag 124-40
Normale Thymocyten und T-Zellen weisen Oberflächenmoleküle mit der selben Struktur wie AG 124-40 auf
B-Zellen und Knochenmarkszellen exprimieren diese Moleküle nicht
Ergebnis
Das Protein welches das Epitop gegen Mab 124-40 trägt scheint eine normale Komponente der T-Zell Membran zu sein
Mögliche Erklärungen I
Das reaktive Epitop könnte das Ergebnis einer Mutation in einem Gen für eine Untereinheit des Antigens sein
Mögliche Erklärungen II
• Das T-Zell Oberflächenmolekül besteht aus einer variablen und einer konstanten Region.
• Spezifische Antigene entstehen durch klonale Expansion
Heutiger Stand
Quelle: Janeway Immunobiology
Der T-Zell-Rezeptor Komplex
• Die α- und β-Kette des TCR binden den MHC-Liganden
• Die ε-,δ- und γ-Ketten des CD3 dienen zusammen mit ζ-Homodimer zur Signalübertragung
Zusammenfassung
• Produktion Monoklonaler Antikörper gegen ein Tumor spezifisches Epitop
• Das Epitop liegt auf einem Glykoprotein• Das Glykoprotein ist ein Heteroduplex
verbunden durch Disulfidbrücken• Ähnliche Strukturen sind auf T-Zellen und
normalen Thymocyten zu findenAg 124-40 ist ein klonal exprimiertes T-Zell
Antigen
Quellen
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK27130/figure/A690/
Janeway: Immunologywww.mskcc.orgJames P. Allison: The Journal of ImmunulogyLewis L. Lanier: First Sighting of the Elusive T Cell
Antigen Receptor