James P. Allison, Bradley W. McIntyre, und David Bloch

Turmor-specific antigen of murine T-lymphoma defined with monoclonal antibody

Anna Summerer 01.03.2011

Fachmodul Immunologie WS 10/11

Übersicht

AutorStand der Wissenschaft um 1980Herstellung spezifischer AntikörperStruktur von Ag 124-40SchlüsselexperimentHeutiger StandZusammenfassungQuellen

James P. Allison

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• Forscher auf dem Gebiet der T-Zellen

• Mitglied der National Academy of Sciences

• Die Isolierung des T-Zell-Rezeptors war eine der wichtigsten Entdeckungen der Immunologie in den letzten 20 Jahren

Stand der Wissenschaft um 1980

Herstellung spezifischer Antikörper

Hybridomzellen: Fusion von Myelomzellen mit Milzzellen von einer, mit

einem Lymphom (C6XL) immunisierten, Maus Ein Hybridom sekretiert Mab 124-40

Mab 124-40: spezifisch für C6XL Lymphomzellen Nicht reaktiv mit normalen lymphatischen Zellen Bezieht sich nicht auf MuLV Glycoproteine

Ag 124-40: individuelles Tumor-spezifisches Antigen

Struktur von Ag 124-40

Zwei-dimensionale Gelelektrophorese des Antigen Präzipitats mit Mab 124-40

• Erste Dimension:Isoelektrische Fokusierung unter reduzierenden Bedingungen

• Zweite Dimension:SDS-PAGE

Struktur von Ag 124-40

• Glycoprotein• Besteht aus zwei Hauptkomponenten

1. pI: 5,5 ; 39000 m.w.2. pI: 7 ; 41000 m.w.

Exprimieren andere T-Zellen ähnliche Oberflächenmoleküle?

Zwei-Dimensionelle SDS-PAGE mit verschiedenen lymphatischen Zellen

• Erste Dimension: Nicht reduzierende Bedingungen

• Zweite Dimension: reduzierende Bedingungen

• A: Ag 124-40 Präziitat mit Mab 124-40

• B: Gesamt Extrakt von C6XL Lymphomzellen

• C: Gesamt Extrakt von Milz T-Zellen• D: Gesamt Extrakt von Milz B-Zellen• E: Gesamt Extrakt von Thymocyten• F: Gesamt Extrakt von

Knochenmarkszellen

A B

C D

E F

68K-43K-29K-

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Exprimieren andere T-Zellen ähnliche Oberflächenmoleküle?

Fragment von T-Zell Extrakt liegt auf exakt der selben Stelle wie Ag 124-40

Normale Thymocyten und T-Zellen weisen Oberflächenmoleküle mit der selben Struktur wie AG 124-40 auf

B-Zellen und Knochenmarkszellen exprimieren diese Moleküle nicht

Ergebnis

Das Protein welches das Epitop gegen Mab 124-40 trägt scheint eine normale Komponente der T-Zell Membran zu sein

Mögliche Erklärungen I

Das reaktive Epitop könnte das Ergebnis einer Mutation in einem Gen für eine Untereinheit des Antigens sein

Mögliche Erklärungen II

• Das T-Zell Oberflächenmolekül besteht aus einer variablen und einer konstanten Region.

• Spezifische Antigene entstehen durch klonale Expansion

Heutiger Stand

Quelle: Janeway Immunobiology

Der T-Zell-Rezeptor Komplex

• Die α- und β-Kette des TCR binden den MHC-Liganden

• Die ε-,δ- und γ-Ketten des CD3 dienen zusammen mit ζ-Homodimer zur Signalübertragung

Zusammenfassung

• Produktion Monoklonaler Antikörper gegen ein Tumor spezifisches Epitop

• Das Epitop liegt auf einem Glykoprotein• Das Glykoprotein ist ein Heteroduplex

verbunden durch Disulfidbrücken• Ähnliche Strukturen sind auf T-Zellen und

normalen Thymocyten zu findenAg 124-40 ist ein klonal exprimiertes T-Zell

Antigen

Quellen

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK27130/figure/A690/

Janeway: Immunologywww.mskcc.orgJames P. Allison: The Journal of ImmunulogyLewis L. Lanier: First Sighting of the Elusive T Cell

Antigen Receptor