Post on 06-Feb-2018
MassenspektrometrieMassenspektrometrie in komplexen Matrices: in komplexen Matrices: was können ESI, APCI und MALDI ?was können ESI, APCI und MALDI ?
Jahrestagung Regensburg 2004Gemeinsame FachgruppentagungFachgruppen Arzneimittelkontrolle/Pharmazeutische Analytik und Klinische Pharmazie"Analytik aus komplexen Matrices: Proteine, Biotechnik, Pharmakokinetik"
Dr. Klaus RaithDr. Klaus RaithMartinMartin--LutherLuther--Universität HalleUniversität Halle
Institut für Pharmazeutische Technologie und BiopharmazieInstitut für Pharmazeutische Technologie und BiopharmazieWolfgangWolfgang--LangenbeckLangenbeck--StrStr. 4. 4
DD--06120 Halle06120 Halle
IonisationsmethodenIonisationsmethodenIonisation in der Gasphase: EI, CIIonisation in der Gasphase: EI, CIVerdampfung der Probe notwendigVerdampfung der Probe notwendiggeeignet für GC/MSgeeignet für GC/MS--KopplungKopplungIonisation aus flüssiger Phase: ESI, APCI, APPIIonisation aus flüssiger Phase: ESI, APCI, APPIVerdampfung des Lösungsmittels erforderlichVerdampfung des Lösungsmittels erforderlichIonisation unter Atmosphärendruck (API)Ionisation unter Atmosphärendruck (API)geeignet für LC/MS und CE/MSgeeignet für LC/MS und CE/MS--Kopplung (Online)Kopplung (Online)Ionisation aus fester Phase Ionisation aus fester Phase MALDI (Matrix MALDI (Matrix AssistedAssisted Laser Laser DesorptionDesorption Ionisation)Ionisation)Präparation der Probe zusammen mit spezieller MatrixPräparation der Probe zusammen mit spezieller Matrixgeeignet für qualitative und halbquantitative geeignet für qualitative und halbquantitative Untersuchung von Biomolekülen, bes. Proteinen und Untersuchung von Biomolekülen, bes. Proteinen und KohlenhydratenKohlenhydrateni.d.Ri.d.R. nur Offline. nur Offline--Kopplung möglichKopplung möglich
ESI: Probleme in komplexen MatricesESI: Probleme in komplexen Matrices
Signalunterdrückung (z.B. Signalunterdrückung (z.B. TensideTenside))Nichtflüchtige Salze (Phosphat, Borat, Sulfat) verstopfen Nichtflüchtige Salze (Phosphat, Borat, Sulfat) verstopfen ProbeneinlaßProbeneinlaß, verschlechtern Empfindlichkeit (auch , verschlechtern Empfindlichkeit (auch durch Bildung neutraler Komplexe)durch Bildung neutraler Komplexe)Wechselwirkung mit Ionen gleicher Ladung (Common Wechselwirkung mit Ionen gleicher Ladung (Common Ion Ion InterferencesInterferences), z.B. ), z.B. AdduktbildungAdduktbildung, schlechtere , schlechtere EvaporationEvaporationPolarität oder Flüchtigkeit des Lösungsmittels nicht Polarität oder Flüchtigkeit des Lösungsmittels nicht optimaloptimalEvtl. ungünstiger Evtl. ungünstiger pHpHProbleme beheben oder umgehen durch Probleme beheben oder umgehen durch Probenvorbereitung, Chromatographie (LC/MS)Probenvorbereitung, Chromatographie (LC/MS)
MALDI: BesonderheitenMALDI: Besonderheiten
Generell weniger anfällig als ESIGenerell weniger anfällig als ESIPräparation: Präparation: DriedDried DropletDroplet, , ThinThin--LayerLayer, , Lsm.Lsm.--freifreiGgf. Entsalzung notwendigGgf. Entsalzung notwendigPolymere: ggf. SEC bei zu hoher Polymere: ggf. SEC bei zu hoher PolydispersitätPolydispersitätStörungen im unteren Massenbereich (<500) durch Störungen im unteren Massenbereich (<500) durch PeaksPeaks der der MALDIMALDI--MatrixMatrixPSD: Relativ ungenaue Isolation durch Timed Ion PSD: Relativ ungenaue Isolation durch Timed Ion SelectorSelector (10(10--20 Da)20 Da)LC/LC/MALDIMALDI--KopplungKopplung über Probenroboter vorteilhaftüber Probenroboter vorteilhaftQuantitative und semiquantitative AnsätzeQuantitative und semiquantitative Ansätze
ProbenvorbereitungProbenvorbereitung
Notwendigkeit: störende Salze, Matrixkomponenten (z.B. Notwendigkeit: störende Salze, Matrixkomponenten (z.B. PlasmaproteinePlasmaproteine), zu geringe Konzentration), zu geringe KonzentrationAPIAPI--TechnikenTechniken besonders empfindlich (besonders empfindlich (v.av.a. ESI), MALDI . ESI), MALDI robusterrobusterMethoden:Methoden:FlüssigFlüssig--FlüssigFlüssig--ExtraktionExtraktionFestphasenextraktion (SPE)Festphasenextraktion (SPE)ZipTipsZipTips, , NutipsNutips und Ähnliches (vereinfachte SPE)und Ähnliches (vereinfachte SPE)IonenaustauschIonenaustauschAffinitätsmedienAffinitätsmedienEntfernung von Entfernung von PlasmaproteinenPlasmaproteinen: Ultrafiltration, : Ultrafiltration, ACNACN--FällungFällungSäulenschaltung, LC/LCSäulenschaltung, LC/LC
Wie löst man QuantifizierungsWie löst man Quantifizierungs--problemeprobleme mittels LC/MS ?mittels LC/MS ?
Quantitative Aussagen nur durch Vergleich mit Standards möglich Quantitative Aussagen nur durch Vergleich mit Standards möglich !!Quantifizierung anhand der Quantifizierung anhand der PeakflächenPeakflächen in einem in einem ChromatogrammChromatogramm(FIA oder LC/MS), (FIA oder LC/MS), i.d.Ri.d.R. nicht anhand der . nicht anhand der PeakhöhePeakhöhe im im Massenspektrum !Massenspektrum !Optimal: Linearer ZusammenhangOptimal: Linearer ZusammenhangResponse: Response: PeakflächePeakfläche = RF x Konzentration= RF x KonzentrationRF = ResponseRF = Response--FaktorFaktor
Responsefaktor Responsefaktor mußmuß für Standard und Probe gleich sein !für Standard und Probe gleich sein !In Praxis häufig nicht linear über gesamten Bereich In Praxis häufig nicht linear über gesamten Bereich →→andere andere adäquate adäquate FktFkt. verwenden, z.B. Polynom 2. Grades. verwenden, z.B. Polynom 2. Grades
Wie löst man QuantifizierungsWie löst man Quantifizierungs--problemeprobleme mittels LC/MS ?mittels LC/MS ?
Welcher Typ von Analytliegt vor ?
Standards vorhanden ?
Normalisierung
verwenden
Interne oder Externe Standardisierung
verwenden
JaNein
Überprüfung der MethodeAnalytische Parameter
Unbekannt Bekannt
VermutetnormalerweiseStd. vorhanden
Welche Standardisierung ?
Muß mit Matrixeffekten
gerechnet werden ?
Muß die Proben-vorbereitung und
Wiederfindung berück-sichtigt werden ?
Ja
Ja
Nein
Genug Zeitum Int.-Std.-Methode
zu entwickeln ?Nein
Nein
Ja
InterneStandardisierung
ExterneStandardisierung
3 Arten von internen Standards:
Standardzugabe(Analyt selbst)
Chemische Analogsubstanz
Isotopen-markierter
Analyt
• schnell und einfach
• geringe Probenanzahl
• komplexe Probe
• linearer Response
• Spurenidentifizierung (Spiking)
• Probenvorbereitung berücksichtigt
• hohe Genauigkeit
• genug Zeit und Geld vorhanden
• passender Standard verfügbar (!)
• Probenvorbereitung berücksichtigt
• hohe Genauigkeit• hohe Meßrate
erforderlich• genug Geld vorhanden• berücksichtigt auch
Zufallsabweichungen und Nichtlinearität
• passender Standard (stabiles Isotop) verfügbar (!)
Beispiele Beispiele
Analytik von Analytik von StratumStratum--corneumcorneum--CeramidenCeramidenAnalytik von Analytik von CholesteroloxidationsproduktenCholesteroloxidationsprodukten in in NahrungsmittelnNahrungsmittelnAnalytik von Analytik von ElastinElastinPeptide in Peptide in NahrungsproteinhydrolysatenNahrungsproteinhydrolysaten
Analytik von Analytik von StratumStratum--corneumcorneum--CeramidenCeramiden
Matrix: Lösungsmittelextrakte aus Hornhaut Matrix: Lösungsmittelextrakte aus Hornhaut in vivoin vivo oder oder ex vivoex vivoVortrennung der Vortrennung der CeramidklassenCeramidklassen an Normalphasenmaterial:an Normalphasenmaterial:Trennung nach Anzahl und Stellung der Trennung nach Anzahl und Stellung der HydroxygruppenHydroxygruppen, rel. , rel. unabhängig von der Kettenlängeunabhängig von der KettenlängeAnalytik der Analytik der CeramidklassenCeramidklassen mittels mittels MassenspektrometrieMassenspektrometrie zur zur Untersuchung der molekularen Zusammensetzung inkl. Untersuchung der molekularen Zusammensetzung inkl. KettenlängenKettenlängenMöglichkeiten: TLCMöglichkeiten: TLC--RPLCRPLC--ESIESI--MS oder (SPE)MS oder (SPE)--NPLCNPLC--APCIAPCI--MSMSMS/MS zur StrukturidentifizierungMS/MS zur Strukturidentifizierung
O
OO
NH OH
OH
O
NHOH
OH
O
NHOH
OHOH
O
OO
NH OH
OHOH
O
NHOH
OH
OHO
NHOH
OHOH
OH
O
NHOH
OH
OH
OH
Ceramide 1 [EOS]
Ceramide 2 [NS] Ceramide 3 [NP]
Ceramide 4 [EOH]
Ceramide 5 [AS] Ceramide 6 [AP]
Ceramide 7 [AH]
Analytik von Analytik von StratumStratum--corneumcorneum--CeramidenCeramiden
LipidExtraction
AMD-HPTLC
DensitometricQuantification of Lipid Classes
LC/MS
Preparation of BandsReextraction(MeOH/Chloroform 1:1)
1 2 3 4 5 6 7Time (min)
0
50
1000
50
1000
50
1000
50
1000
50
100 m/z= 580.5
m/z= 608.5
m/z= 636.5
m/z= 664.5
m/z= 692.5
Rel
ativ
e In
tens
ity
0
20
40
60
80
100
540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760
m/z
Rel
ativ
e A
bund
ance
in %
200 250 300 350 400 450 500 550 600m/z
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rel
ativ
e A
bund
ance
308.4
534.5
548.4
324.3300.3518.6283.5
567.5265.4
239.4
Negative ESI-MS/MS
N
O
OH
OH
Ceramide II [M-H]N-Stearoylsphinganine
-
m/z=567
RO
N
R
RO
N
OH
m/z=518
m/z=324
NH2
OR
OH
m/z=300
-H2O
-CH2OH,-2H
m/z=548
m/z=534
Stearic acidm/z=283
RO
N
m/z=308R
O
m/z=265
R Om/z=239
H3N
OHOH
OH
Phytosphingosine [M+H]
+
+
m/z=318
-H2O
m/z=300
-H2O
m/z=282
-H2O
m/z=264
-H2 NH+
NH
O
OH
OH
OHOH
H+
Ceramide 6 (Cer[AP]) m/z= 601 ([M+H]+)
MS/MS
MS3
MS4
MS5
MS6
N-2-Hydroxystearoyl-phytosphinganine
Positive ESI-MSn
m/z=262
Analytik von Analytik von StratumStratum--corneumcorneum--CeramidenCeramiden
The densitometric chromatogram of the standardlipids. 1: start, 2: cholesterol-3-sulfate, 3: first peakof synthetic ceramide AP, 4: double peak of bothceramide AS and the second peak of ceramideAP, 5: ceramide NP, 6: ceramide NS, 7: cholesterol, 8: palmitic acid, 9: triolein, 10: cholesteryl oleate, 11: squalene.
The densitometric chromatogram of the standard lipids. 1: start, 2: cholesterol-3-sulfate, 3: first peak of syntheticceramide AP, 4: double peak of both ceramide AS and thesecond peak of ceramide AP, 5: ceramide NP, 6: ceramideNS, 7: cholesterol, 8: palmitic acid, 9: triolein, 10: cholesteryloleate, 11: squalene.
Analytik von Analytik von StratumStratum--corneumcorneum--CeramidenCeramiden
LC chromatogram of the skin ceramides. 1: Cer [EOS], 2: Cer [NS], 3: Cer [NP], 4: Cer[EOH], 5: Cer [AS], 6: Cer [AP], 7: Cer [AH].
APCI-MS spectrum of ceramide [NP].
Analytik von Analytik von CholesteroloxidationsproduktenCholesteroloxidationsprodukten in in NahrungsmittelnNahrungsmitteln
OH OH O
OH
OH
OH
OH
OH
OHO
OH OH
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Time in min
0
20
40
60
80
100
Relative Abundancein%
6
5
3
2
1
4
Separation of COP standards with LC/APCI-MS. 1: 25-hydroxycholesterol, 2: cholestane-3β-5α-6β-triol, 3: 7β -hydroxycholesterol, 4: 7-ketocholesterol, 5: 5,6 α-epoxycholesterol, 6: cholesterol.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Time in min
050
1000
50100
050
1000
50100
050
1000
50100 m/z= 400.7-401.7
m/z= 366.7-367.7
m/z= 368.7-369.7
m/z= 384.7-385.7
m/z= 400.7-401.7
m/z= 504.5-505.5
4
RelativeAbundancein %
3
6
25
4
1
0
Quantification of COP's in egg extract with LC/APCI-MS. 0: internal standard betamethasone-17,19-dipropionate, 1: 25-hydroxycholesterol, 2: cholestane-3β-5α-6β-triol, 3: 7β-hydroxycholesterol, 4: 7-ketocholesterol, 5: 5,6α-epoxycholesterol, 6: cholesterol.
Analytik von Analytik von ElastinElastin
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950 1000M/z0
100
%
bovine elastin, pepsin digest, 1:10bel-p-040910_1012 MaxEnt 3 300 [Ev-178354,It50,En1] (0.050,200.00,0.200,1400.00,1,Cmp) 1: TOF MSMS 1012.40ES+
GL G G V G G L G V G G L bMax L G G V G L G G V G G L G yMax
1012.42(M+H) +
749.32593.25
384.16b5
356.17a5
341.25311.12285.11b4
271.10155.06
86.09L
72.08V 119.08
228.10b3214.09
583.27a8
480.18441.17
b6413.18
a6
470.20a7
515.23y6 572.25
y7
552.23
629.27y8 650.26
739.34a10
668.27b9
722.31670.20
767.33b10
994.44806.35
785.35y10
842.35y11
863.35 881.36b12
974.40923.33
1013.50
1014.34
Peptid aus Pepsinverdau von bovinem Elastin (Q-TOF 2)
Analytik von Analytik von ElastinElastin
nanospray
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200m/z0
100
%
0
100
%
belast2 547 (10.748) Cm (143:565) TOF MS ES+ 7.88e3415.204
391.279216.202114.109
130.176 359.322331.277
528.293
416.211
507.329
724.457595.395 639.420 794.582
833.492 877.534
921.557965.605
1009.630 1053.6421180.713
belast0 112 (2.266) Cm (87:121) TOF MS ES+ 4.05e3122.105104.089
56.077 415.229
400.269
243.181
122.357
123.117
173.123
386.257
343.248303.212
244.194
442.325
499.343527.393
570.383
648.474620.436
830.560766.562708.363
709.406831.595
887.673 1076.770
Verdau von bovinem Elastin mit Thermitase (oben: nach ZipTip C18)
Analytik von Peptiden in Analytik von Peptiden in NahrungsproteinhydrolysatenNahrungsproteinhydrolysaten
LC/MS: Kompromiss zwischen optimaler chromatographischer LC/MS: Kompromiss zwischen optimaler chromatographischer Trennung und optimaler ElektrosprayTrennung und optimaler Elektrospray--IonisationIonisationbinärer Gradient 5binärer Gradient 5--50% ACN in 60 min,50% ACN in 60 min,0,1% Ameisensäure, alternativ 0,01% TFA0,1% Ameisensäure, alternativ 0,01% TFA
Chromatogramm/Spektrum einer β-Casein-Fraktion
Analytik von Peptiden in Analytik von Peptiden in NahrungsproteinhydrolysatenNahrungsproteinhydrolysaten
TANDEM-MS
de-novoDatenbank
- Sequenzierung direkt aus den Tandem-MS-Spektren
- besondere technische Anforderungen an die MS (hohe Massengenauigkeit und Auflösung …)
Zuordnung einer Peptid-sequenz durch Vergleich von experimentell erhaltenen Tandem-MS-Daten mit errechneten anhand einer Protein- oder Peptid-datenbank.
Analytik von Peptiden in Analytik von Peptiden in NahrungsproteinhydrolysatenNahrungsproteinhydrolysaten
Peak No.a Sequence identifiedb
calc. [M+H]+
β-Casein residuesc MCd
MALDI-PSD
ESI-MS/MS MSDB Expected?
1 <SL>e 219.13 0 ● ●
2 A<FL>Le 279.17 205-206 1 ● ●
3 S<LTL>T 346.23 140-142 - ● ● ○
4 <QSL>e 347.19 - ● ○
5 Q<AFL>L 350.21 204-206 2 ● ● ●
6 A<FLL>Y 392.25 205-207 2 ● ● ●
7 L<QSW>M 420.19 156-158 1 ● ●
8 S<LTLT>D 447.28 140-143 - ● ○
9 Q<AFLL>Y 463.29 204-207 3 ● ● ●
10 L<LYQE>P 552.27 207-210 3 ● ●
11 A<FLLY>Q 555.32 205-208 3 ● ● ●
12 S<QSLTL>T 561.32 138-142 - ● ● ○
13 S<LTLTD>V 562.31 140-144 - ● ● ○
14 F<PPQSVL>S 640.37 173-178 1 ● ● ●
15 I<PPLTQT>P 656.36 90-95 - ● ● ○
16 F<LLYQE>P 665.35 206-210 4 ● ● ●
17 RELEE>L 675.33 16-20 3 ● ● ●
18 L<YQEPVL>G 748.39 208-213 3 ● ● ●
19 M<FPPQSVL>S 787.43 172-178 2 ● ● ●
20 V<PPFLQPEVM>G 1057.54 100-108 - ● ● ● ○
21 G<PVRGPFPIIV 1094.67 215-224 - ● ● ● ○
22 E<PFTESQSLTL>T 1122.57 133-142 4 ● ● ●
23 L<GPVRGPFPIIV 1151.69 214-224 1 ● ● ● ●
24 T<PVVVPPFLQPEVM>G 1451.80 96-108 - ● ● ● ○
25 E<PVLGPVRGPFPIIV 1460.90 211-224 2 ● ● ●
26 L<TDVENLHLPLPLL>Q 1473.83 143-155 5 ● ● ● ●
27 L<TDVENLHLPLPLLQS>W 1688.92 143-157 - ● ● ● ○
28 S<WMHQPHQPLPPTVM>F 1698.82 158-171 - ● ● ● ○
29 L<YQEPVLGPVRGPFPIIV 1881.06 208-224 5 ● ● ● ●
30 L<LYQEPVLGPVRGPFPIIV 1994.15 207-224 6 ● ● ● ●
31 F<LLYQEPVLGPVRGPFPIIV 2107.23 206-224 7 ● ● ●
32 S<WMHQPHQPLPPTVMFPPQSVL>S 2467.24 158-178 - ● ● ○
33 L<QSWMHQPHQPLPPTVMFPPQSVL>S 2682.33 156-178 7 ● ● ●
34 L<SLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQ>A 2806.53 179-203 7 ● ● ●
35 L<SLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQA>F 2877.57 179-204 8 ● ● ●
36 L<SLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQAF>L 3024.63 179-205 9 ● ●
37 H<LPLPLLQSWMHQPHQPLPPTVMFPPQSVLSLSQS>K 3831.01 150-183 - ● ○
38 L<VYPFPGPIHNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVM>G 3863.06 74-108 10 ● ● ●
SQSKVLPVPQ KAVPYPQRDM PIQAFLLYQE PVLGPVRGPF PIIV
| | | |
190 200 210 220
HKEMPFPKYP VEPFTESQSL TLTDVENLHL PLPLLQSWMH QPHQPLPPTV MFPPQSVLSL
| | | | | |
130 140 150 160 170 180
QDKIHPFAQT QSLVYPFPGP IPNSLPQNIP PLTQTPVVVP PFLQPEVMGV SKVKEAMAPK
| | | | | |
70 80 90 100 110 120
MKVLILACLV ALALARELEE LNVPGEIVES LSSSEESITR INKKIEKFQS EEQQQTEDEL
| | | | | |
10 20 30 40 50 60
SQSKVLPVPQ KAVPYPQRDM PIQAFLLYQE PVLGPVRGPF PIIV
| | | |
190 200 210 220
HKEMPFPKYP VEPFTESQSL TLTDVENLHL PLPLLQSWMH QPHQPLPPTV MFPPQSVLSL
| | | | | |
130 140 150 160 170 180
QDKIHPFAQT QSLVYPFPGP IPNSLPQNIP PLTQTPVVVP PFLQPEVMGV SKVKEAMAPK
| | | | | |
70 80 90 100 110 120
MKVLILACLV ALALARELEE LNVPGEIVES LSSSEESITR INKKIEKFQS EEQQQTEDEL
| | | | | |
10 20 30 40 50 60
SQSKVLPVPQ KAVPYPQRDM PIQAFLLYQE PVLGPVRGPF PIIV
| | | |
190 200 210 220
HKEMPFPKYP VEPFTESQSL TLTDVENLHL PLPLLQSWMH QPHQPLPPTV MFPPQSVLSL
| | | | | |
130 140 150 160 170 180
QDKIHPFAQT QSLVYPFPGP IPNSLPQNIP PLTQTPVVVP PFLQPEVMGV SKVKEAMAPK
| | | | | |
70 80 90 100 110 120
MKVLILACLV ALALARELEE LNVPGEIVES LSSSEESITR INKKIEKFQS EEQQQTEDEL
| | | | | |
10 20 30 40 50 60
Sequenzierte Peptide des peptischen Verdaus β-Caseins
DatenbanksucheDatenbanksuche
Datenbanksuchprogramm
Sequenz-Datenbanken
Taxonomie
Modifikationen
Miss. Cleavagesetc.
Protease
MSMS--DatenDaten
MS und/oder MS/MS
Sequenzen(Peptide Proteine)
(Mascot Server)
(MSDB, SwissProt, NCBI)
ProzessierungProzessierungProbleme bei der Peakerkennung:
-Erkennung von Peaks geringer Intensität-Auswahl von Peaks die dem Grundrauschen entstammen-Auswahl der/des falschen Peaks oder aller Peaks auseinem Isotopen-Cluster
Segment aus MALDI-PSD-Spektrum
12
Zusätzliche Probleme inMALDI-PSD-Spektren:
(1) Baseline-“Sprünge“(2) S/N klein
Signalpeaks schwer vomRauschen unterscheidbar
ProzessierungProzessierung
Mascot Distiller
iterativ arbeitende Software, die bei der Detektion von Signalpeaks die durchschnittliche Isotopenverteilung von Peptiden zu Grunde legt und während der Suche einmal als Signal erkannte Peaks vom verbleibenden Spektrum subtrahiertauch manuell nicht zu detektierende Peaks in der Größenordnung des Signalrauschens lassen sich noch sicher erkenneneignet sich auch sehr gut für Peptide Mass Fingerprinting
Verbesserte Identifizierungsquote
ZusammenfassungZusammenfassungΣVerschiedene Ionisationsmethoden Verschiedene Ionisationsmethoden komplementärkomplementär
ESI (MS/MS) ESI (MS/MS) vs.vs. MALDI (PSD) MALDI (PSD) bei Strukturaufklärungbei Strukturaufklärung
ESI ESI vs.vs. APCI bei LC/MSAPCI bei LC/MS
Bei komplexen Proben ProbenvorbereitungBei komplexen Proben Probenvorbereitungmeist meist unerläßlichunerläßlich, viele Möglichkeiten, viele Möglichkeiten
Bei Quantifizierung interne Standardisierung Bei Quantifizierung interne Standardisierung wichtig
45 95 60ESI MALDI
Detektion von 200 Proteinen:Schnittmenge und Exklusivbereiche
Pol
aritä
t
1e+1 1e+2 1e+3 1e+4 1e+5Molmasse
ESI
APCI
wichtig
DankDank
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