Testverfahren (in der Mikrobiologie und Virologie) zur Bestimmung spezifischer Antikörper im Serum oder in anderen Körperflüssigkeiten gegen infektiöse Erreger

Serologie

Titer

französisch titre: Feingehalt

reziproker Wert der höchsten Serum- bzw. Probenverdünnung, bei der

Antigen und Antikörper noch miteinander reagieren

Grenztiter / Grenzwert

• gibt den Schwellenwert an, ab dem das Ergebnis eines serologischen Nachweisverfahrens als spezifisch anzunehmen ist

• signifikante Titerdifferenz liegt vor, wenn sich zwei Proben des gleichen Patienten (im Abstand von 10-14 Tagen) in mindestens 2 Titerstufen unterscheiden

Immunglobuline

= Antikörper, Ig

= Proteine

kommen als Transmembranrezeptoren auf Zelloberfäche von B–Lymphozyten vor (= B-Zell-Rezeptoren)

Immunglobuline - Aufbau

Immunglobuline - Aufbau

Immunglobuline - Klassen

Immunglobuline - Klassen

� IgG

überwiegend im Plasma besonders wirksam bei bakteriellen Infektionen, kann aber auch bei Auto-Immunerkrankungen aktiv werden.

tritt als einziges Immunglobulin von der mütterlichen Blutbahn in den Blutkreislauf des ungeborenen Kindes über und gewährt so einen wichtigen Infektionsschutz für das Neugeborene sogar über die Geburt hinaus (mütterliche Leihimmunität)der Schutz besteht für 6-12 Monate

Immunglobuline - Klassen

IgM

besonders wirksam bei Infektionen durch Viren und tropische Parasiten (zum Beispiel Malaria) und wird beim Eindringen eines Fremdkörpers in die Blutbahn zeitlich als Erstes aktiv

Ob im Falle einer Bluttransfusion eine Blutgruppe vertragen wird oder nicht, hängt unter anderem von den Immunglobulinen der Klasse M ab.

IgA

werden im Blut, Speichel sowie Magen- und Darmsaft vorgefunden

Damit dienen sie an den Eintrittspforten des Körpersvor allem der örtlichen Abwehr von Fremdkörpern auf den SchleimhäutenNeugeborene bekommen IgA aus der Muttermilch

Immunglobuline - Klassen

Immunglobuline - Klassen

IgE

spielen bei allergischen Reaktionen (Histaminfreisetzung) und Parasitenbefall eine große Rolle

IgD

Die genaue Funktion ist noch nicht geklärt

Immunglobuline - Funktionen

Antigen – Antikörper - Reaktion

Aviditäteines Antikörpers ist die Kraft einer multivalenten Bindung zwischen Antigen und AntikörperDiese Bindung kann spezifisch odermultispezifisch sein. Multispezifisch ist sie dann, wenn ein Antikörper mit verschiedenen Antigen-Determinanten reagiert (Kreuzreaktion)

Die Affinität ist in der Biochemie ein Maß für die Bindungsstärke zwischen den Bindungspartnern bei Protein-Ligand-Wechselwirkungen

Serologische Nachweisverfahren

• Mikroskopie:direkte und indirekte Immunfluoreszenz

• ELISA

• Westernblot

• Komplementbindungsreaktion

• Agglutinationstests

• Virusneutralisationstest

ELISA

� Enzym Immuntest (EIA) bzw. � Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

� bezeichnet ein immunologisches Nachweisverfahren (Assay), basiert auf einer enzymatischen Farbreaktion

Nachweismethode für:Proteine (Antikörper, Erregerbestandteile) in einer Probe (Blutserum, Liquor, etc.)

auch niedermolekulare Verbindungen wie Hormone, Toxineund Pestizide

ELISA

ELISA

Westernblot

Nachweisverfahren für Antikörper gegen:HIV, Hepatitis C und E,

EBV, HSV 1/2, CMV

Rötelnvirus, Parvovirus B19,Hantaviren, Sandfliegenfieber

Western Blot: Prinzip

Protein/ Antigen

1.Ak (monoklonal/polyklonal)

2.Ak Anti- (human/ mouse/ goat ...) – Peroxidase oder Alkaline Phosphatase konjugiert

Membran: PVDF/ Nitrozellulose

2.3.

Substrat Färbung4.TMB/ NBT

Interpretation von Western BlotsWelcher Patient trägt das HIV?

Interpretation von Western Blots

Glykoproteine

POL-Proteine

GAG-Proteine

gp160, gp120, gp 41

p66, p51, p32

p24, p18

Komplementbindungsreaktion

Veraltetes Nachweisverfahren für Antikörper gegen:z.B. Adenoviren, Influenza- und Parainfluenzaviren, Mykoplasmen, RSV

Komplement-bindungs-reaktion

KBR

Agglutinationstests

Nachweis von Antikörpern gegenz.B. Rötelnvirus, Masernvirus, Influenzaviren

Verdünnung des Patentenserums

vollständige Hämagglutination

keine Hämagglutination

Virusneutralisationstest

Nachweisverfahren für Antikörper gegen:Poliomyelitisvirus,

Enteroviren einschl. Coxsackie- und Echoviren, Orthopockenvirus

Poliovirus - Neutralisationstest

Es werdern protektive (neutralisierende) Antikörper bestimmt.Keine einfache Methode!

Bewertung von serologischen Testen

Korrelationskoeffizientr =

. a x d – b x c √ (a+b) x (c+d) x (a+c) x (b+d)

Hepatitis A

Hepatitis B

Hepatitis B

� Basisdiagnostik: ELISA – Nachweis spez. Antikörper

6-8 Wochen nach Infektion

Bestätigung durch PCR erforderlich!

(oder Immunblot)

bei negativem PCR- Befund sollte Test nach 3-6 Monaten wiederholt werden

� Bei Neugeborenen: können noch Antikörper der Mutter vorhanden sein, PCR sollte herangezogen werden (ab 6. Lebenswoche!)

� Bei chronischen Verläufen: ggfs. Leberbiopsie durchgeführen,Diagnostik bezüglich anderer Lebererkrankungen

Hepatitis C

EBV

HIV

VZV

Röteln