Die Säule, die jeder Methodenentwickler haben...
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Die Säule, die jeder Methodenentwickler haben sollte
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Die Säule, die jeder Methodenentwickler haben sollte
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Ungefähr 80 %* der heute verwendeten pharmazeutischen Verbin-
dungen besitzen eine oder mehrere ionisierbare funktionelle Gruppen.
Es ist deshalb überaus wichtig zu verstehen, welche Auswirkungen
die Ionisierbarkeit auf die Chromatographie haben kann. Verbin-
dungen in ihrer ionischen Form zeigen im Vergleich zu ihrer neutralen
Form eine veränderte Löslichkeit und Hydrophobizität. Unter norma-
len Reversed-Phase-Bedingungen führt dies oft zu verbesserungs-
würdigen chromatographischen Ergebnissen.
Gemini-NX repräsentiert eine innovative Lösung zur HPLC-
Trennung von Verbindungen im Reversed-Phase-Modus. Die
Partikeloberfläche der Gemini-NX™ wird mittels der TWIN-NX™ Tech-
nologie hergestellt, einem weiterentwickelten Oberflächenprozess,
der es ermöglicht, einen noch stabileren Organo-Kieselgel-Partikel zu
schaffen, der außergewöhnlich effiziente Trennungen ermöglicht.
Gemini-NX überzeugt durch eine noch größere Stabilität als die
Gemini, insbesondere im hohen pH-Bereich. Sie überwindet damit die
Beschränkungen bzgl. des pH-Werts, denen Kieselgelpartikel unter-
liegen. Daraus ergibt sich eine neue Chance: den Ionisierungszustand
von gelösten Verbindungen mittels des pH-Werts der Mobilen Phase
zu kontrollieren. So können Sie die Leistung bei Trennungen im analy-
tischen und präparativen Maßstab verbessern.
Gemini®-NX
* Statistik von http://en.wikipedia.org/wiki/Partition_coefficient
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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Die neue Gemini-NX
Die Entwicklung der TWIN-NX™ Technologie
Effizienz in Open-Access-Laboratorien
Batch-Reproduzierbarkeit und Säulenstandzeit
Innovative Lösungen für die präparative Chromatographie
Gemini-NX und Axia™-Packtechnologie: Eine gewinnende Kombination
Vielseitiges Einsatzgebiet
Applikationen
Methodenentwicklung
Ladungszustand und Retention
pH-Wert und Ladungszustand
pH-Wert der Mobilen Phase zur Kontrolle der Selektivität
Praktische Vorgehensweise
Analyse ionisierbarer funktioneller Gruppen
Die Wahl des geeigneten Puffers
Nützliches für Ihr Labor
SecurityGuard™ - ein universelles Vorsäulensystem
Probenvorbereitung: Phenex™ Spritzenfilter
Gemini®-NX Bestellinformation
4-9
4-5
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8
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10-13
10-13
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Gemini®-NX
Inhaltsverzeichnis
© 2012 Phenomenex, Inc. Alle Rechte vorbehalten.Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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Gemini®-NX
Die Entwicklung der TWIN-NX™ Technologie
Eine höhere pH-Stabilität von chromatographischen Medien bedeutet
mehr Optionen und bessere Kontrolle bei HPLC-Trennungen. In der Ver-
gangenheit standen dem Chromatographieanwender nur wenige Möglich-
keiten zur Verfügung, jeweils mit gewissen Einschränkungen.
Kieselgel-Partikel besit-
zen eine herausragende
mechanische Robustheit
und Trennleistung, ha-
ben aber eine einge-
schränkte pH-Stabilität
(2-7).
OH
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Polymer-Partikel
Polymer-Partikel be-
sitzen eine exzellente
pH-Stabilität (1-14),
sind aber mechanisch
weniger belastbar und
zeigen weniger gute
Trenneigenschaften ver-
glichen mit Kieselgel-
Partikeln.
H
H
H
H
H
H
H
H
C C CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2
H
C CH C CH
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 C CH2 CH CH C
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 C CH CH CH
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH CH
CH
CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH
CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH CH
CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH CH
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH CH
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CH2
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CH CH2 CH2 CH CH CH2
CH2 CH2 CH2 CH CH
CH2 CH2 CH2 CH CH CH CH2 CH
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CH3 CH2 CH2 CH2 CH CH2 CH
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CH CH2
CH2 CH
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CH2 CH2 CH
H
CH2 CH CH3 CH H
Gemini® mit TWIN™ Technologie
Das 2004 eingeführte Gemini-Medium war
das erste Material, das auf TWIN™ (Two-In-
One) Technologie basierte. Es vereinigt eine
hohe Trenneffizienz und große mechanische
Robustheit mit einem erweiterten pH-Bereich
von 1-12. Dies wird durch eine siliziumorgani-
sche Schicht auf einem Kieselgelkern erreicht.
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R
R
Kieselgel-Partikel
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
C
Das Prinzip
Gemini-NXEthylen-Quervernetzung verhindert Auflösung bei hohen pH-Werten
Standard-KieselgelKieselgel wird aufgelöst
Mehrfach gebundene Liganden widerstehen der Abspaltung bei niedrigem pH-Wert
Ligand wird abgespalten
O
H+H+
H+
Si CH3H3C
MehrpunktverknüpfungOOO
OOO
SiSi Si
HO
HO O
H+
H+
H+
Si CH3H3C
Gemini®-NX Gemini-NX ist ein neuer Maßstab für hocheffiziente pH-Methodenentwick-
lung in der HPLC. Die Anwendung dieser neuen Technologie resultiert
in Säulen mit großer Lebensdauer und damit außergewöhnlich stabilen
Methoden, was sich wiederum positiv auf die Produktivität des Labors
auswirkt. Der Anwender kann im Durchschnitt mit einer etwa 5-Mal so
großen Stabilität von Gemini-NX gegenüber Gemini rechnen - immer abhän-
gig von den Laufbedingungen (pH, Mobile Phase).
TWIN-NX™ Technologie der zweiten GenerationGemini-NX nutzt einen weiterentwickelten, patentierten Prozess zur Aufbrin-
gung der siliziumorganischen Schicht, die durch Ethylenbrücken zusätzlich
stabilisiert. Diese organischen Gruppen sind gleichmäßig in dieser äußeren
Schicht verteilt. Der Kieselgelkern und somit die hohe Trenneffizienz und me-
chanische Stabilität bleiben erhalten, während die siliziumorganische Schicht
für die außergewöhnliche Stabilität bei hohen pH-Werten verantwortlich ist.
Der TWIN-NX Herstellungsprozess gewährleistet eine gleichmäßige Sila-
nolgruppenverteilung an der Partikeloberfläche. Somit sind die aktiven Bin-
dungsstellen homogen verteilt, was hervorragend für die Anbindung von
Liganden über mehrere Bindungsstellen ist. Diese Bindungen sind auch bei
niedrigem pH-Wert außerordentlich stabil.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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Eine ausgezeichnete Säule für eine Open-Access-UmgebungLaboratorien mit Open-Access-LC-Systemen stellen eine besondere Herausforderung für Säulen dar.
Wechselnde pH-Werte, unterschiedliche Puffer und Temperaturen stellen hohe Anforderungen sowohl
an die Säulen als auch das HPLC-System und reduzieren so normalerweise die Standzeit der Säulen.
Gemini-NX wurde deshalb unter diesen anspruchsvollen Bedingungen der Open-Access-Umgebung
getestet.
Gemini-NX - Test auf extreme Haltbarkeit bei wechselndem pH-Wert der Mobilen PhaseDie Trenneffizienz der Säule beim Test bei hohem pH-Wert bleibt auch nach 20 Testsäulen erhalten
Gemini®-NX
Effizienz in Open-Access-Laboratorien
Schritt 1 24x Spülprozedur bei hohem pH
Mobile Phase: A: 10 mM Ammonium-bicarbonat pH 10,5
B: AcetonitrilGradient: 5 % auf 95 % B in
6 min. 2 min halten bei 95 % B
Reäquilibrieren: 2 min bei 5 % BFlussrate: 1,5 mL/min
Schritt 2 Test bei hohem pH-Wert
Isokratisch: 10 mM Ammoniumbi-carbonat pH 10,5 / Acetonitril (50:50)
Flussrate: 1,5 mL/minDetektion: UV bei 230 nm
Probe: 1.2.
Tetracain Diphenhydramin
Schritt 3 1x Spülprozedur bei neutralem pH
Mobile Phase: A: WasserB: Acetonitril
Gradient: 5 % B für 2 min5 % auf 100 % B in 3 min. 5 min halten bei 100 % B
Flussrate: 1,5 mL/min
Schritt 4 Test bei neutralem pH
Isokratisch: Wasser / Acetonitril (35:65)
Flussrate: 1,0 mL/minDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.4.
AcetophenonBenzolToluolAcenaphthen
Schritt 5 24x Spülprozedur bei niedrigem pH
Mobile Phase: A: 0,5 % Ameisen-säure in Wasser
B: 0,5 % Ameisen-säure in Acetonitril, pH 2,0
Gradient: 5 % auf 95 % B in 6 min. 2 min halten bei 95 % B
Reäquilibrieren: 5 % B für 2 minFlussrate: 1,5 mL/min
Schritt 6Erneute Spülprozedur bei neutralem pH (siehe Schritt 3)
0 5 10 15 20
Zyklen
% d
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nfan
gstr
enne
f�zi
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110
100
90
80
70
60
50
DiphenhydraminTetracain
Stabile Trennleistung nach 10 000 Säulenvolumen mit Puffer bei hohem und niedrigem pH-Wert
0 5 10 15 20
Testzyklen
Ret
entio
n in
Min
uten
6
5
4
3
2
1
0
Retentionszeitenvon vier Substanzen beim Test bei neutralem pH-Wert bleiben auch nach 20 Testzyklen konstant
Die Retentionszeit bleibt auch nach 10 000 Säulenvolumen mit Puffer bei hohem und niedrigem pH-Wert nahezu unverändert
Eingesetzte Säule:Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
AcetophenonBenzol
ToluolAcenaphthen
Wiederholen der Schritte 1-6 für insgesamt 20 Zyklen
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
7
Batch-ReproduzierbarkeitGemini-NX wird mit einem hoch reproduzierbarem Produktionsprozess
hergestellt, der eine ausgezeichnete Reproduzierbarkeit von Säule zu
Säule und von Batch zu Batch gewährleistet. Der gesamte Herstellungs-
prozess wird streng kontrolliert und anspruchsvollen Qualitätskontrolltests
unterworfen. Daraus resultiert eine Säule, die sowohl für validierte Metho-
den als auch für staatlich vorgeschriebene Kontrollanalysen hervorragend
geeignet ist.
% Anfangsbodenzahl N vs. Einsatzdauer (min) bei hohem pH
Säule: Gemini-NX 5 µm C18Gemini 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
00F-4435-E0Mobile Phase: A: 10 mM Ammoniumbicarbonat pH 10,5
B: 90:10 Acetonitril / PufferGradient: 0 % auf 100 % B in 10 min. 7 min bei 100 % B
halten; 3 min bei 0 % B reäquilibrieren
Probe: 1.2.3.
ThioharnstoffPrednisolon Amitriptylin
Isokratisch I: 95 % B. Probe: AmitriptylinIsokratisch II: 55 % B. Probe: Prednisolon
Flussrate: 1,0 mL/minTemperatur: 50 ˚C
Detektion: UV bei 254 nmJeder Zyklus besteht aus:
2 isokratische Läufe / Tests + 6 Gradienten-Läufe / Tests
Batch-Reproduzierbarkeit und Säulenstandzeit
mAU
0
50
100
150
200
250
300
min0 2 4 6 8
1
2
3
4
10
Lange StandzeitGemini-NX ist verglichen mit Gemini nochmals wesentlich stabiler bei
anspruchsvollen Laufmittelbedingungen. Obwohl Gemini schon eine
hohe Robustheit besitzt, empfehlen wir bei extremen pH-Werten der
Mobilen Phase den Einsatz von Gemini-NX.
Bedingungen: Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
Mobile Phase: A: 20 mM Kaliumphosphat pH 7,0B: Acetonitril
Gradient: 5 % auf 80 % B in 10 minFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.4.
Nortriptylin Imipramin Amitriptylin Clomipramin
0 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000 30.000 35.000 40.000
Einsatzdauer (min)
0 %
20 %
40 %
60 %
80 %
100 %
120 %
Gemini-NX % der durchschnittliche Bodenzahl N(Prednisolon und Amitriptylin)
Gemini % durchschnittliche Bodenzahl N(Prednisolon und Amitriptylin)
— Batch 1— Batch 2— Batch 3
Gemini®-NX
Effizienz in Open-Access-Laboratorien
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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Gemini®-NX
Innovative Lösungen für die präparative ChromatographieAxia TrennleistungWenn Sie Ihre Methoden in den präparativen Maßstab übertragen wollen, wünschen Sie sich eine zuverläs-
sige Säule. Die Axia Packtechnologie garantiert Ihnen dabei eine lange Standzeit.
Reproduzierbare Trenneffizienz von Säule zu Säule Durchschnittliche Trenneffizienz (N) mit Synergi
4 µm Hydro-RP 100 x 21,2 mm
120,000
100,000
80,000
Bod
enza
hl (N
)
HerkömmlichePakung
Axia™ PackedHydraulic Piston
Compression Packing
60,000
40,000
HerkömmlichePakung
Axia™ PackedHydraulic Piston
Compression Packing
1.4
1.3
1.2
Pea
k A
sym
met
rie
1.1
1
27 % bessere Trenneffizienz
Reproduzierbare Peaksymmetrie von Säule zu SäuleDurchschnittliche Peaksymmetrie mit Gemini®
5 µm C18 50 x 21,2 mm
120,000
100,000
80,000
Bod
enza
hl (N
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HerkömmlichePakung
Axia™ PackedHydraulic Piston
Compression Packing
60,000
40,000
HerkömmlichePakung
Axia™ PackedHydraulic Piston
Compression Packing
1.4
1.3
1.2
Pea
k A
sym
met
rie
1.1
1
13 % bessere Peakform
* Weitere Informationen und die vollständigen Garantieleistungen finden Sie im Chromatographie Product Guide 2012/13 von Phenomenex.
2006 R&D 100 Award Recipient
Die Axia TechnologieEin neu entwickeltes Säulenpackverfahren, die zum Patent
angemeldete Hydraulic Piston Compression- (HPC) Tech-
nologie und ein innovatives Säulendesign - Axia™ - verhin-
dert die Totvolumenbildung als Hauptgrund für ein schnelles
Säulenversagen. Die ideale Packungsdichte wird für jede Säulendimension und Phase berechnet und automatisch umgesetzt. Der gesamte, computergesteuerte Prozess gewährleistet sowohl die richtige Packungsdichte als
auch die Gleichförmigkeit der Packung. Das Ergebnis ist
eine Säule mit langer Standzeit sowie hohen Trenneffi-
zienzen und ausgezeichneten Peakformen, welche ver-
gleichbar mit denen analytischer Trennungen sind!
®
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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Vorteile eines präparativen Up-Scaling bei basischem pH-WertGemini-NX ist eine exzellente Wahl für Methoden, die auch im präparativen Maßstab zur Aufreinigung
eingesetzt werden sollen.
• HoheBeladbarkeitfürbasischeVerbindungen
Unter Reversed-Phase-Bedingungen werden basische Verbindungen in ihrem neutralen
Zustand besser retiniert. Dies ist der Fall bei einem hohen pH-Wert. Gemini-NX ist bei diesen
pH-Werten außerordentlich stabil.
• HoheStandzeit
Gemini-NX ist sehr robust, so dass Sie sich auf eine konsistente und lange Lebensdauer
verlassen können.
1
0 1 32 4 5 min
1
2
3 4
5
5
ZYKLUS
ZYKLUS
ZYKLUS
480
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4
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0 1 32 4 5 min
5
51040
4
3
2
1
0 1 32 4 5 min
Gleichbleibende Leistung auch nach 480 und 1040 Zyklen pH 10,5
Säule: Gemini-NX 5 µm C18 AXIA gepacktDimension: 100 x 21,2 mm
Artikelnr.: 00D-4454-P0-AXMobile Phase: A: 0,2 % Ammoniumhydroxid
B: 0,2 % Ammoniumhydroxid in AcetonitrilGradient: A/B (5/95) in 7 min, 3 min Äquilibrieren bei
5 % BFlussrate: 30 mL/min
Temperatur: 40 °C
Diese Säulen wurden unter folgenden isokratischen Bedin-gungen getestet:Mobile Phase: Acetonitril/Wasser 65 / 35 (v/v)
Flussrate: 20 mL/minProbes: 1.
2.3.4.5.
UracilAcetophenonBenzolToluolNaphthalin
Gemini-NX und Axia™ Packtechnologie: Eine gewinnende Kombination
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
APP
ID 1
7994
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
10
Vielseitige Einsatzmöglichkeiten
Applikationen
Ausgezeichnete Trennung mit
nichtflüchtigen Puffern!
APP
ID 1
6616 Gemini®-NX 5 µm C18
APP
ID 1
6632 Thermo Hypersil-Keystone
HyPERSIL GOLD® 5 µm C18
APP
ID 1
6615 Waters®
XBridge™ 5 µm C18
Mischung von Säuren, neutralen Verbindungen und Basen mit Kaliumphosphatpuffer bei pH 2,5Säulen: Gemini-NX 5 µm C18
Zorbax 5 µm Extend-C18XBridge 5 µm C18HyPERSIL GOLD 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmMobile Phase: A: 20 mM Kaliumphosphat pH 2,5
B: AcetonitrilGradient: A/B (95:5) auf (20:80) in 8 min,
2 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
0 2 4 6 8 10 12 min
1
2
3
4
5
67
8
9
10
0 2 4 6 8 10 min
1
2,3
4
5
6
7,8
9
10
Probe: 1.2.3.4.5.6.7.8.9.
10.
PyridinChinidinSulfathiazolTriprolidinBenzylalkoholPhenol Nortriptylin3-Methyl-4-nitrobenzoesäureMethylsalicylaldehydHexanophenon
Trennleistung mit nicht flüchtigen PuffernGemini-NX wurde speziell für den Einsatz in der Pharma-Industrie entwickelt, wo schwierige Proben und
anspruchsvolle Laufmittelbedingungen der Alltag sind. Die gleichbleibend hohe Trennleistung und die Ro-
bustheit der Phase vereinfachen die Methodenentwicklung und erhöhen die Produktivität im Labor.
APP
ID 1
6631
0 2 4 6 8 10 min
1
2
3
4
5
67
8
9
10
0 2 4 6 8 10 12 min
1
2
3
4
5
6
78
9
10
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Agilent Technologies
Zorbax® 5 µm Extend-C18
Bedingungen für alle Säulen:
11
Ausgezeichnete Trennleistung mit
flüchtigen Puffern!
Trennleistung mit flüchtigen PuffernFür die weitverbreitete Anwendung von LC-MS- und LC-MS/MS-Methoden ist ein flüchtiger Puffer unbe-
dingt notwendig. Folgende Chromatogramme belegen, dass die Gemini-NX nicht nur mit den traditionell
verwendeten nicht flüchtigen Puffern eine ausgezeichnete Trennleistung zeigt.
APP
ID 1
6618 Gemini®-NX 5 µm C18
APP
ID 1
6620 Thermo Hypersil-Keystone
HyPERSIL GOLD® 5 µm C18
APP
ID 1
6617
0 2 4 6 8 10 min
1
3
2
5
7
8
4
9 10
6
0 2 4 6 8 10 min
1
2
34,5
7
6
8
9 10
Mischung von Säuren, neutralen Verbindungen und Basen mit Ameisensäure pH 2,7Säulen: Gemini-NX 5 µm C18
Zorbax 5 µm Extend-C18XBridge 5 µm C18HyPERSIL GOLD 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmMobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure in Wasser
B: 0,1 % Ameisensäure in AcetonitrilGradient: A/B (95:5) auf (20:80) in 8 min,
2 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.4.5.6.7.8.9.
10.
PyridinChinidinSulfathiazolTriprolidinBenzylalkoholNortriptylinPhenol3-Methyl-4-nitrobenzoesäureMethylsalicylaldehydHexanophenon
0 2 4 6 8 10 min
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0 2 4 6 8 10 min
12
3
54
7
6
8
9
10APP
ID 1
6619 Agilent Technologies
Zorbax® 5 µm Extend-C18
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Waters®
XBridge™ 5 µm C18
Bedingungen für alle Säulen:
12
Vielseitige Einsatzmöglichkeiten
Applikationen
Hydrophobe basische Arnzeistoffe bei niedrigem pH-Wert, pH 2,7
APP
ID 1
6635 Agilent Technologies
Zorbax® 5 µm Extend-C18
APP
ID 1
6602 Gemini®-NX 5 µm C18
APP
ID 1
6636 Thermo Hypersil-Keystone
HyPERSIL GOLD® 5 µm C18
Hydrophobe Basen (Diltizaem, Promethazin) mit AmeisensäureSäulen: Gemini-NX 5 µm C18
Zorbax 5 µm Extend-C18XBridge 5 µm C18HyPERSIL GOLD 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmMobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure in Wasser
B: 0,1 % Ameisensäure in AcetonitrilGradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min
Flussrate: 1,0 mL/minTemperatur: Raumtemperatur
Detektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.
DiltiazemPromethazin
0 2 4 6
1
2
8 10 12 min0 2 4 6
1
2
8 10 12 min
0 2 4
12
86 10 12 min
APP
ID 1
6599
0 2 4 6 8 10
2
1
12 min
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Waters®
XBridge™ 5 µm C18
Bedingungen für alle Säulen:
13
Polare Basen bei hohem pH-Wert, pH 10,5
APP
ID 1
6642
APP
ID 1
6641 Gemini®-NX 5 µm C18
0 10 20 min
1
2
3
4 6
7
8
9
10
}
5
}
0 10 20 min
1
2
3
4,56
78
9
10
Polare Basen (Betablocker) bei hohem pHSäulen: Gemini-NX 5 µm C18
XBridge 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmMobile Phase: A: 10 mM Ammoniumbicarbonat pH 10,5
B: AcetonitrilGradient: A/B (85:15) auf (70:30) in 15 min, auf
(50:50) in 5 min, 5 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 230 nm
Probe: 1.2.3.4.5.6.7.8.9.
10.
Bisoprolol Verunreinigung Sotalol Atenolol Labetolol (Diastereomere) Nadolol (Diastereomere) Pindolol Metoprolol Bisoprolol Propranolol Alprenalol
Polare Basen bei niedrigem pH-Wert, pH 2,7
APP
ID 1
6633 Waters®
XBridge™ 5 µm C18
APP
ID 1
6606 Gemini®-NX 5 µm C18
0 2 4
12 3
45
67
6 8 10 12 min 0 2 4 6
1,2 3 45
6
7
8 10 12 min
Polare Basen (Antihistaminika) mit Ameisensäure
Säulen: Gemini-NX 5 µm C18XBridge 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmMobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure in Wasser
B: 0,1 % Ameisensäure in AcetonitrilGradient: A/B (90:10) auf (50:50) in 10 min
Flussrate: 1,5 mL/minTemperatur: Raumtemperatur
Detektion: UV bei 210 nm
Probe: 1.2.3.4.5.6.7.
PyrilaminTripelennaminChlorpheniraminBrompheniraminChloropyraminDiphenhydraminLoratadin
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
Die Y-Achse wurde normalisiert für alle Chromatogramme.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Waters®
XBridge™ 5 µm C18
Bedingungen für alle Säulen:
Bedingungen für alle Säulen:
14
Methodenentwicklung
Ladungszustand und Retention
In der Reversed-Phase-Chromatographie ist es das Ziel, alle Analyten
aufzutrennen. Der für die Selektivität entscheidende Retentionsmecha-
nismus sind hydrophobe Wechselwirkungen der in Lösung befindlichen
Analyten mit der Stationären Phase. Es gibt 3 Aspekte im Zusammen-
hang mit dem Ladungszustand der Analyten, die bezüglich der
Wechselwirkungen mit der Stationären Phase betrachtet werden
sollten.
Eine Verbindung in geladenem Zustand ist polarer als in ihrer ungeladenen FormWenn eine Verbindung in ihrer geladenen Form vorliegt, geht sie
leichter Wasserstoffbrückenbindungen ein. Bei der Reversed-Phase-
Chromatographie, für die gewöhnlich Mobile Phasen mit einem hohen
wässrigen Anteil verwendet werden, wird das Molekül deshalb eher
Wasserstoffbrückenbindungen mit der Mobilen Phase und weniger
hydrophobe Wechselwirkungen mit der Stationären Phase eingehen
- verglichen mit der ungeladenen Form der Verbindung. Es kommt
deshalb zu geringerer Retention.
Eine Verbindung sollte nur in einer einzigen Form vorliegen (geladen oder neutral), damit man eine gute Peakform erhält Sobald signifikante Konzentrationen beider Formen - der geladenen
und der ungeladenen - vorliegen, beobachtet man verbreiterte oder
asymmetrische Peaks, da die hydrophoben Wechselwirkungen der
beiden Formen mit der Stationären Phase unterschiedlich stark sind
und somit die Retentionszeiten unterschiedlich lang.
Eine Verbindung in ihrem geladenen Zustand kann unerwünschte ionische Wechselwirkungen eingehenFreie Silanolgruppen oder Metallverunreinigungen des Kieselgels
können ionische Wechselwirkungen mit den Analyten in ihrer ge-
ladenen Form eingehen, was die Peakform negativ beeinflussen oder
zu nicht reproduzierbaren Ergebnissen führen kann.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
15
pH 2,8
pH 10,5
Nicotin als Beispiel einer ionisierbaren VerbindungIn seiner geladenen Form zeigt Nicotin folgendes chromatographische Verhalten:
• GeringeRetention – Nicotin zeigt geringe Wechselwirkung mit der C18-Phase
• ScharferPeak – nur die einfach geladene Form, Elution erfolgt aber im Totvolumen
APP
ID 1
6626
0 2 4 6 8 10 12 min
APP
ID 1
6627
0 2 4 6 8 10 12 min
HO
H+
H+ H+
H
O-
N
H
N+
HO
O-HO
OH-OH- OH-
O-
N
H
N
In seiner ungeladenen Form zeigt Nicotin folgendes chromatographische Verhalten:
• HöhereRetention – Nicotin zeigt höhere Wechselwirkung mit der Stationären Phase
• ScharferPeak – nur die ungeladene Form, gute Peakform
Nicotin mit 0,1 % Ameisensäure pH 2,8 Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
Mobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure in WasserB: 0,1 % Ameisensäure in Acetonitril
Gradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min halten
Flussrate: 1,5 mL/minTemperatur: Raumtemperatur
Detektion: UV bei 254 nmProbe: Nicotin; pKs 8,5
Nicotin mit Ammoniumbicarbonatpuffer pH 10,5
Säule: Gemini-NX 5 µm C18Dimension: 150 x 4,6 mm
Artikelnr.: 00F-4454-E0Mobile Phase: A: 10 mM Ammoniumbicarbonat pH 10,5
B: AcetonitrilGradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min halten
Flussrate: 1,5 mL/minTemperatur: Raumtemperatur
Detektion: UV bei 254 nmProbe: Nicotin; pKs 8,5
Ungeladener Analyt
Geladener Analyt
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
16
Es ist möglich, den Ladungszustand einer gelösten Verbindung in
Abhängigkeit von dem pH-Wert der Mobilen Phase vorherzusagen,
wenn man den pKs-Wert der Verbindung kennt. Somit kann man den
Ladungszustand durch die Wahl des pH-Werts kontrollieren. Die fol-
gende Graphik zeigt den Zusammenhang zwischen dem pKs-Wert
einer gelösten Verbindung und dem pH-Wert der Mobilen Phase.
Beziehung zwischen dem pH-Wert der Mobilen Phase und dem Ladungszustand eines Analyten
Methodenentwicklung
pH-Wert und Ladungszustand
0
25
50
75
100
% d
er g
elad
enen
For
m
pH-Wert der Mobilen Phase - pKs-Wert des Analyten
Base
Säure
-2 -1 0 1 2
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
17
Der Ausdruck „schwache Säure“ oder „schwache Base“ wird ver-
wendet, um den Dissoziationsgrad einer Verbindung und damit das
Verhalten der funktionellen Gruppen in Lösung zu beschreiben. Das
Retentionsverhalten nicht ionisierbarer Verbindungen bleibt über den
gesamten pH-Bereich nahezu unverändert. Die Wahl des Puffers kann
allerdings die Peakform beeinflussen.
Schwache SäurenEine schwache Säure liegt in einem Bereich +/- zwei pH-Einheiten um ih-
ren pKs-Wert teilweise in dissoziierter Form vor. Wenn wir nur die ungela-
dene Form anstreben, sollten wir einen pH-Wert mindestens 2 Einheiten
unter pKs-Wert wählen.
Schwache BasenFür eine basische Verbindung muss der pH-Wert der Mobilen Phase
mindestens 2 Einheiten über dem pKs-Wert der Verbindung liegen,
damit sie hauptsächlich in ihrer ungeladenen Form vorliegt.
pH = pKs - 2Die Säure ist zu 1 % dissoziiert (überwiegend ungeladene Form)
pH = pKsDie Säure ist zu 50 % dissoziiert (gleicher Anteil von geladener und ungeladener Form)
pH = pKs + 2Die Säure ist zu 99 % dissoziiert (überwiegend geladene Form)
pH = pKs - 2Die Base ist zu 99 % dissoziiert (überwiegend geladene Form)
pH = pKsDie Base ist zu 50 % dissoziiert (gleicher Anteil von geladener und ungeladener Form)
pH = pKs + 2Die Base ist zu 1 % dissoziiert (überwiegend ungeladene Form)
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
18
Bei einem pH-Wert, der 2 Einheiten oder mehr unterhalb des pKs-Werts liegt, liegt Naproxen in ungeladener Form vor.
Vorteile • HöhereRetentionunterReversed-Phase-Bedin- gungen • SchärferePeaksaufgrundeineseinzigen Ladungszustandes (ungeladen) • GeringesekundäreionischeWechselwirkungen
Nachteil • GeringfügigePeakverbreiterungmöglich,falls die Retentionszeit sehr lange ist
Methodenentwicklung
pH-Wert der Mobilen Phase zur Kontrolle der Selektivität
Zu erwartende Peakform und Retention
Auswirkungen des pH-Werts der Mobilen Phase auf Säuren
2,5
pH
2 Einheiten unter-halb des pKs
H3CO O
OH
H3CO O
OH
H3CO O
O-
H3CO O
O-
Bei einem pH-Wert, der 2 Einheiten oder mehr oberhalb des pKs-Werts liegt, liegt Naproxen in geladenem Zustand vor.
Vorteil • SchärferePeaksaufgrundeineseinzigen Ladungszustandes
Nachteile • GeringereRetentionunterReversed-Phase-Be- dingungen • KanninderIonensuppressionszoneeluieren (bei MS-Detektion) • SehrhohesPotentialfürsekundäreionische Wechselwirkungen
2 Einheiten ober-halb des pKs
H3CO O
OH
H3CO O
OH
H3CO O
O-
H3CO O
O-
Bei einem pH-Wert in der Größe des pKs-Werts liegt Naproxen in einem Gleichgewicht zwischen der gela-denen und ungeladenen Form vor.
Vorteil • Keiner.DiesistfürdieRP-HPLCkein erstrebenswerter Zustand
Nachteile • BreiteoderasymmetrischePeaksaufgrund zweierlei Ladungszuständen und deren Verteilung zwischen der wässrigen Mobilen Phase und der hydrophoben Stationären Phase • HohesPotentialfürsekundäreionische Wechselwirkungen
Beim pKs
H3CO O
OH
H3CO O
OH
H3CO O
O-
H3CO O
O-
Nid
eri
ger
pH
Hoher
pH
Unterhalb des pKs-Werts
Beim pKs-Wert
Oberhalb des pKs-Werts
7,0
4,5
Säuren Naproxen pKs 4,5
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
19
Basen
Zu erwartende Peakform und Retention
Auswirkungen des pH-Werts der Mobilen Phase auf Basen
Bei einem pH-Wert, der 2 Einheiten unter dem pKs-Wert liegt, liegt Amitriptylin in geladener Form vor.
Vorteil • SchärferePeaksaufgrundeineseinzigen Ladungszustandes
Nachteil • GeringereRetentionunterReversed-Phase-Be- dingungen • EventuellElutioninderIonensuppressionzone bei MS-Detektion • SehrhohesPotentialfürsekundäreionische Wechselwirkungen
2 Einheiten unterhalb des pKs
N
N
H+N
H+N
Bei einem pH-Wert, der 2 Einheiten über dem pKs-Wert liegt, liegt Amitriptylin in neutraler Form vor.
Vorteile • HöhereRetentionunterReversed-Phase Bedingungen • SchärferePeaksaufgrundnureineseinzigen Ladungszustandes (ungeladen) • Verringertesekundäreionische Wechselwirkungen
Nachteil • BeizulangerRetentionszeitkanneszueiner leichten Peakverbreiterung kommen
2 Einheiten oberhalb des pKsN
N
H+N
H+N
Entspricht der pH-Wert dem pKs-Wert, liegt Amitriptylin in einem Gleichgewicht aus geladener und ungeladener Form vor.
Vorteile • Keine.FürdieRP-Chromatographieistdies kein wünschenswerter Zustand.
Nachteil • BreiteoderasymmetrischePeaksaufgrundder Verteilung der beiden Ladungszustände des Amitriptylin zwischen der wässrigen Mobilen Phase und der hydrophoben Stationären Phase • HohesPotentialfürsekundäreionische Wechselwirkungen
Beim pKs
N
N
H+N
H+N
Nie
dri
ger
pH
Hoher
pH Beim pKs-Wert
pH
7,0
9,4
12,0
Amitriptylin pKs 9,4Naproxen pKs 4,5
Oberhalb des pKs-Werts
Unterhalb des pKs-Werts
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
20
Säuren, neutrale Verbindungen und Basen bei verschiedenen pH-Werten.
Methodenentwicklung
pH-Wert der Mobilen Phase zur Kontrolle der Selektivität
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Mit steigendem pH-Wert nimmt die Retention von Amitriptylin, einer basischen Verbindung, zu, während
die Retention von Naproxen, einer Säure, abnimmt.
pH 2,7
APP
ID 1
6593 Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
Mobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure in WasserB: 0,1 % Ameisensäure in Acetonitril
Gradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.
AmitriptylinNaproxenToluol
pH 4,8
APP
ID 1
6598 Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
Mobile Phase: A: 10 mM Ammoniumacetat pH 4,8B: Acetonitril
Gradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.
Amitriptylin NaproxenToluol
0 2 4 6
1
2
3
8 10 12 min
0
200
400
600
800
mAU
0
200
400
600
mAU
0 2 4 6 8 10 12 min
1 2
3
Die Y-Achse wurde für alle Chromatogramme normalisiert.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
21
Säuren, neutrale Verbindungen und Basen bei verschiedenen pH-Werten.
APP
ID 1
6601
pH 7,0 pH 10,5
APP
ID 1
6600 Säule: Gemini-NX 5 µm C18
Dimension: 150 x 4,6 mmArtikelnr.: 00F-4454-E0
Mobile Phase: A: 20 mM Kaliumphosphat pH 7,0B: Acetonitril
Gradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min haltenFlussrate: 1,5 mL/min
Temperatur: RaumtemperaturDetektion: UV bei 254 nm
Probe: 1.2.3.
AmitriptylinNaproxen Toluol
Säule: Gemini-NX 5 µm C18Dimension: 150 x 4,6 mm
Artikelnr.: 00F-4454-E0Mobile Phase: A: 10 mM Ammoniumbicarbonat pH 10,5
B: AcetonitrilGradient: A/B (95:5) auf (5:95) in 10 min, 2 min halten
Flussrate: 1,5 mL/minTemperatur: Raumtemperatur
Detektion: UV bei 254 nmProbe: 1.
2.3.
AmitriptylinNaproxenToluol
0
200
400
600
800
mAU
0 2 4 6 8 10 12 min
2
1
3
0
200
400
600
800
mAU
0 2 4 6 8 10 12 min
2
3
1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Mittels des pH-Werts kann die Selektivität kontrolliert und damit die Analysebedingungen für die Zielanalyten
optimiert werden.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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22
Die funktionellen Gruppen eines Analyten beeinflussen dessen Retention auf einer
Reversed-Phase-Säule. Das chromatographische Verhalten ist abhängig davon,
ob eine funktionelle Gruppe protoniert oder deprotoniert ist. Deshalb wird eine
Änderung des pH-Werts oft das Elutionsverhalten beeinflussen. Eine allgemei-
ne Beobachtung ist, dass eine Verbindung mit Säurefunktionalität bei einem pH
unterhalb ihres pKs-Werts besser retiniert wird als bei einem pH oberhalb ihres
pKs-Werts. Basische Verbindungen werden oft weniger retiniert bei pH-Werten
unterhalb ihres pKs-Werts und besser bei einem pH-Werts, der oberhalb des pKs-
Werts liegt. In vielen Fällen beobachtet man dann auch eine bessere Peakform.
Praktische Vorgehensweise
Analyse ionisierbarer funktioneller Gruppen
Protonierte funktionelle Gruppe
Deprotonierte funktionelle Gruppe
pKs(ungefähr)
1,5
2,0
4,7
5,3
7,0
9,8
10,0
10,6
10,7 Base
nS
äure
n
Die pKs-Werte sind Näherungswerte. Andere vorhandene funktionelle Gruppen können die pKs-Werte stark beeinflussen.
Quelle: Introduction to Organic Chemistry - Streitwieser and Heathcock, MacMillan Publishing, 1981.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
23
Neben der Wahl des organischen Lösemittels ist die Auswahl des Puffersys-
tems bei der HPLC-Methodenentwicklung besonders wichtig. Es sollten da-
bei mehrere Aspekte berücksichtigt werden. Der pKs-Wert des Puffers sollte
in der Nähe des gewünschten pH-Werts für die Methode liegen. Weitere Krite-
rien sind die Ionenstärke, Ionenpaareigenschaften und MS-Kompatibilität des
Puffers.
Die Wahl des geeigneten Puffers
Puffer pKs
Pufferbereich (pH)
MS- kompatibel
Trifluoressigsäure < 2 < 2,5 •‡
Phosphorsäure (pK1) 2,1 1,1 - 3,1
Ameisensäure 3,8 2,8 - 4,8 •
Essigsäure 4,8 3,8 - 5,8 •
Carbonat (pK1) 6,4 5,4 - 7,4 •
Phosphat (pK2) 7,2 6,2 - 8,2
Triethanolamin 7,8 6,8 - 8,8 •
Diethanolamin 8,9 7,9 - 9,9 •
Ammoniak 9,2 8,2 - 10,2 •
Ethanolamin 9,5 8,5 - 10,5 •
Carbonat (pK2) 10,3 9,3 - 11,3 •
Diethylamin 10,5 9,5 - 11,5 •
Triethylamin 11,0 10,0 - 12,0 •
Phosphat (pK3) 12,3 11,3 - 13,3
Quelle: Practical HPLC Method Development; L. R. Snyder, J. J. Kirkland und J. L. Glajch, Wiley Interscience, 1997, und Introduction to Protein and Peptide HPLC; T. P. Bradshaw Phenomenex, 1998.‡ TFA kann in geringer Konzentration für LC/MS-Applikationen eingesetzt werden. Es kann aber die MS-Empfindlichkeit beeinflussen.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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* SecurityGuard Analytische Kartuschen erfordern Halter, Artikelnr.: KJ0-4282** PREP SecurityGuard Kartuschen 21,2 mm erfordern Halter, Artikelnr.: AJ0-8223 PREP SecurityGuard Kartuschen 30,0 mm erfordern Halter, Artikelnr.: AJ0-8277‡ Semipräparative SecurityGuard™Halter erforderlich, Bestell-Nr.: AJ0-7220
Gemini-NX SecurityGuard BestellinformationSecurityGuard™ Kartuschen
4 x 2,0 mm* 4 x 3,0 mm* 15 x 21,2 mm** 15 x 30,0 mm
Phasen
C18 AJ0-8367 AJ0-8368 AJ0-8370 AJ0-8371
für ID: 2,0-3,0 mm 3,2-8,0 mm 18-29 mm 30-49 mm
zurück-gehaltene
Verunreinigungen
AnalytenAnalyten
VerunreinigungenVerunreinigungen
HP
LC-S
äuleVom
InjektorKartuschensystem
Kartusche - kann einfach auf Verunreinigungen überprüft werden
Universelle Fingertight-Verbindung zu der HPLC-Säule - kein Werkzeug erforderlich
„Dieses Produkt bietet uns die Si-cherheit, die wir brauchen, um unsere analytischen Säulen in der intensiven, produktionsbegleitenden Analytik einzusetzen. Die SecurityGuardTM Kartuschen sind bedienerfreundlich und ihr Austausch ist einfach.“ — T. Sollima
Der analytische SecurityGuard Vorsäulenkartuschenhalter wird von Hand mit dem female/inverted End-
fitting der HPLC-Säule verschraubt. Er passt auf HPLC-Säulen nahezu aller Hersteller. Verunreinigungen
werden durch eine preiswerte Wegwerfkartusche zurückgehalten und beschädigen somit nicht Ihre wert-
volle HPLC-Säule.
• VerlängertdieStandzeitIhrerHPLC-Säule
• LässtdieChromatographieunbeeinflusst
• EinfacheHandhabung
Wie funktioniert der SecurityGuard?
€280/10pk €280/10pk €295/Stück €330/Stück
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Nützliches für Ihr Labor
SecurityGuard™ - ein universelles Vorsäulensystem
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Phenex Spritzenfilter
Probenvorbereitung: Phenex™ Spritzenfilter
1 17 mm Durchmesser
2 Glasfaserfilter aus Borosilikat mit 28 mm Durchmesser. 90 % der Partikel mit einem Durchmesser >1,2 µm werden entfernt.
3 Das Gehäusematerial ist Methacrylatbutadienstyrol (MBS)-polymer.
4 Celluloseacetat, tensidfrei
5 26 mm Durchmesser
6 Hydrophobe Membran. Kann hydrophil gemacht werden durch vorheriges Anfeuchten mit Isopropanol (IPA).
7 28 mm Durchmesser.
Spritzenfilter
Applikationen und empfohlene Membranmaterialien
Applikation / Probe Empfohlener Filter Erste Alternative Zweite Alternative
HPLC und GC Probenvorbereitung RC PTFE PES
Aggressives oder rein organisches Lösemittel PTFE RC Ny
Proteinanalyse / Biologische Proben PES RC GF/CA
Hohe Partikelbeladung RC Ny PTFE
Umweltanalysen RC PTFE Ny
Lebensmittelanalysen RC PTFE Ny
Klinische / toxikologische Analysen RC PES Ny
Löslichkeitstest RC PTFE Ny
Zellkulturmedien, Puffer GF/CA PES RC
Bestellinformation
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
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4 mm Durchmesserfür Probenvolumen ≤ 2 mL
15 - 17 mm Durchmesserfür Probenvolumen von 2 - 10 mL
25 - 28 mm Durchmesserfür Probenvolumen von 10 - 100 mL
Membrantyp / Größe Artikelnr. VPE Preis Artikelnr. VPE Preis Artikelnr. VPE Preis
0,45 µmPhenex-RC (Regenerierte Cellulose)
AF0-3103-12 100/Pk AF0-2103-12 100/Pk AF0-8103-12 5 100/Pk
AF0-3103-52 500/Pk AF0-2103-52 500/Pk AF0-8103-52 5 500/Pk
Phenex-PES 3
(Polyethersulfon)— — AF2-5108-121 100/Pk AF0-8108-12 7 100/Pk
— — — — AF0-8108-52 7 500/Pk
Phenex-PTFE 6
(Polytetrafluorethylen)AF0-3102-12 100/Pk AF0-2102-12 100/Pk AF0-1102-12 100/Pk
AF0-3102-52 500/Pk AF0-2102-52 500/Pk AF0-1102-52 500/Pk
Phenex-NY(Nylon)
AF3-3107-12 100/Pk AF0-2107-12 100/Pk AF0-1107-12 7 100/Pk
AF3-3107-52 500/Pk AF0-2107-52 500/Pk AF0-1107-52 7 500/Pk
Phenex-GF/NY(Glass Fiber/Nylon
Eine integrierte Spritzenfiltereinheit bestehend aus einem Borsilikatglasfaservorfilter und einerNylonmembran. Ausgezeichnet zur Filtration von Partikel-beladenen Proben. Sie bnötigen weniger Druck, um selbst die schwierigsten Proben zu filtrieren. Der Auslass ist ein Luer-Lock Auslass. Eine integrierte Spritzenfiltereinheit bestehend aus einem Borosilikatglasfaservorfilter und einer Celulloseacetatmembran. Ausgezeichnet zur Filtration von Zellkulturmedium sowie Klärung und Filtration von biologischen Proben.
AF0-1847-12 100/Pk
AF0-1847-52 500/Pk
Phenex-GF/CA 2,3,4,7
(Glasfaser/Celluloseacetat)AF0-8B09-12 7 100/Pk
AF0-8B09-52 7 500/Pk
0,20 µm
Phenex-RC (Regenerierte Cellulose)
AF0-3203-12 100/Pk AF0-2203-12 100/Pk AF0-8203-12 5 100/Pk
AF0-3203-52 500/Pk AF0-2203-52 500/Pk AF0-8203-52 5 500/Pk
Phenex-PES 3
(Polyethersulfon)— — — — AF0-8208-12 7 100/Pk
— — — — AF0-8208-52 7 500/Pk
Phenex-PTFE 6
(Polytetrafluorethylen) AF0-3202-12 100/Pk AF0-2202-12 100/Pk AF0-1202-12 100/Pk
AF0-3202-52 500/Pk AF0-2202-52 500/Pk AF0-1202-52 500/Pk
Phenex-NY(Nylon)
AF3-3207-12 100/Pk AF0-2207-12 100/Pk AF0-1207-12 100/Pk
AF3-3207-52 500/Pk AF0-2207-52 500/Pk AF0-1207-52 500/Pk
Phenex-GF/NY(Glass Fiber/Nylon)
AF0-1A47-12AF0-1A47-52
100/pk500/pk
Phenex-GF/CA 2,3,4,7
(Glasfaser/Celluloseacetat)Eine integrierte Spritzenfiltereinheit bestehend aus einem Borosilikatglasfaservorfilter und einer Celulloseacetatmembran. Ausgezeichnet zur Filtration von Zellkulturmedium sowie Klärung und Filtration von biologischen Proben.
AF0-8A09-12 7 100/Pk
AF0-8A09-52 7 500/Pk
1,20 µmPhenex-GF 2
(Glasfaser)Zur Vorfiltration von hochbelasteten oder hochviskosen Proben. Wird dieser Filter inline vor dem Membranfilter verwendet, wird ein Verstopfen des Membranfilters verhindert und die Probenaufbereitung optimiert.
AF0-8515-12 7 100/Pk
AF0-8515-52 7 500/Pk
Die aufgeführten Spritzenfilter sind nicht steril. Das Filtergehäuse besteht aus medical-grade Polypropylen (PP).Weitere Dimensionen und Membrantypen sind auf Anfrage erhältlich. Bitte kontaktieren Sie Ihren Technischen Kundenberater bei Phenomenex. Bei größeren Bestellmengen sind signifikante Einsparungen möglich.
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Eine integrierte Spritzenfiltereinheit bestehend aus einem Borsilikatglasfaervorfilter und einerNylonmembran. Ausgezeichnet zur Filtration von Partikel-beladenen Proben. Sie bnötigen weniger Druck, um selbst die schwierigsten Proben zu filtrieren. Der Auslass ist ein Luer-Lock Auslass.
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Nützliches für Ihr Labor Gemini®-NX Bestellinformation
3 μm Minibore Säulen (mm) SecurityGuard™ KartuschenPhasen 20 x 2,0 30 x 2,0 50 x 2,0 100 x 2,0 150 x 2,0 4 x 2,0*
/10pk
C18 00M-4453-B0 00A-4453-B0 00B-4453-B0 00D-4453-B0 00F-4453-B0 AJ0-8367
für ID: 2,0-3,0 mm
3 μm Narrow Bore und analytische Säulen (mm) Phasen 30 x 3,0 50 x 3,0 100 x 3,0 150 x 3,0 50 x 4,6 100 x 4,6
C18 00A-4453-Y0 00B-4453-Y0 00D-4453-Y0 00F-4453-Y0 00B-4453-E0 00D-4453-E0
3 μm Analytische Säulen (mm) fortgefahren SecurityGuard™ Kartuschenphasen 150 x 4,6 250 x 4,6 4 x 2,0* 4 x 3,0*
/10pk /10pk
C18 00F-4453-E0 00G-4453-E0 AJ0-8367 AJ0-8368für ID: 2,0-3,0 mm 3,2-8,0 mm
5 μm Minibore Säulen (mm) SecurityGuard™ KartuschenPhasen 30 x 2,0 50 x 2,0 100 x 2,0 150 x 2,0 4 x 2,0*
/10pk
C18 00A-4454-B0 00B-4454-B0 00D-4454-B0 00F-4454-B0 AJ0-8367für ID: 2,0-3,0 mm
5 μm Narrow Bore und analytische Säulen (mm) Phasen 50 x 3,0 100 x 3,0 150 x 3,0 250 x 3,0 50 x 4,6 75 x 4,6
C18 00B-4454-Y0 00D-4454-Y0 00F-4454-Y0 00G-4454-Y0 00B-4454-E0 00C-4454-E0
5 μm Analytische Säulen (mm) fortgefahren SecurityGuard™ Kartuschen (mm)Phasen 100 x 4,6 150 x 4,6 250 x 4,6 4 x 2,0* 4 x 3,0*
/10pk /10pk
C18 00D-4454-E0 00F-4454-E0 00G-4454-E0 AJ0-8367 AJ0-8368für ID: 2,0-3,0 mm 3,2-8,0 mm
5 μm Semi-Prep Columns (mm) SecurityGuard™ Kartuschen (mm)Phasen 150 x 10 250 x 10 10 x 10‡
/3pk
C18 00F-4454-N0 00G-4454-N0 AJ0-8369für ID: 9-16 mm
5 μm Axia™ gepackte Präparative Säulen (mm) SecurityGuard™ Kartuschen (mm)Phasen 50 x 21,2 100 x 21,2 150 x 21,2 250 x 21,2 15 x 21,2**
/ Stück
C18 00B-4454-P0-AX 00D-4454-P0-AX 00F-4454-P0-AX 00G-4454-P0-AX AJ0-8370für ID: 18-29 mm
10 μm Axia™ gepackte Präparative Säulen (mm) Fortsetzung SecurityGuard™ Kartuschen (mm)Phasen 50 x 50 100 x 50 150 x 50 250 x 50 15 x 30,0♦
/StückC18 00B-4455-V0-AX 00D-4455-V0-AX 00F-4455-V0-AX 00G-4455-V0-AX AJ0-8371
für ID: 30-49 mm
10 μm Axia™ gepackte Präparative Säulen (mm) SecurityGuard™ Kartuschen (mmPhasen 50 x 21,2 100 x 21,2 150 x 21,2 250 x 21,2 15 x 21,2**
/Stück
C18 00B-4455-P0-AX 00D-4455-P0-AX 00F-4455-P0-AX 00G-4455-P0-AX AJ0-8370für ID: 18-29 mm
10 μm Axia™ gepackte Präparative Säulen (mm) Fortsetzung Phasen 100 x 30 150 x 30 250 x 30
C18 00D-4455-U0-AX 00F-4455-U0-AX 00G-4455-U0-AX
5 μm Axia™ gepackte Präparative Säulen (mm) Fortsetzung SecurityGuard™ Kartuschen (mm)Phasen 50 x 30 75 x 30 100 x 30 150 x 30 250 x 30 50 x 50 15 x 30,0♦
/Stück
C18 00B-4454-U0-AX 00C-4454-U0-AX 00D-4454-U0-AX 00F-4454-U0-AX 00G-4454-U0-AX 00B-4454-V0-AX AJ0-8371für ID: 30-49 mm
* SecurityGuard Analytische Kartuschen erfordern Halter, Artikelnr.: KJ0-4282** PREP SecurityGuard Kartuschen 21,2 mm erfordern Halter, Artikelnr.: AJ0-8223 PREP SecurityGuard Kartuschen 30,0 mm erfordern Halter, Artikelnr.: AJ0-8277‡ Semipräparative SecurityGuard™Halter erforderlich, Bestell-Nr.: AJ0-7220
Wenn Gemini-NX nicht die gleiche oder bessere Trennleistung als Ihre bisherige Säule vergleichbarer Phase, Partikelgröße und Dimensionen liefert, senden Sie uns bitte innerhalb von 45 Tagen die Vergleichsdaten zu. Wir nehmen die Säule zurück understatten Ihnen den vollen Kaufpreis.
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
Phenomenex
weltweit erhältlich
BedingungenEs gelten die allgemeinen Geschäftsbedingungen von Phenomenex, die Sie unter www.phenomenex.com/TermsAndConditions einsehen können.
MarkenzeichenGemini und Synergi sind eingetragene Markenzeichen von Phenomenex, Inc. TWIN, TWIN-NX, Axia, SecurityGuard, pH-LC, Phenex, und Two-In-One-Technologie sind Markenzeichen von Phenomenex, Inc. XBridge ist ein Markenzeichen der Waters Corp. HyPERSIL GOLD ist ein eingetragenes Markenzeichen von Thermo Hypersil-Keystone, Inc. Zorbax ist ein eingetragenes Markenzeichen von Agilent Technologies, Inc. Axia und Gemini-NX sind von Phenomenex Inc. patentiert.
AusschlussklauselDie gezeigten Vergleiche sind nicht repräsentativ für alle Applikationen.
© 2012 Phenomenex, Inc. Alle Rechte vorbehalten.
AlbanienAlgerienArgentinienAustralienÖsterreichAserbeidschanBangladeschWeißrusslandBelgienBosnien- HerzegowinaBrasilienBulgarienKanadaChileChinaKolumbienCosta Rica
KroatienTschechische RepublikDänemarkEcuadorÄgyptenEstland FidschiFinnlandFrankreichDeutschlandGriechenlandUngarnIslandIndienIndonesienIrlandIsrael
ItalienJapanJordanienKasachstanKeniaKoreaLettlandLuxemburgMazedonienMalaysiaMaltaMauritiusMexikoMontenegroMarokkoNiederlandeNeuseelandNorwegen
OmanPakistanPanamaPapua NeuguineaParaguayPeruPhilippinenPolenPortugalPuerto RicoRumänienRusslandSaudi ArabienSchwedenSchweizSerbienSingapur
Slowakische RepublikSlowenienSüdafrikaSpanienTaiwanThailandTunesienTürkeiUkraineVereinigte Arabische EmirateGroßbritannienUruguayUSAVenezuelaVietnamZypern
Firmenzentrale Niederlassungen Vertriebspartner
Deutschland Tel: 06021-58830-0 Fax: 06021-58830-11Österreich | Tel: 01-319-1301 | Fax: 01-319-1300 | Email: [email protected]
28 BR59
8611
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www.phenomenex.comPhenomenex Produkte sind weltweit erhältlich. Für Informationen über den Vertriebspartner in Ihrem Land kontaktieren Sie bitte: Phenomenex USA, International Department, Email: [email protected]
t: f:
Australien02-9428-6444 02-9428-6445 [email protected]
t: f:
Belgien+31 (0)30-2418700 +31 (0)30-2383749 [email protected]
t: f:
Dänemark4824 8048 4810 6265 [email protected]
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Deutschland 06021-58830-0 06021-58830-11 [email protected]
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Finnland+358 (0)9 4789 0063 +45 4810 6265 [email protected]
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Frankreich01 30 09 21 10 01 30 09 21 11 [email protected]
t: f:
Großbritannien 01625-501367 01625-501796 [email protected]
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Indien 040-3012 2400 040-3012 2411 [email protected]
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Irland 01 247 5405 +44 1625-501796 [email protected]
t: f:
Italien 051 6327511 051 6327555 [email protected]
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Kanada(800) 543-3681 (310) 328-7768 [email protected]
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Luxemburg+31 (0)30-2418700 +31 (0)30-2383749 [email protected]
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Mexiko001-800-844-5226 001-310-328-7768 [email protected]
t: f:
Neuseeland09-4780951 09-4780952 [email protected]
t: f:
Niederlande030-2418700 030-2383749 [email protected]
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Norwegen +47 810 02 005 +45 4810 6265 [email protected]
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Österreich 01-319-1301 01-319-1300 [email protected]
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Puerto Rico (800) 541-HPLC (310) 328-7768 [email protected]
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Schweden +45 4824 8048 +45 4810 6265 [email protected]
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Für alle anderen Länder: Unternehmensitz USA (310) 212-0555 (310) 328-7768 [email protected]
