Positiver Hemmstofftest in Rohmilch - Wirkstoffnachweis ...

Positiver Hemmstofftest in Rohmilch - Wirkstoffnachweis und Ursachenermittlung

Landesamt für Verbraucherschutz Sachsen-Anhalt Dezernat 43 – Rückstandskontrollen und Tierarzneimittelüberwachung

Bernburg/Strenzfeld, 27.11.2019 1

Referent: DLC R. Kowal

Quelle Bild: www.pixabay.com „Kühe-Österreich-Weide-Landschaft-203460“

http://www.pixabay.com/



• Positiver Hemmstofftest in Rohmilch • Ursachenermittlung

=> Gegebenheiten im Erzeugerbetrieb

=> Betriebsbegehung

• Wirkstoffnachweis

=> Untersuchungsspektrum

=> Probenvorbereitung und Probenaufarbeitung

=> Messtechnik => Auswertung

• Möglichkeiten des Eintrags von Antibiotika im Sammeltank • Maßnahmen • Positive Rohmilch-Befunde 2015 - 2019

Gliederung



Schnelltest-Verfahren

- Prinzip: Immunchromatographie

- Detektion: beladene Antikörper

- Testergebnis: nach wenigen Minuten

Positiver Hemmstofftest in Rohmilch



Ursachenermittlung Gegebenheiten

Erzeugerbetrieb - Produktionsrichtung: Jungrinderaufzucht, Milchbetrieb

- 5 Ställe

- 776 Rinder, davon 317 Kühe, die zur Zeit gemolken worden

- 2 Melker - 1 Melkstand (2 x 12er Fischgräte)

- Melken: 2 x täglich



Ursachenermittlung Betriebsbegehung

Im Betrieb vorgefundene Arzneimittel (Antibiotika) Qivitan (Cefqiunom) Procain Penicillin (Benzylpenicillin)

Odimar (Marbofloxacin) Ubrolexin (Cefalexin/Kanamycin)

Cadorex (Florfenicol) Amoxicillin

Enrofloxacin Cloxacillin

Cemay (Ceftiofur) Engemycin (Oxytetracyclin)



Ursachenermittlung Betriebsbegehung

Im Betrieb vorgefundene Arzneimittel (Antibiotika) - Lagerung der Arzneimittel entsprechend nach Lagerungshinweisen

(abschließbarer Schrank, angebrochene Arzneimittel im Kühlschrank)

- Qualität zweifelhaft: 1 x abgelaufen, mehrfach zu lange angebrochen



Wirkstoffnachweis Untersuchungsspektrum

Cephalosporine

Chinolone Makrolide

Pleuromutiline Sulfonamide

Tetracycline

Penicilline

Diaminopyrimidine

3 Analysenmethoden: insgesamt 76 Wirkstoffe

Aminoglycoside Amphenicole



Wirkstoffnachweis Probenvorbereitung und Probenaufarbeitung

Homogenisierung

1 g Rohmilch in Zentrifugenröhrchen

Zugabe 1 ml Acetonitril

Extraktion auf Vibrationsmischer (1 min.)

Filtration des Überstands in ein HPLC-Vial

Zentrifugation bei 4000 U/min. (15 min.)



Wirkstoffnachweis Messtechnik/HPLC

HPLC – High Performance Liquid-Chromatography

Säulenofen Lösungsmittel- vorratsgefäße

HPLC-Pumpe

Injektionssystem



Wirkstoffnachweis Messtechnik/HPLC

mobile Phase

Wirkstoffe

stationäre Phase

Detektor

HPLC – Säulenchromatographie



Wirkstoffnachweis Messtechnik/Massenspektrometer

Massenspektrometer (Detektor)

Aufbau: Ionenquelle Quadrupol 1, 2, 3 Elektronenvervielfacher




Massenspektrometer - Ionenquelle




Massenspektrometer - Ionenquelle

Ionisierung des Benzylpenicillins

H+




Massenspektrometer – 1. Quadrupol

+

+




1. Quadrupol Auftrennung Mutter-Ion

3. Quadrupol Auftrennung Tochter-Ionen

2. Quadrupol Fragmentierung

Massenspektrometer – Quadrupole




Massenspektrometer – 2. Quadrupol

Fragmentierung des Benzylpenicillins

N2

Mutterion: 335 m/z 1. Tochterion: 176 m/z

Mutterion: 335 m/z 2. Tochterion: 114 m/z

N2



Wirkstoffnachweis Auswertung

Positivkontrolle Verdachtsprobe Rohmilch

- Die Positivkontrolle ist mit einer Konzentration von 4 µg/kg dotiert (= Höchstmenge) - Die Verdachtsprobe liefert ein größeres Messsignal als die Positivkontrolle - Die Verdachtsprobe ist zu beanstanden

Möglichkeiten des Eintrags von Antibiotika im Sammeltank



1) Verschleppung

2) Eintrag durch Melker; Milch von behandelten Tieren im Sammeltank 3) mutwilliges Zusetzen von Arzneimittel in den Sammeltank 4) Behandlung von Kühen, die nicht auf der Medikamentenliste stehen 5) Wartezeiten




1) Verschleppung

- Die in Behandlung befindlichen Tiere stehen in einer separaten Gruppe und werden am Ende der Melkzeit gemolken

- Verwendung von Einweg-Eutertücher

- Melker kommen nicht den Arzneimittel-Präparaten in Berührung

- Hemmstofftest hat bei Schläuchen des Melkstands nicht angeschlagen

- zwischen den 2 positiven Hemmstofftests mit Höchstmengenüberschreitung waren 2 Verdachtsproben negativ

=> Verschleppung ist auszuschließen




2) Eintrag durch Melker

- Melker nicht deutschsprachig (Kommunikationsproblem) 3) Mutwilliges Zusetzen von Arzneimittel in den Sammeltank - Arzneimittelschrank bei Begehung nicht verschlossen 4) Behandlung von Kühen, die nicht auf der Medikamentenliste stehen - Anzahl der Tiere bei Abgabebelege gelistet; aber keine Einzeltiere - keine Transponder vorhanden => Ergebnis der staatsanwaltlichen Ermittlung noch offen




5) Wartezeiten - der letzte Tag der Wartezeit nicht im vollen Umfang eingehalten: Cefquinom 1 Tag Enrofloxacin 3 Tage Benzylpenicillin 4 Tage Cefalexin/ Kanamycin 5 Tage

=> Beginn der Wartezeit erst am Tag nach der Behandlung

Maßnahmen



Die Wartezeit beginnt erst am Tag nach der Behandlung genaue Angabe der Anzahl und der Identität der Tiere auf dem Abgabebeleg vor Abgabe jeder Rohmilchladung Schnelltest durchführen Empfehlung einer zusätzlichen Kennzeichnung der Tiere aus der Behandlungsgruppe


Halle (Saale), 29.08.2019 23

Positive Rohmilch-Befunde 2015 - 2019

Jahr Probentyp Wirkstoffe

2015 - -

2016 - -

2017 3 Verdachtsproben 3 x Benzylpenicillin

2018 6 Verdachtsproben 6 x Benzylpenicillin

2019* 5 Verdachtsproben 4 x Benzylpenicillin, 1 x Amoxicillin

*Stand: 25.11.2019

=> Kein Positivbefund einer Planprobe nach dem Nationalen Rückstandskontrollplan

Herzlichen Dank für die Aufmerksamkeit!


Halle (Saale), 29.08.2019 24

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