Versuchsübersicht

Mikrobiologische Wasseruntersuchungen

Tag Versuch 13

Bestimmung

der Kolonie-

zahl

Versuch 14

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Flüssigkeitsan-

reicherung

Versuch 15

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Membran-

filtrations-

verfahren

Versuch 16

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Colilert-

Verfahren

Versuch 17

Nachweis

E. coli:

Mikrotiter-

platten-

verfahren

Versuch 18

Identifizierung

mit API 20 E-

System

Montag Anlegen von

Gussplatten

Ansatz von

Flüssigkulturen

Membran-

filtration

Animpfen von

Quanti-Trays

Animpfen

von Mikro-

titerplatten

-

Dienstag - Subkulturen

Endo-Agar

Subkulturen

CASO-Agar

Auswertung - -

Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine

Bunte Reihe

Oxidase-Test,

Auswertung

- Auswertung -

Donners-

tag

Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Ansetzen von

Teststreifen

Freitag Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Auswertung

Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl

1. Tag (Montag)

Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.

Beschreibung der Wasserproben.

Ansatz: - Trinkwasser unverdünnt

- Ruhrwasser 1:10, 1:100

und 1:1000.

Anlegen von Gussplatten mit

Hefeextraktagar.

Bebrütung: 22 °C und 36 °C.

2. – 4. Tag (Mittwoch bis

Freitag)

Auszählung der Kolonien nach

2, 3 und 4 Tagen (Mittwoch bis

Freitag).

Berechnen der Koloniezahlen

pro mL.

Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2009.

Versuchsübersicht

Mikrobiologische Wasseruntersuchungen

Tag Versuch 13

Bestimmung

der Kolonie-

zahl

Versuch 14

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Flüssigkeitsan-

reicherung

Versuch 15

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Membran-

filtrations-

verfahren

Versuch 16

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Colilert-

Verfahren

Versuch 17

Nachweis

E. coli:

Mikrotiter-

platten-

verfahren

Versuch 18

Identifizierung

mit API 20 E-

System

Montag Anlegen von

Gussplatten

Ansatz von

Flüssigkulturen

Membran-

filtration

Animpfen von

Quanti-Trays

Animpfen

von Mikro-

titerplatten

-

Dienstag - Subkulturen

Endo-Agar

Subkulturen

CASO-Agar

Auswertung - -

Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine

Bunte Reihe

Oxidase-Test,

Subkulturen in

Tryptophan-

Bouillon

- Auswertung -

Donners-

tag

Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

Auswertung - - Ansetzen von

Teststreifen

Freitag Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Auswertung

Quelle: Süßmuth et al., 1999

Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen

Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung

4. und 5. Tag (Donnerstag und

Freitag)

Ablesen der Reaktionen der vier Bunten

Reihen (positive bzw. negative

Reaktionen)

1. Lactose-Bouillon (36 °C, 24 h - 48 h):

Gas- und Säurebildung

2. Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h):

Gas- und Säurebildung

3. Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h):

Indolbildung (Zugabe von

Kovacs-Reagenz)

4. Nähragar (36 °C 24 h): Oxidase-Test

5. Citratagar (36 °C, 24 h - 48 h):

Wachstum

Prinzip des Indolnachweises

1. Abbau von Tryptophan zu Ammoniak, Pyruvat und Indol.

Quelle: Alexander und Strete, Mikrobiologisches Grundpraktikum: ein Farbatlas, 2006.

Prinzip des Indolnachweises

2. Nachweis von Indol durch Reaktion mit para-Dimethylaminobenzaldehyd

zu Rosindol.

Indol Dimethylamino-

benzaldehyd

Rosindol

positive Reaktion

negative Reaktion

Quelle: Süßmuth et al., 1999

Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen

Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 4. und 5. Tag (Donnerstag und

Freitag)

Ablesen der Reaktionen der vier Bunten

Reihen (positive bzw. negative

Reaktionen)

1. Lactose-Bouillon (36 °C, 24 h - 48 h):

Gas- und Säurebildung

2. Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h):

Gas- und Säurebildung

3. Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h):

Indolbildung

4. Nähragar (36 °C 24 h): Oxidase-Test

5. Citratagar (36 °C, 24 h - 48 h): Wachstum

Angabe der Ergebnisse:

Nachweis von E. coli, coliformen

Bakterien bzw. Nicht-Coliformen in

100 mL Wasserprobe.

Differenzierung E. coli, Coliforme und

Nicht-Coliforme

Ablauf und Zeitbedarf der Nachweismethode

1. Flüssigkeitsanreicherung in Lactose-Pepton-Bouillon (Montag)

36 °C, max. 44 h ± 4 h

2. bei Gas- und Säurebildung, Subkultur auf Endo-Agar (Dienstag)

36 °C, 24 h ± 4 h

3. Bunte Reihe (Einzelkolonien von Reinkulturen) (Mittwoch bis Freitag)

E. coli Coliforme

Cytochromoxidase-Reaktion (Nähr-Agar, 36 °C, 24 h) - -

Gas- und Säurebildung in Lactose-Bouillon (36 °C, 44 h) + +

Gas- und Säurebildung in Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h) + -

Indolbildung in Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h) + - (+)

Verwertung von Citrat (36 °C, 44 h) - + (-)

Methode zum qualitativen Nachweis von E. coli/coliformen Bakterien in

natürlichem Mineralwasser, Quellwasser und Tafelwasser (Mineral- und

Tafelwasserverordnung)

Versuchsübersicht

Mikrobiologische Wasseruntersuchungen

Tag Versuch 13

Bestimmung

der Kolonie-

zahl

Versuch 14

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Flüssigkeitsan-

reicherung

Versuch 15

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Membran-

filtrations-

verfahren

Versuch 16

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Colilert-

Verfahren

Versuch 17

Nachweis

E. coli:

Mikrotiter-

platten-

verfahren

Versuch 18

Identifizierung

mit API 20 E-

System

Montag Anlegen von

Gussplatten

Ansatz von

Flüssigkulturen

Membran-

filtration

Animpfen von

Quanti-Trays

Animpfen

von Mikro-

titerplatten

-

Dienstag - Subkulturen

Endo-Agar

Subkulturen

CASO-Agar

Auswertung - -

Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine

Bunte Reihe

Oxidase-Test,

Auswertung

- Auswertung -

Donners-

tag

Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Ansetzen von

Teststreifen

Freitag Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Auswertung

Versuch Nr. 18: Identifizierung coliformer und

anderer Bakterien mit einem standardisierten

Testsystem

Kommerzielle, standardisierte Testsysteme in Form von miniaturisierten

Bunten Reihen:

Versuch Nr. 18: Identifizierung coliformer und

anderer Bakterien mit einem standardisierten

Testsystem (API 20 E)

1. Tag (Donnerstag)

Identifizierung von 4 Reinkulturen

auf Nähragar mit API 20 E-System

(aus Ruhrwasser gewonnene Isolate

in Versuch Nr. 14).

Beimpfen von 4 Teststreifen mit

4 Reinkulturen auf Nähragar aus

Versuch Nr. 14.

Bebrütung der Streifen: 36 °C, 24 h.

2. Tag (Freitag)

Auswertung und Identifizierung.

Versuchsablauf