Post on 06-Apr-2015
Antigene
Natürliche AntigeneProteine, Enzyme, Kohlehydrate,
Nucleinsäuren, Membranen, Zell- wände, Viren etc.
Synthetische Antigenemodifizierte Proteine, künstliche
Polypeptide, spezielle Reagentien
ImmunisierungenVoraussetzungen und Anforderungen (1)
Auswahl der Tiere
Größe und SpeziesJe größer das Tier, umso mehr Antigen erforderlich.Je größer das Tier, umso mehr Antiserum produziert
BeispieleKaninchen, Schaf, Ziege, PferdMaus, Meerschweinchen, RatteHuhn
WichtigPhylogenetischer Abstand vom Versuchstier zum Antigen soll möglichst groß sein
Genetische FaktorenAuswahl geeigneter Stämme, reinrassige Tiere bevorzugt
ImmunisierungenVoraussetzungen und Anforderungen (2)
Eigenschaften des Antigens
Prinzip: je komplexer, desto stärker antigen
AggregationDenaturierungsterische Erreichbarkeitstrukturelle KomplexizitätMolekulargewichtSalzkonzentration
Präparation von Antigenen
Natürliche AntigeneIsolierung nach Regeln der ProteinchemieReinheitskriterienVerwendung vonDetergentien für unlösliche Antigene, z.B. Membranproteine (Probleme)
Künstliche AntigenePolypeptidyl-Proteine: lineare, verzweigte, homopolymere, heteropolymere
Konjugate (Hapten-Carrier)Haptene sind niedermolekulare Substanzen, die für sich
allein nur schwach oder gar nicht antigen wirken, z.B. Carbonsäuren, Steroide, Phenole, DNP-Lysyl-Derivate, TNP-Derivate. Als Carrier werden schwach immunogene Polypeptide gewählt.
Hapten-Carrier
Durch die Verknüpfung des Haptens mit dem Carrier werden neue antigene Determinanten geschaffen.
Adjuvantien
Mittel zur Hebung der allgemeinen Immunantwort
Wirkungsweise:1) Depotwirkung2) Senkung toxischer Effekte3) Aggregation von Antigenen4) Stimulation der Lymphozyten-Zirkulation
Wichtigstes Adjuvans:Freund's Complete Adjuvans
9 Teile Mineralöl1 Teil Detergens (Artacel)0.5 mg/ml hitzedenat. Bakterien (Mycobacterium tuberculosis oder butyricum)
Alternativen:Aluminiumhydroxid-Gele; Bentonit-Gele
Wirkungsweise von Adjuvantien
Injektionsmethoden
intradermal: in die Hautsubcutant: unter die Hautintramuskulär: in den Muskelintravenös: in die Veneintraperitoneal: in die Bauchhöhlein die Lymphknotenin die Fußballen (Kaninchen)
Immunisierungsprogramm
1. Injektion: mit Freund's Complete Adjuvans
2. Injektion (= 1. Boost): nach ca. 4 Wochen
Blutabnahme: 1 Woche darauf
3. Injektion (= 2. Boost): 2-3 Wochen darauf
Blutabnahme: 1 Woche darauf
usw.
1o Ag 2o Ag
Total Ab
IgM Ab
IgG Ab
5 10 15»» 30 35 40
A b
T
i t
e r
Tage nach Immunisierung
Verlauf der Immunantwort