Trans-well Migrations-Assay

Block: „Molekulare Zellbiologie von Immunzellen“ SS 2008

Hintergrund

• Cytohesin ist für die Chemokin-induzierte Aktivierung von beta-2 Integrinen und für die RhoA-regulierte Integrin-unabhängige Migration wichtig.

• SecinH3 bindet an die Sec7-Domäne der Mitglieder der Cytohesin-Familie und inhibiert dadurch den Guaninnukleotid-Austausch.

Ziel des Versuchs

• Beobachtung, ob SecinH3 die Migration der T-Zelllinie Jurkat E6 in Richtung des Chemokins CXC12 beeinflusst.

Versuchsaufbau

Ergebnisse

 Zählung

1Zählung

2Zellen/

GroßquadratZellzahl/

mlZellzahl/

wellMigration

[%]

Kontrolle ohne Chemokin

51 (4) - 12,75 1,28 ·105 8,93 ·104 4,46

Kontrolle mit Chemokin

399 (2) - 199,5 2,00 ·106 1,40 ·106 69,83

0,5µM SecinH3

346 (2) 230 (2) 173 1,73 ·106 1,21 ·106 60,55

1µM SecinH3

652 (4) 238 (2) 163 1,63 ·106 1,14 ·106 57,05

10µM SecinH3

488 (4) 322 (4) 101,25 1,01 ·106 7,09 ·105 35,44

Ausgangszellzahl/well = 2,0·106

Ergebnisse

Prozentuale Migration

0102030405060708090

100

Kontrolleohne

Chemokin

Kontrolle mitChemokin

0,5µMSecinH3

1µMSecinH3

10µMSecinH3

Mig

rati

on

[%

]

Ergebnisse

Prozentuale Migration

0102030405060708090

100

Kontrolleohne

Chemokin

Kontrolle mitChemokin

0,5µMSecinH3

1µMSecinH3

10µMSecinH3

Mig

rati

on

[%

]

Fazit

• SecinH3 beeinflusst die Migration der T-Zellen in Richtung des Chemokins.

• Je höher die Konzentration von SecinH3, desto geringer die Migration.

• Wenig Unterschied zwischen 0,5µM und 1µM SecinH3 Wirkungsgrenze