Was bringt Lebewesen zum Leuchten?

Zentralkurs 2009 Chemie – einfach faszinierend Thomas Hari

Das grün fluoreszierende Protein (GFP)

Übersicht

Das GFPExperimente/Idee

ResultateKosten

Das GFP

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

3 AS bilden das Chromophor

Weitere fluoreszierende Stoffe

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Mutationen des GFP

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Experimente / IdeenTransformation von Bakterien mit pGLO

Flüssig-kultur

Zellen lysieren

Isolation von Plasmid-DNA

Restrikitions-verdau

Gelelektro-phorese

Säulen-chromatographie

Native PAGE

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

pGLO

Gene für araA, araB und araD wurden durch das GFP-Gen ausgetauscht

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Aus: http://www.durham.edu.on.ca/s_links/schools/dunbart/staff/melegos/IDC4U5/pGLO%20Slide%20Presentation.ppt

Genregulation

RNA Polymerase

araC

ara GFP OperonGFP Gene

araC GFP Gene

araC GFP Gene

Effector (Arabinose)

B A DaraC

B A DaraC

RNA Polymerase

Effector (Arabinose)

araC B A D

ara Operon

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Aus: http://www.durham.edu.on.ca/s_links/schools/dunbart/staff/melegos/IDC4U5/pGLO%20Slide%20Presentation.ppt

Resultate

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

Bakterienkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

LB-Medium LB / amp

Bakterienkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

LB / amp /araLB / amp /ara

Ohne UV-Licht Mit UV-Licht

Transformation von pGLO

Aus: http://www.westminster.edu/acad/sim/pdf/SpGLOTransformation.pdf

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Kulturmedium mit Ampicillin

Kulturmedium mit Ampicillinund Arabinose

Flüssigkulturen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Zellen lysieren

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Bakterienpellets

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Werden nicht mehr verwendet

Säule auftragen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Säule auswaschen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

3 Fraktionen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Säule auftragen

Säule waschen

GFP auswaschen

Native PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Nicht ganz einfach…

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

2 fluoreszierende Banden

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

27 und 37 kDa

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Vor der SäuleNach der Säule

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

250 kDa150 kDa

100 kDa

75 kDa50 kDa37 kDa25 kDa20 kDa15 kDa10 kDa

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

SDS-PAGE

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Plasmidverdau

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

pGEM1 mit Bcn1pGLO mit Bcn1 und Bam H1pGLO mit Bam H1

Färbung mit Azur Blau

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

GFP Experimente/Idee Resultate KostenBild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

Kosten

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

2 Kits mit Material wird geliefertRelativ teuer Zusätzliches Material:ZentrifugeGel-Apparatur vertikalGel-Apparatur horizontalHeizblockMikropipetten (bis 1 ml)Restriktionsenzym

Proteinelektrophorese: http://www3.bio-rad.com/cmc_upload/Literature/221305/1660023A.PDF

Alternative: Genspirale

• Apparaturen werden ausgeliehen(Ausnahme: SDS-PAGE)

• Kosten für Verbrauchsmaterial:SFr. 50.– (Kurs gemacht)

• Zusätzliches Material von BioRad:SäulenPlasmidPuffer selber herstellen

GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

Weiter Dokumente auf der Homepage des Gymnasiums Thun-SchadauFachschaft Chemie; Unterrichtsmaterialien Thomas Hari