AG Serologische Bestimmung von Autoimmundermatosen...

EUROIMMUNM e d i z i n i s c h eL a b o r d i a g n o s t i k aA G

Serologische Bestimmung von Autoimmundermatosen: Dermatologie-Mosaik 9 (Bestellnummer: FA 1501-9)

EUROIMMUN AG · D-23560 Lübeck · Seekamp 31 · Telefon 0 451 58 55-0 · Fax 58 55-591 · E-Mail [email protected] · www.euroimmun.de

Desmoglein 1 BP230 Voll-Länge

Ösophagus

Desmoglein 3

BP230 gC Ösophagus

Desmoglein 1

Desmoglein 3

BP230 gC

BP230 Voll-Länge

BP180 (NC16A-4X)BP180 (NC16A-4X)

epid.-BM-pos. pos. Desmos.-pos. neg.

neg.

neg.

pos.

pos.

pos. neg.

neg.neg.

Bullöses Pemphigoid (anti-epid.-Basalmembran-pos.) Pemphigus foliaceus (anti-Desmoglein-1-pos.)

FA_1501_I_DE_A01, 10/2009

2 kDa3 kDa

6 kDa

14 kDa

21 kDa

31 kDa36 kDa

55 kDa66 kDa

97 kDa116 kDa

185 kDa

1 2 3 4 5

EUROIMMUN AG · D-23560 Lübeck · Seekamp 31 · Telefon 0 45 1 / 58 55 -0 · Telefax 58 55-591 · E-Mail [email protected]_1502_I_DE_A01, 10/2007

Einführung

Bullöses Pemphigoid (BP) und Pemphigoid gestationis (PG) sind Autoimmunerkran-kungen mit subepidermaler Blasenbildung, die durch Autoantikörper gegen die hemi-desmosomalen Proteine BP180/Typ-XVII-Kollagen und BP230 charakterisiert sind. Die Mehrzahl der BP- und PG-Patienten weist Autoantikörperbindungen an die im 16. nichtkollagenen Bereich NC16A des BP180 (a) gelegenen Epitope auf.

Methoden

Um eine effiziente Proteinexpression in E. coli zu gewährleisten, wurden vier Kopien des NC16A-Bereichs mit einem carboxy-terminalen Polyhistidin-Tag fusioniert (b). Mit dieser Strategie können durch einfache Aufreinigung des Zielproteins unter de-naturierenden Bedingungen hohe Erträge erzielt werden, ohne dass ein heterologer Fusionspartner abgespalten werden muss. Das durch Metallchelat-Affinitätschromato-graphie aufgereinigte Protein (c) migrierte gemäß seiner berechneten Masse von 36,6 kDa bei Auftrennung mittels SDS-PAGE (Spur 2). Ein Hexahistidin-spezifischer mo-noklonaler Antikörper (Spur 3) und Serum eines BP-Patienten (Spur 4), jedoch nicht eines gesunden Blutspenders (Spur 5) er-fassten die rekombinante Form von NC16A in der Immunblotanalyse. Auf der Basis dieses Tetramerproteins als Antigensub-strat wurde ein ELISA zur Bestimmung von

Autoantikörpern gegen BP180 entwickelt und anschließend evaluiert.

Ergebnisse

Autoantikörper gegen BP180 wurden in 106 (89,8%) von 118 zufällig ausgewählten BP-Se-ren und in allen 20 (100%) zufällig ausgewähl-ten PG-Seren nachgewiesen, wohingegen nur 2,1% eines großen Kontrollkollektives aus Pa-tienten mit rheumatoider Arthritis (RA; 2 von 107), progressiver Systemsklerose (PSS; 2 von 50), systemischem Lupus erythematodes (SLE; 1 von 72) und gesunden Blutspendern (nicht gezeigt, 10 von 494) in diesem Test positiv reagierten. Die Spiegel zirkulierender Autoantikörper gegen BP180 (siehe Balken) entsprechen der Krankheitsaktivität bei Pem-phigoid-Patienten (siehe Liniendiagramm).

Diskussion

Die Leistung des neuen ELISA übertraf die der vormals beschriebenen Testsysteme.

Wir nehmen an, dass die Multimerform des Autoantigens nicht nur die Immunreaktivität steigert, sondern auch die Zugänglichkeit des Zielepitops, was das Binden der Au-toantikörper erleichtert. Ein zweiter Vorteil der Verwendung des rekombinanten BP180 als Zielantigen ist die eindeutige Charakte-risierung der Autoantikörperspezifität. Ins-gesamt werden die Diagnosestellung und Verlaufskontrolle bei BP- und PG-Patienten durch die Verwendung des Tetramers NC16A im ELISA deutlich verbessert.

Sensitive und spezifische Bestimmung von Pemphigoid-Autoantikörpern mittels ELISA basierend auf einem

Antigen aus Multimeren des NC16A-Bereichs von BP180C. Probst1, C. Dähnrich1, L. Komorowski1, A. Rosemann1, E. Schmidt2, W. Schlumberger1, C. Sitaru3 C. Rose3, W. Stöcker1 und D. Zillikens3

1Institut für Experimentelle Immunologie der EUROIMMUN AG, Lübeck2Abteilung für Dermatologie, Universität Würzburg

3Abteilung für Dermatologie, Universität Lübeck

Kollektiv nTetramer-

NC16A-ELISAGST-NC16A-

ELISA

BP 118 106 (89,8%) 105 (89,0%)

PG 20 20 (100,0%) 20 (100,0%)

RA 107 2 (1,9%) 5 (4,7%)

PSS 50 2 (4,0%) 4 (8,0%)

SLE 72 1 (1,4%) 3 (4,3%)

Sensitivität 118 89,8% 89,0%

Spezifität 229 97,8% 94,8%

BP(106/118)

EU

RO

IMM

UN

(R

E/m

l)

0,1

1

10

100

1000

10000

RA(2/107)

PSS(2/50)

SLE(1/72)

PG(20/20)

Basaler Keratinozyt

NH2

COOH

NC16A

C15

6 x HisNC16A NC16A NC16A NC16A

pET24d-N-(NC16A)4

6145 bp

Kan

lacI

T7His-(NC16A)

4

a) Schematische Darstellungder BP180-Struktur

b) Verwendetes Expressionskonstrukt und rekombinantes NC16A-4X

c) Erste Validerung des gereinigten rekombinanten Proteins

Wochen

0 8 10 14 16 20 24 28 32 36 40 48 52 56 60 66

RE

/ml

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

Dis

ease

act

ivit

y sc

ore

(D

AS

)

Wissenschaftliche Präsentation (Englisch) auf dem 8. Dresdener Autoantikörper-Symposium (Dresden, September 2007)

Introduction

Pemphigus vulgaris (PV) and pemphigus foliaceus (PF) are autoimmune intraepider-mal blistering skin diseases characterized by autoantibodies to desmoglein 1 (Dsg1) and desmoglein 3 (Dsg3), respectively. An-tigen-specifi c assays using the immuno-genic extracellular Dsg domains can be ap-plied for serological distinction between PV and PF. In this study, two ELISA based on human cell-expressed Dsg1 and Dsg3 were assessed for the fi rst time with respect to their diagnostic performance and their suit-ability for therapy monitoring.

Methods

Ectodomains of Dsg1 and Dsg3 were ex-pressed in HEK293 cells, purifi ed from cell culture supernatant, and used as solid phase in ELISA for autoantibody determination of circulating IgG. Assay evaluation was per-formed with a panel of sera from 121 clini-cally characterized patients with pemphigus (71 PV, 50 PF), 48 with bullous pemphigoid (BP), 21 with linear IgA dermatosis (LAD) and 401 healthy blood donors (HBD).

Results

Autoantibodies to Dsg1 were detected in 48 (96%) PF sera and in 0.9% of control

subjects (1 BP, 0 LAD, 3 HBD). Reactivity to Dsg3 was found in all (100%) PV sera and in 0.4% of the control cohort (1 BP, 0 LAD, 1 HBD). Thus, the applied test systems revealed a sensitivity of 96% and 100% for anti-Dsg1 and anti-Dsg3, respectively, at a specifi city of more than 99%. Levels of circulating autoantibodies, which were measured in 12 patients, correlated with the clinical severity in all cases.

Conclusion

ELISA based on human cell-expressed ectodomains of Dsg1 or Dsg3 represent highly sensitive and specifi c test systems, suitable for both, the serological diagnosis of patients with pemphigus and the moni-toring of the disease activity.

EUROIMMUN AG · D-23560 Luebeck (Germany) · Seekamp 31 · Tel +49 451 58550 · Fax 5855591 · E-mail [email protected]

ELISA using ectodomains of desmoglein 1 and 3 expressed in HEK293 for sensitive and specifi c detection of

pemphigus autoantibodies

C. Daehnrich1, A. Rosemann1, C. Probst1, L. Komorowski1, W. Schlumberger1,

W. Stoecker1, A. Recke2, C. Rose2, D. Zillikens2, E. Schmidt2

1Institute for Experimental Immunology, affi liated to EUROIMMUN AG, Luebeck, Germany2Department of Dermatology, University of Luebeck, Germany

Desmoglein 1 and 3: Constituents of desmosomes Different patient cohorts in the Anti-Desmoglein 1 ELISA. Different patient cohorts in the Anti-Desmoglein 3 ELISA.

Panel n anti-Dsg1 positive anti-Dsg3 positive

Pemphigus vulgaris 71 33 (47%) 71 (100%)

Pemphigus foliaceus 50 48 (96%) 0

Linear IgA dermatosis 21 0 0

Bullous pemphigoid 48 1 (2%) 1 (2%)

Blood donors 401 3 (1%) 1 (0.2%)

Specifi city 470 99.1% 99.6%

PF PV BP LAD HBD

An

ti-D

sg1

ELI

SA

(O

D)

0

1

2

3

4

(48/50) (1/48) (0/21) (3/401)(33/71)

0.5

PV PF BP LAD HBD

An

ti-D

sg3

ELI

SA

(O

D)

0

0.5

2

3

4

(71/71) (1/48) (0/21) (1/401)(0/50)

1

One pemphigus foliaceus patient

Weeks

7040 147 161

An

ti-d

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1 a

nti

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U/m

l)

0

200

400

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1800

Dis

ease

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y sc

ore

0

1

2

3

4

5

14620 320

20

40

60

80

100

0

1

2

3

4

5

One pemphigus vulgaris patientA

nti

-des

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in 3

an

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(RU

/ml)

Dis

ease

act

ivit

y sc

ore

Weeks

Scientifi c presentation at the 9th Dresden Symposium on Autoantibodies (Dresden, Germany, September 2009)

Basal keratino-cytes

Lamina lucida

Lamina densa

Sublamina densa

Dsg1

Dsg3

Dsc1


DSG1

DSG1

DSG1

DSG1

DSG1

DSG1

DSG1

DSG1

Mikrotiter-ELISAder EUROIMMUN AG

Autoantikörper-Diagnostik:AMA M2-3E (IgG)ANCA-Profil (IgG)ANA-Screen (IgG)ANA Screen 9 oder 11 (IgG)ANA VarioProfil (IgG)BP180-NC16A-4X (IgG)BP230-CF (IgG)C1q (IgG)ß2-Glykoprotein 1 (IgA, IgG, IgM, IgAGM)Cardiolipin (IgA, IgG, IgM, IgAGM)Cyclisches Citrulliniertes Peptid (CCP; IgG)cytosolisches Leber-Antigen Typ 1 (LC-1; IgG)Desmoglein 1 (IgG)Desmoglein 3 (IgG)Doppelstrang-DNS (dsDNS, nDNS; IgG)dsDNS-NcX (IgG)Einzelstrang-DNS (ssDNS; IgG)ENA Pool (IgG)ENA PoolPlus (IgG)ENA ProfilPlus 1 oder 2 (IgG)ENA SLE-Profil 1 oder 2 (IgG)GADGAD/IA-2 PoolGewebs-Transglutaminase (Endomy.; IgA, IgG)glomeruläre Basalmembran (GBM; IgG)Histone (IgG)IA-2Intrinsic Factor (IgG)Jo-1 (IgG)Leber-Niere-Mikrosomen (LKM-1; IgG)Myeloperoxidase (MPO; IgG)nRNP/Sm (IgG)Nukleosomen (IgG)p53 (IgG)Parietalzellen (PCA; IgG)PM-Scl (PM-1; IgG)Phosphatidylserin (IgA, IgG, IgM, IgAGM)Proteinase 3 (IgG)PR3-hn-hr (IgG)PR3-Capture (IgG)Rheumafaktoren (IgA, IgG, IgM)ribosomale P-Proteine (IgG)Sa (IgG)Schilddrüsenperoxidase (TPO; IgG)Scl-70 (IgG)SLA/LP (IgG)Sm (IgG)SS-A (Ro; IgG)SS-B (La; IgG)Thyreoglobulin (TG; IgG)TSH-Rezeptor (TRAk; IgG)TRAk Fast (IgG)Zentromer-Protein B (CENP B; IgG)zirkulierende Immunkomplexe (CIC)

Nachweis weiterer Antikörper:Gliadin (GAF-3X; IgA, IgG)Saccharomyces cerevisiae (IgA, IgG)

Infektions-Serologie:Adeno-Viren (IgA, IgG, IgM)Borrelia (IgG, IgM)Borrelia VlsE (IgG)Chlamydia pneumoniae (IgA, IgG, IgM)Chlamydia trachomatis (IgA, IgG, IgM)Cytomegalie-Viren (IgG, IgM)Diphtherie-Toxoid (IgG)Epstein-Barr-Virus-Capsid-Ag (IgA, IgG, IgM)Epstein-Barr-Virus-Early-Ag (IgA, IgG, IgM)Epstein-Barr-Virus-Nuclear-Ag, EBNA-1 (IgG)FSME-Viren (IgG, IgM)Helicobacter pylori Vollantigen (IgA, IgG)Helicobacter pylori CagA (IgA, IgG)HSV-1 (Glykoprotein C1; IgA, IgG, IgM)HSV-2 (Glykoprotein G2; IgA, IgG, IgM)HSV-1/2-Pool (IgA, IgG, IgM)Influenza-A-Viren (IgA, IgG, IgM)Influenza-B-Viren (IgA, IgG, IgM)Legionella pneumophila (IgA, IgG, IgM)Masern-Viren (IgG, IgM)Mumps-Viren (IgG, IgM)Mycoplasma pneumoniae (IgA, IgG, IgM)Parainfluenza-Viren, Pool (IgA, IgG, IgM)Röteln-Viren (IgG, IgM)RSV (IgA, IgG, IgM)SARS-CoV (IgG)Tetanus-Toxoid (IgG)Toxoplasma gondii (IgG, IgM)Treponema pallidum (IgG, IgM)Varizella-Zoster-Viren (IgG, IgM)Virulenzfakt. von Yers. enterocol. (IgA, IgG)

Allergologie:Gesamt-IgEAllercoat™ 6-ELISA (600 verschiedeneAllergene und Allergengemische)

Serumproteine und Tumormarker:Anti-p53

* In der EU zur Zeit nicht als IVD im Vertrieb.

Hergestellt in Deutschland

Anti-Desmoglein 1-ELISA (IgG)

Indikationen: Testsystem zur in-vitro-Bestimmung von Antikörpern gegen Desmoglein 1 im menschlichen Serum oder Plasma zur Diagnostik folgender Erkrankungen: Pemphigus foliaceus, Pemphigus vulgaris.

Klinische Bedeutung: Autoantikörper gegen Desmoglein 1 und 3 sind Marker für Pemphigus-Er-krankungen, die sich klinisch und immunpathologisch in 4 Formen untergliedern lassen: Pem-phigus vulgaris, Pemphigus foliaceus, paraneoplastischer Pemphigus und IgA-Pemphigus.

Bei Patienten mit Pemphigus vulgaris sind die Schleimhäute immer betroffen. Die Mehrheit der Pemphigus-vulgaris-Patienten entwickelt initial ausschließlich Läsionen in der Mundschleimhaut. Bei einem Teil dieser Patienten treten im Verlauf der Erkrankung schlaffe Blasen am Integument auf, besonders an Stellen, die Druck und Reibung ausgesetzt sind. Patienten mit Pemphigus vulga-ris, die ausschließlich Mundschleimhautveränderungen aufweisen, haben lediglich IgG-Antikörper gegen Desmoglein 3, während Patienten mit Haut- und Schleimhautläsionen Antikörper gegen Desmoglein 1 und 3 bilden. Bei Patienten mit Pemphigus foliaceus imponieren klinisch auf Grund der sehr oberflächlichen Spaltbildung im Stratum granulosum selten Blasen. Es kommt vielmehr zu Erosionen mit blätterteigartigen Krusten, vorwiegend in den seborrhoischen Arealen; die Schleim-häute sind niemals betroffen. Kongruent dazu ist der Pemphigus foliaceus ausschließlich mit Anti-körpern gegen Desmoglein 1 assoziiert. Der paraneoplastische Pemphigus ist stets mit einer Neo-plasie assoziiert. Die damit zusammenhängenden Immunreaktionen richten sich nicht nur gegen Desmoglein 3, sondern auch gegen Proteine der desmoso-malen Plaques wie Envoplakin, Periplakin, Desmoplakin und Plektin. Der IgA-Pemphigus ist durch IgA-Antikörper gegen Desmoglein 1 und Desmocollin 1 charakterisiert. Desmoglein 1 und 3 sind Cadherine, also transmembranöse calciumab-hängige Glykoproteine der epidermalen Desmosomen. Als Bestandteile der Maculae adherentes vermitteln sie über homophile und heterophile extrazelluläre Bindung den Zell-Zell-Kontakt in der Epidermis und in den oberflächennahen Schleimhäuten. Die pathogenetische Bedeutung der Autoantikörper gegen Desmoglein 1 und 3 ist eindeutig be-legt, da die Injektion von Serum von Pemphigus-Patienten in neonatale Mäuse zu Blasenbildung führt. Die genauen Mecha-nismen, die zur Blasenbildung führen, sind allerdings unklar. Klinische Sensitivität und Spezifität: Bei 50 Patienten mit Pemphigus foliaceus, 71 Patienten mit Pem-phigus vulgaris und einem Kontrollkollektiv aus 69 Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen sowie 401 gesund erscheinenden Blutspendern wurden die Seren mit dem EUROIMMUN Anti-Desmog-lein 1-ELISA untersucht. Die Sensitivität des ELISA für Pemphigus foliaceus lag bei 96,0 %, bei einer Spe-zifität von 99,1 %. Im Kollektiv mit Pemphigus vulgaris wurden 46,5 % der Patienten positiv gefunden.

Stellenwert des Anti-Desmoglein 1-ELISA: Zum Nachweis zirkulierender Autoantikörper hat sich beim Pemphigus die indirekte Immunfluoreszenz (auf Affenösophagus als sensitives Substrat) be-währt, bei der allerdings nicht zwischen Antikörpern gegen Desmoglein 1 und gegen Desmoglein 3 unterschieden werden kann. Der ELISA ist bezüglich Sensitivität und Spezifität dem IIFT gleichwertig, wenn rekombinantes Desmoglein 1 und rekombinantes Desmoglein 3 verwendet werden. In den meisten Fällen ist die Durchführung des Anti-Desmoglein 1-ELISA und des Anti-Desmoglein 3-ELISA ausreichend, um die Diagnose eines Pemphigus zu stellen. Der IIFT ist dann zusätzlich erforderlich, wenn bei negativem ELISA-Ergebnis weiterhin der klinische Verdacht auf einen Pemphigus besteht. Besondere Bedeutung kommt dem Anti-Desmoglein 3-ELISA in der Differentialdiagnose von Mund-schleimhautläsionen zu, und zwar der Unterscheidung von Pemphigus vulgaris gegenüber Lichen ruber mucosae, benignen Aphten, M. Behcet und Steven-Johnson Syndrom.

Der Anti-Desmoglein 1-ELISA und der Anti-Desmoglein 3-ELISA sind hoch sensitive und spezifische Testsysteme für den Nachweis von Pemphigus-Erkrankungen. Bei unbehandelten Patienten besteht bei ausschließlich positivem Anti-Desmoglein 3-ELISA Hinweis auf einen Pemphigus vulgaris mit nur Schleimhautbeteiligung, bei sowohl positivem Anti-Desmoglein 3-ELISA als auch positivem Anti-Desmoglein 1-ELISA Hinweis auf einen Pemphigus vulgaris mit Schleimhaut- und Hautbe-teiligung sowie bei ausschließlich positivem Anti-Desmoglein 1-ELISA Hinweis auf einen Pemphi-gus foliaceus. Die Höhe der Anti-Desmoglein 1- und Anti-Desmoglein 3-Serumspiegel korreliert weitgehend mit der Schwere der Erkrankung, der Krankheitsaktivität und dem Behandlungserfolg.

Kollektiv nAnti-

Desmoglein 1-positiv

Pemphigus foliaceus (PF)

50 48 (96,0 %)

Pemphigusvulgaris (PV)

71 33 (46,5 %)

Asymptomatische Blutspender (BS)

401 3 (0,7 %)

Bullöses Pemphigoid (BP)

48 1 (2,1 %)

Lineare IgA-Dermatose (LAD)

21 0 (0,0 %)

Sensitivität fürPemphigus foliaceus

50 48 (96,0 %)

Spezifität für Pemphigus foliaceus

470 4 (99,1 %)

EUROIMMUN AG · 23560 Lübeck · Seekamp 31 · Telefon 0 45 1 / 58 55-0 · Fax 58 55-591 · E-Mail [email protected] · www.euroimmun.de

Anti-Desmoglein 1-ELISA.indd 1 06.10.2009 13:02:25


Immunblots der EUROIMMUN AGAutoantikörper-Diagnostik:

EUROASSAY:Profile bestehend aus bis zu 7 Antigenen von:ENA und verwandte Antigene: nRNP/Sm, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, Jo-1,dsDNS, Histone, Nukleosomen, CENP B, PM-Scl,ribosomale P-Proteine, AMA M2Leber-Antigene: LKM-1, LC-1, SLA/LPAMA M2, M4, M9ANCA-Antigene: MPO, PR3Schilddrüsen-Antigene: TG, TPO

EUROLINE:ANA-Profil 1: nRNP/Sm, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, Jo-1, CENP B, dsDNS, Nukleo-somen, Histone, ribosomale P-ProteineANA-Profil 3: nRNP/Sm, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNS, Nukleosomen, Histone, ribosomale P-Proteine, AMA M2Anti-ENA-Profil 1: nRNP/Sm, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, Jo-1Myositis-Profil: Mi-2, Ku, PM-Scl,Jo-1, PL-7, PL-12, Ro-52Leber-Profile: AMA-M2, 3E (BPO), Sp100, PML,gp210, LKM-1, LC-1, SLA/LP, Ro-52Neuronale-Antigene-Profil 2: Amphiphysin, CV2.1**PNMA2 (Ma-2/Ta), Ri, Yo, HuAnti-Ganglioside-Profil 1: GM1, GD1b, GQ1bAnti-Ganglioside-Profil 2: GM1, GM2, GM3, GD1a, GD1b, GT1b, GQ1bANCA Profile: MPO, PR3, GBM

EUROLINE-WB:neuronale Antigene (+ rekomb. Hu, Yo, Ri)HEp-2-Zell-Antigene (+ SS-A und Ro-52, CENP B)

Infektions-Serologie:

EUROLINE:Bordetella pertussis (IgA, IgG)Borrelia-RN-AT (p18, p19, p20, p21, p58, OspC,p39, p83, LBb, LBa, VlsE Bg, VlsE Bb, VlsE Ba)EBV-Profil (IgG, IgM, VCA gp125, VCA p19und EBNA-1, p22, EA-D)Hantaviren (IgG, IgM)Rötelnviren (IgG)TORCH-Profil* (T. gond., Röteln, CMV, HSV-1, -2)

Westernblot:Borrelia burgdorferi (IgG, IgM)Borrelia afzelii (IgG, IgM)Borrelia garinii (IgG, IgM)Echinococcus granulosus (IgG)Epstein-Barr-Viren (IgG, IgM)Helicobacter pylori (IgA, IgG)Treponema pallidum (IgG, IgM)Virulenzfakt. von Yers. enterocol. (IgA, IgG)

EUROLINE-WB:Anti-Borrelia (B. afzelii + rekomb. VlsE)Anti-HSV (HSV-1 + HSV-2 gG2)Treponema pallidum + Cardiolipin

Allergologie:

EUROASSAY: Profil Haustiere (IgE)Profil Nahrungsmittel (IgE)Profil Inhalation (IgE)Profil Insektengifte (IgE)Profil Latex (IgE)Profil Latex plus (mit Ficus u. Früchten; IgE)

EUROLINE:Profil Atopie (IgE)Profil Nahrungsmittel (IgE)Profil Inhalation (IgE)Profil Inhalation (Pädiatrie; IgE)Profil Pollen-Nahrungsmittel-Kreuzreakt. (IgE)

Software/Automaten:

EUROLineScanKamerasystem EUROBlotCameraScannersystem EUROBlotScannerInkubationsautomat EUROBlotMaster

Radioimmunoassays derEUROIMMUN AG

Autoantikörper-Diagnostik:

Thyreoperoxidase (TPO; IgG)Thyreoglobulin (TG; IgG)TSH-Rezeptor (TRAk; IgG)Acetylcholin-Rezeptor (ACHR; IgG)Glutamatdecarboxylase (GAD; IgG)Insulin (IAA; IgG)P/Q-Calciumkanäle* (VGCC; IgG)Tyrosinphosphatase (IA-2; IgG)dsDNS (IgA/IgG/IgM)

Antigen-Bestimmung:

Thyreoglobulin (TG)

Hormon-Bestimmung:

freies Trijodthyronin (FT3)freies Thyroxin (FT4)Thyreotropin (TSH)Calcitonin

* In der EU zur Zeit nicht als IVD im Vertrieb.** CV2-Teilprotein, welches ausschließlich die N-terminal lokalisierten Epitope enthält.


Linearität: Die Linearität des ELISA wurde durch 4 serielle Verdünnungen von 6 Serumpro-ben bestimmt. Die lineare Regression wurde berechnet und R2 betrug bei allen Proben > 0,95. Der Anti-Desmoglein 1-ELISA (IgG) ist mindestens im untersuchten Konzentrationsbereich (9-197 RE/ml) linear.

Reproduzierbarkeit: Zur Kontrolle der Reproduzierbarkeit wurden die Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizienten mit 3 Seren ermittelt. Den Intra-Assay-Variationskoeffizienten liegen jeweils 20 Bestimmungen, den Inter-Assay-Variationskoeffizienten jeweils 4 Bestimmungen in 6 verschie-denen Testansätzen zugrunde.

Referenzbereich: Bei 401 Seren gesund erscheinender Blut-spender im Alter von 18 bis 68 Jahren (151 Frauen, 250 Männer) wurden die Spiegel der Anti-Desmoglein 1-Anti-körper mit dem EUROIMMUN-ELISA bestimmt. Die mittlere Konzentration der Antikörper gegen Desmoglein 1 betrug 1,8 RE/ml und umfasste einen Bereich von 0,4 - 39,0 RE/ml. Bei einem Cut-off von 20 RE/ml waren 0,7 % der Blutspender anti-Desmoglein 1-positiv.

ROC-Analyse: Folgende Kenndaten wurden bei der Analyse von 50 Proben von Patienten mit Pemphigus foliaceus und 470 Kontrollproben ermittelt:

Korrelation der Anti-Desmoglein 1-ELISA von EUROIMMUN und MBL: Bei 50 Seren von Pemphigus foliaceus-Patienten wurden die Antikörperkonzentrationen mit den Anti-Desmo-glein 1-ELISA der Firmen EUROIMMUN und MBL bestimmt. Die qualitativen Ergebnisse der ELISA stimmen zu 94 % überein.

Bei einem Kontrollkollektiv aus 69 Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen (Bullöses Pemphigoid, Lineare IgA-Dermatose) wurden die Antikörperkonzentrationen mit den Anti-Desmoglein 1-ELISA der Firmen EUROIMMUN und MBL bestimmt. Die qualitativen Ergebnisse der ELISA stimmen zu 97 % überein.

Technische Daten:

Antigen Rekombinant, Expression in Säugerzellen, extrazelluläre Domäne des Desmoglein 1 (5 Subdomänen).

Kalibrierung Quantitativ, in relativen Einheiten pro Milliliter (RE/ml). Kalibrationsserum 1: 200 RE/ml Kalibrationsserum 2: 20 RE/ml ; Cut-off Kalibrationsserum 3: 2 RE/ml

Probenverdünnung Serum oder Plasma; 1 : 101 in Probenpuffer.

Reagenzien Gebrauchsfertig. Ausnahme: Waschpuffer (10x). Farbcodierte, mit wei-teren EUROIMMUN-ELISA weitgehend austauschbare Lösungen.

Testablauf 30 min / 30 min / 15 min. Raumtemperatur. Voll automatisierbar.

Messung 450 nm. Referenzwellenlänge zwischen 620 nm und 650 nm.

Packungsformat 48 einzeln abbrechbare Reagenzgefäße inkl. aller erforderlichen Rea-genzien.

Bestell-Nr. EA 1495-4801 G

Test-Charakteristika Anti-Desmoglein 1-ELISA (IgG)

Version: 07/09EA_1495_D_DE_A01

Intra-Assay-Variation, n = 20

Inter-Assay-Variation, n = 4 x 6

SerumMittelwert

(RE/ml)VK (%)

Mittelwert (RE/ml)

VK (%)

1 47 4,0 46 3,7

2 73 3,1 70 6,1

3 111 3,3 114 6,0

Blutspender, n = 401

Perzentil 99. 100.

Cut-off 13,4 RE/ml 39,0 RE/ml

PF PV BP LAD BS

Ant

i-Dsg

1-EL

ISA

(OD

)

0

1

2

3

4

(48/50) (1/48) (0/21) (3/401)(33/71)

0,5Cut-off Spezifität Sensitivität

16,7 RE/ml 98,9 % 96,0 %

21,1 RE/ml 99,2 % 96,0 %


RE/ml0,1 1 10 100 1000

Häu

fig

keit

n

0

20

40

60

80

100

120

401 Blutspender

PF-Patienten,

n = 50

EUROIMMUN

positiv negativ

MBLpositiv 47 2

negativ/grenzwertig

1 0

Kontrollen,

n = 69

EUROIMMUN

positiv negativ

MBLpositiv 0 1

negativ/grenzwertig

1 67

Anti-Desmoglein 1-ELISA.indd 2 06.10.2009 13:02:25


DSG3

DSG3

DSG3

DSG3

DSG3

DSG3

DSG3

DSG3









Anti-Desmoglein 3-ELISA (IgG)

Indikationen: Testsystem zur in-vitro-Bestimmung von Antikörpern gegen Desmoglein 3 im menschlichen Serum oder Plasma zur Diagnostik folgender Erkrankung: Pemphigus vulgaris.

Klinische Bedeutung: Autoantikörper gegen Desmoglein 1 und 3 sind Marker für Pemphigus-Erkrankungen, die sich klinisch und immunpathologisch in 4 Formen untergliedern lassen: Pemphigus vulgaris, Pemphigus foliaceus, paraneoplastischer Pemphigus und IgA-Pemphigus.

Bei Patienten mit Pemphigus vulgaris sind die Schleimhäute immer betroffen. Die Mehrheit der Pemphigus-vulgaris-Patienten entwickelt initial ausschließlich Läsionen in der Mundschleimhaut. Bei einem Teil dieser Patienten treten im Verlauf der Erkrankung schlaffe Blasen am Integument auf, besonders an Stellen, die Druck und Reibung ausgesetzt sind. Patienten mit Pemphigus vulga-ris, die ausschließlich Mundschleimhautveränderungen aufweisen, haben lediglich IgG-Antikörper gegen Desmoglein 3, während Patienten mit Haut- und Schleimhautläsionen Antikörper gegen Desmoglein 1 und 3 bilden. Bei Patienten mit Pemphigus foliaceus imponieren klinisch auf Grund der sehr oberflächlichen Spaltbildung im Stratum granulosum selten Blasen. Es kommt vielmehr zu Erosionen mit blätterteigartigen Krusten, vorwiegend in den seborrhoischen Arealen; die Schleim-häute sind niemals betroffen. Kongruent dazu ist der Pemphigus foliaceus ausschließlich mit Anti-körpern gegen Desmoglein 1 assoziiert. Der paraneoplastische Pemphigus ist stets mit einer Neo-plasie assoziiert. Die damit zusammenhängenden Immunreaktionen richten sich nicht nur gegen Desmoglein 3, sondern auch gegen Proteine der desmoso-malen Plaques wie Envoplakin, Periplakin, Desmoplakin und Plektin. Der IgA-Pemphigus ist durch IgA-Antikörper gegen Desmoglein 1 und Desmocollin 1 charakterisiert. Desmoglein 1 und 3 sind Cadherine, also transmembranöse calciumab-hängige Glykoproteine der epidermalen Desmosomen. Als Bestandteile der Maculae adherentes vermitteln sie über homophile und heterophile extrazelluläre Bindung den Zell-Zell-Kontakt in der Epidermis und in den oberflächennahen Schleimhäuten. Die pathogenetische Bedeutung der Autoantikörper gegen Desmoglein 1 und 3 ist eindeutig be-legt, da die Injektion von Serum von Pemphigus-Patienten in neonatale Mäuse zu Blasenbildung führt. Die genauen Mecha-nismen, die zur Blasenbildung führen, sind allerdings unklar.

Klinische Sensitivität und Spezifität: Bei 71 Patienten mit Pemphigus vulgaris, 50 Patienten mit Pem-phigus foliaceus und einem Kontrollkollektiv aus 69 Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen sowie 401 gesund erscheinenden Blutspendern wurden die Seren mit dem EUROIMMUN Anti-Des-moglein 3-ELISA untersucht. Die Sensitivität des ELISA für Pemphigus vulgaris lag bei 100 %, bei einer Spezifität von 99,6 %. Im Kollektiv mit Pemphigus foliaceus wurden alle Patienten negativ gefunden.

Stellenwert des Anti-Desmoglein 3-ELISA: Zum Nachweis zirkulierender Autoantikörper hat sich beim Pemphigus die indirekte Immunfluoreszenz (auf Affenösophagus als sensitives Substrat) be-währt, bei der allerdings nicht zwischen Antikörpern gegen Desmoglein 1 und gegen Desmoglein 3 unterschieden werden kann. Der ELISA ist bezüglich Sensitivität und Spezifität dem IIFT gleichwertig, wenn rekombinantes Desmoglein 1 und rekombinantes Desmoglein 3 verwendet werden. In den meisten Fällen ist die Durchführung des Anti-Desmoglein 1-ELISA und des Anti-Desmoglein 3-ELISA ausreichend, um die Diagnose eines Pemphigus zu stellen. Der IIFT ist dann zusätzlich erforderlich, wenn bei negativem ELISA-Ergebnis weiterhin der klinische Verdacht auf einen Pemphigus besteht. Besondere Bedeutung kommt dem Anti-Desmoglein 3-ELISA in der Differentialdiagnose von Mund-schleimhautläsionen zu, und zwar der Unterscheidung von Pemphigus vulgaris gegenüber Lichen ruber mucosae, benignen Aphten, M. Behcet und Steven-Johnson Syndrom.

Der Anti-Desmoglein 1-ELISA und der Anti-Desmoglein 3-ELISA sind hoch sensitive und spezifische Testsysteme für den Nachweis von Pemphigus-Erkrankungen. Bei unbehandelten Patienten besteht bei ausschließlich positivem Anti-Desmoglein 3-ELISA Hinweis auf einen Pemphigus vulgaris mit nur Schleimhautbeteiligung, bei sowohl positivem Anti-Desmoglein 3-ELISA als auch positivem Anti-Desmoglein 1-ELISA Hinweis auf einen Pemphigus vulgaris mit Schleimhaut- und Hautbe-teiligung sowie bei ausschließlich positivem Anti-Desmoglein 1-ELISA Hinweis auf einen Pemphi-gus foliaceus. Die Höhe der Anti-Desmoglein 1- und Anti-Desmoglein 3-Serumspiegel korreliert weitgehend mit der Schwere der Erkrankung, der Krankheitsaktivität und dem Behandlungserfolg.

Kollektiv nAnti-

Desmoglein 3positiv

Pemphigus vulgaris (PV)

71 71 (100 %)

Pemphigusfoliaceus (PF)

50 0 (0 %)

Asymptomatische Blutspender (BS)

401 1 (0.2 %)


48 1 (2.1 %)

Lineare IgA-Derma-tose (LAD)

21 0 (0,0 %)

Sensitivität für Pemphigus vulgaris

71 71 (100 %)

Spezifität für Pemphigus vulgaris

470 2 (99.6 %)











Allergologie:



Software/Automaten:





Antigen-Bestimmung:

Thyreoglobulin (TG)

Hormon-Bestimmung:




Linearität: Die Linearität des ELISA wurde durch 4 serielle Verdünnungen von 6 Serumpro-ben bestimmt. Die lineare Regression wurde berechnet und R2 betrug bei allen Proben > 0,95. Der Anti-Desmoglein 3-ELISA (IgG) ist mindestens im untersuchten Konzentrationsbereich (14-195 RE/ml) linear.

Reproduzierbarkeit: Zur Kontrolle der Reproduzierbarkeit wurden die Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizienten mit 3 Seren ermittelt. Den Intra-Assay-Variationskoeffizienten liegen jeweils 20 Bestimmungen, den Inter-Assay-Variationskoeffizienten jeweils 4 Bestimmungen in 6 verschie-denen Testansätzen zugrunde.

Referenzbereich: Bei 401 Seren gesund erscheinender Blut-spender im Alter von 18 bis 68 Jahren (151 Frauen, 250 Männer) wurden die Spiegel der Anti-Desmoglein 3-Anti-körper mit dem EUROIMMUN-ELISA bestimmt. Die mittlere Konzentration der Antikörper gegen Desmoglein 3 betrug 1,8 RE/ml und umfasste einen Bereich von 0,4 - 25,3 RE/ml. Bei einem Cut-off von 20 RE/ml waren 0,2 % der Blutspender anti-Desmoglein 3-positiv.

ROC-Analyse: Folgende Kenndaten wurden bei der Analyse von 71 Proben von Patienten mit Pemphigus vulgaris und 470 Kontrollproben ermittelt:

Korrelation der Anti-Desmoglein 3-ELISA von EUROIMMUN und MBL: Bei 71 Seren von Pemphigus vulgaris-Patienten wurden die Antikörperkonzentrationen mit den Anti-Desmo-glein 3-ELISA der Firmen EUROIMMUN und MBL bestimmt. Die qualitativen Ergebnisse der ELISA stimmen zu 99 % überein.

Bei einem Kontrollkollektiv aus 69 Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen (Bullöses Pemphigoid, Lineare IgA-Dermatose) wurden die Antikörperkonzentrationen mit den Anti-Desmoglein 3-ELISA der Firmen EUROIMMUN und MBL bestimmt. Die qualitativen Ergebnisse der ELISA stimmen zu 97 % überein.

Technische Daten:

Antigen Rekombinant, Expression in Säugerzellen, extrazelluläre Domäne des Desmoglein 3 (5 Subdomänen).

Kalibrierung Quantitativ, in relativen Einheiten pro Milliliter (RE/ml). Kalibrationsserum 1: 200 RE/ml Kalibrationsserum 2: 20 RE/ml ; Cut-Off Kalibrationsserum 3: 2 RE/ml






Bestell-Nr. EA 1496-4801 G

Test-Charakteristika Anti-Desmoglein 3-ELISA (IgG)



Intra-Assay-Variation, n = 4 x 6

SerumMittelwert

(RE/ml)VK (%)

Mittelwert (RE/ml)

VK (%)

1 42 4,4 44 6,1

2 63 2,6 69 5,3

3 155 5,9 163 3,3

RE/ml0,1 1 10 100 1000

Häu

fig

keit

n

0

20

40

60

80

401 Blutspender



Perzentil 99. 100.

Cut-Off 11,4 RE/ml 25,3 RE/ml

Cut-Off Spezifität Sensitivität

15.9 RE/ml 99,4 % 100 %

21.8 RE/ml 99,6 % 100 %

PV PF BP LAD BS

Ant

i-Dsg

3-E

LIS

A (O

D)

0

0,5

2

3

4

(71/71) (1/48) (0/21) (1/401)(0/50)

1

PV-Patienten,

n = 71

EUROIMMUN

positiv negativ

MBLpositiv 70 0

negativ/grenzwertig

1 0

Kontrollen,

n = 69

EUROIMMUN

positiv negativ

MBLpositiv 0 1

negativ/grenzwertig

1 67


BP180

BP180

BP180

BP180

BP180

BP180

BP180

BP180









Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (IgG)

Indikationen: Testsystem zur in-vitro-Bestimmung von Antikörpern gegen BP180 im mensch-lichen Serum oder Plasma zur Diagnostik folgender Erkrankungen: Bullöses Pemphigoid, Pem-phigoid gestationis, Schleimhautpemphigoid und Lichen ruber pemphigoides.

Klinische Bedeutung: Bullöse Autoimmundermatosen sind organspezifische Autoimmunerkran-kungen. Sie sind charakterisiert durch die Bildung von Autoantikörpern gegen Strukturproteine der Haut. Diese Strukturproteine vermitteln den Zell-Zell-Kontakt der Keratinozyten innerhalb der Epidermis sowie die Adhäsion der Epidermis auf der Dermis. Bullöse Autoimmundermato-sen werden anhand der Zielantigene und der Lokalisation der Blasen in 4 Hauptgruppen unter-schieden: die Pemphigoid- und Pemphigus-Erkrankungen, die Epidermolysis bullosa acquisita und die Dermatitis herpetiformis Duhring. Die Blasenbildung erfolgt bei den Pemphigus-Erkran-kungen intraepidermal, bei den anderen bullösen Autoimmundermatosen subepidermal.

Das Bullöse Pemphigoid (BP) ist mit einer Inzidenz von 0,7 bis 1,8 jährlichen Neuerkrankungen pro 100.000 Einwohner die häufigste subepidermal blasenbildende Autoimmundermatose. Es sind vorwiegend ältere Menschen von der Erkrankung betroffen. Klinisch äußert sich das BP durch pralle Blasen am Integument. Über Wochen und Monate kann das BP jedoch auch ohne Blasenbildung verlaufen. Daher sollte bei allen älteren Patienten mit länger bestehenden ju-ckenden Hautveränderungen ein BP in die Differentialdiagnostik mit einbezogen werden. Ver-schiedene immunologische Verfahren werden für die differentialdiagnostische Einordnung der Erkrankung eingesetzt. Von Bedeutung ist der Nachweis der zirkulierenden Autoantikörper bei 90 % der BP-Patienten. Diese Autoantikörper richten sich hauptsächlich gegen zwei hemidesmo-somale Proteine. Die BP-Antigene weisen Molmassen von 180 kDa (BP180) bzw. 230 kDa (BP230) auf. BP230 ist intrazellulär in der hemidesmosomalen Plaque lokalisiert. Bei BP180 handelt es sich um ein transmembranes Glykoprotein mit einem intrazellulär lokalisierten C-Terminus und einem extrazellulären N-Terminus. Die Ektodomäne besteht aus 15 kollagenen und 16 nicht-kollagenen Domä-nen. Dabei stellt die 16. nicht-kollagene Domäne (NC16A), welche unmittelbar an die Keratinozytenmembran grenzt, das immunogene Epitop dar. Die Mehrheit der BP-Patienten weist Autoantikörper gegen BP180 auf. Die Bestimmung der Autoantikörper erfolgt durch direkte und indirekte Immun-fluoreszenz. In der direkten Immunfluoreszenz können in Biopsien periläsionaler Haut gewebsgebundene Autoanti-körper und/oder Komplementablagerungen nachgewiesen werden. Mittels der indirekten Immunfluoreszenz (Substrat: Ösophagus, Affe und humane Haut) lassen sich zirkulie-rende Autoantikörper im Serum der Patienten beschreiben. Autoantikörper gegen die Basalmembran zeigen eine feinli-neare Färbung zwischen Stratum basale und Bindegewebe. Die Autoantikörperspezifität kann durch monospezifische ELISA oder Immunoblots charakterisiert werden.

Stellenwert des Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA: Für die Diagnose des BP ist der Nachweis der Autoantikörper in der Haut und/oder im Serum der Patienten entscheidend. BP-Patienten weisen hauptsächlich Autoantikörper gegen BP180 auf. Mit Hilfe der direkten Immunfluoreszenz können die Autoantikörper in der Haut festgestellt werden. Die im Serum zirkulierenden Autoantikör-per lassen sich mittels der indirekten Immunfluoreszenz auf Organschnitten nachweisen. Der Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA1 setzt ein Tetramer der immunogenen NC16A-Domäne ein und eignet sich als wertvolle Alternative zur indirekten Immunfluoreszenz. Vorteil des ELISA ist die eindeutige Charakterisierung der Autoantikörperspezifität bei Einsatz des rekombinanten BP180 und die daraus folgende Abgrenzung zu anderen bullösen Autoimmundermatosen wie Pem-phigus-Erkrankungen, Epidermolysis bullosa acquisita und Dermatitis herpetiformis Duhring. Die multimere Form des Autoantigens erhöht die Immunreaktivität und verbessert somit den Nachweis der Autoantikörper. Der Serumspiegel der Autoantikörper gegen BP180 korreliert mit der Krankheitsaktivität des BP.1 Sitaru et al., Experimental Dermatology 2007;16:770-777

EUROIMMUN AG · D-23560 Lübeck · Seekamp 31 · Telefon 0 45 1 / 58 55-0 · Telefax 58 55-591 · E-Mail [email protected] · www.euroimmun.de

Kollektiv nAnti-BP180-

positiv


118 106 (89,8%)

Pemphigoidgestationis (PG)

20 20 (100,0%)

Asymptomatische Blutspender

494 10 (2,0%)

Rheumatoide Arthritis (RA)

107 2 (1,9%)

Progressive System-sklerose (PSS)

50 2 (4,0%)

Systemischer Lupus erythematodes (SLE)

72 1 (1,4%)

Sensitivität 118 89,8%

Spezifität 723 97,9%

Anti-BP180-ELISA_Mailing.indd 1 06.10.2009 13:10:18










Allergologie:



Software/Automaten:





Antigen-Bestimmung:

Thyreoglobulin (TG)

Hormon-Bestimmung:




Linearität: Die Linearität des ELISA wurde durch 4 serielle Verdünnungen von 6 Serumproben bestimmt. Die lineare Regression wurde berechnet und R2 betrug bei allen Proben > 0,95. Der Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (IgG) ist mindestens im Bereich von 10 - 199 RE/ml linear.

Reproduzierbarkeit: Zur Kontrolle der Reproduzierbarkeit wur-den die Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizienten mit 4 Seren ermittelt. Den Intra-Assay-Variationskoeffizienten liegen jeweils 20 Bestimmungen, den Inter-Assay-Variationskoeffizi-enten jeweils 4 Bestimmungen in 6 verschiedenen Testansät-zen zugrunde.

Klinische Sensitivität und Spezifität: Bei 118 BP-Patienten, einem Kontrollkollektiv aus 229 Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen sowie 494 gesund erscheinenden Blutspen-dern wurden die Seren mit dem EUROIMMUN Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA untersucht. Die Sensitivität des ELISA für BP lag bei 90 %, bei einer Spezifität von 98 %. Des Weiteren wurden 101 Patienten (> 70 Jahre alt) mit nicht-entzündlichen Hauterkrankungen untersucht, wobei die Spezifität des ELISA 99 % betrug.

Referenzbereich: Bei 494 Seren gesund erscheinender Blutspender im Alter von 18 bis 68 Jahren (185 Frauen, 309 Männer) wurden die Spiegel der Anti-BP180-Antikörper mit dem EUROIMMUN-ELISA bestimmt. Die mittlere Konzentration der Antikörper gegen BP180 betrug 4,5 RE/ml und umfaßte einen Bereich von 0,01 bis 168,0 RE/ml. Bei einem Cut-Off von 20 RE/ml waren 2,0 % der Blutspender anti-BP180-positiv.

ROC-Analyse: Folgende Kenndaten wurden bei der Analyse von 118 Proben von BP-Patienten und 723 Kontrollproben ermittelt:

Korrelation der Anti-BP180-ELISA von EUROIMMUN und MBL: Bei 118 Seren von BP-Patienten und einem Kontrollkollek-tiv bestehend aus 229 Seren von Patienten mit anderen Autoimmunerkrankungen (RA, PSS, SLE) wurden die Anti-körperkonzentrationen mit den Anti-BP180-ELISA der Firmen EUROIMMUN und MBL bestimmt. Die qualitativen Ergeb-nisse der ELISA stimmen zu 99 % (BP-Kollektiv) bzw. 98 % (Kontrollkollektiv) überein.

Technische Daten:

Antigen Tetramer der immunogenen NC16A-Domäne (BP180), basierend auf humaner cDNS, exprimiert in E.coli

Kalibrierung Quantitativ, in relativen Einheiten pro Milliliter (RE/ml). Kalibrationsserum 1: 200 RE/ml Kalibrationsserum 2: 20 RE/ml ; Cut-Off Kalibrationsserum 3: 2 RE/ml






Bestellnummer EA 1502-4801-2 G

Test-Charakteristika Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (IgG)


EUROIMMUN AG · D-23560 Lübeck · Seekamp 31 · Telefon 0 45 1 / 58 55-0 · Telefax 58 55-591 · E-Mail [email protected] · www.euroimmun.de


Inter-Assay-Variation, n = 4 x 6

SerumMittelwert

(RE/ml)VK (%)

Mittelwert (RE/ml)

VK (%)

1 27 3,0 26 4,8

2 61 1,2 61 3,1

3 119 1,6 119 4,2

4 177 2,1 174 2,6

RE/ml0,1 1 10 100 1000

Häu

fig

keit

n

0

20

40

60

80

100494 Blutspender

104 BP-Patienten65 BP-Patienten 104 BP-Patienten

RE/ml1 10 100 1000 10000

Häu

fig

keit

n

0

2

4

6

8

10

12

14

16118 BP-Patienten

Cut-Off Spezifität Sensitivität

13,4 RE/ml 95 % 91 %

19,8 RE/ml 98 % 90 %

MBL1: 9,0 RE/ml 95 %2 89 %2

1 gemäß Vorgaben des Herstellers 2 ermittelt mit 118 BP-Patienten und 229 Kontrollseren


Perzentil 95. 98.

Cut-Off 12,5 RE/ml 27,4 RE/ml

n = 118(BP)

MBL Anti-BP180-ELISA (IgG)

positiv negativ

EUROIMMUN Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (IgG)

pos. 105 1

neg. 0 12

n = 229(RA, PSS, SLE)

MBL Anti-BP180-ELISA (IgG)

positiv negativ

EUROIMMUN Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (IgG)

pos. 5 0

neg. 7 217

Anti-BP180-ELISA_Mailing.indd 2 06.10.2009 13:10:19

AG Serologische Bestimmung von Autoimmundermatosen...

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