DNA-Fingerprint 1

Nachweis der PCR-Produkte durch

Agarose-Gelelektrophorese

DNA-Fingerprint 2

1. Vorbereiten der Gelkammer

DNA-Fingerprint 3

1. Vorbereiten der Gelkammer

1.1 1g Agarose werden mit 33 ml TAE-Puffer in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben!

1.2 Kochen Sie das Gemisch in der Mikrowelle kurz auf, schwenken Sie um und kochen Sie erneut kurz auf!1.3 Lassen Sie die Agarose-Lösung auf 55°C abkühlen (Handrückentest) und gießen Sie das Gel!

DNA-Fingerprint 4

DNA-Fingerprint 5

1.4 Entfernen Sie nach dem Erstarren des Gels die Metallkeile!1.5 Überschichten Sie das Gel mit 270 ml TAE- Puffer (1 fach)!1.6 Ziehen Sie den Kamm!

1. Preparation of the Gel Chamber

DNA-Fingerprint 6

2. Probenvorbereitung für Agarose-Gelelektrophorese

DNA-Fingerprint 7

2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese

2.1 Entnehmen Sie Ihre 6 PCR-Tubes aus dem Thermocycler!

2.2 Setzen Sie Ihre PCR-Tubes in die Tube- adapter!

DNA-Fingerprint 8

DNA-Fingerprint 9

2.3 Pipettieren Sie 5 µl Orange G Loading dye (LD) in jedes der 6 PCR-Tubes und durchmischen Sie durch Auf- und Abpipettieren!

2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese

DNA-Fingerprint 10

3. Befüllen der Geltaschen

DNA-Fingerprint 11

3. Befüllen der Geltaschen

3.1 Befüllen Sie die Geltaschen von links nach rechts mit:- 12 µl Molekulargewichts-Standard (MWR)- 20 µl –GVL Kontrolle mit PMM (1)- 20 µl –GVL Kontrolle mit GMM (2)- 20 µl LM-Probe (T) mit PMM (3)- 20 µl LM-Probe (T) mit GMM (4)- 20 µl +GVL-DNA mit PMM (5)- 20 µl +GVL-DNA mit GMM (6)

DNA-Fingerprint 12

4. Durchführen der Gelelektrophorese

DNA-Fingerprint 13

DNA-Fingerprint 14

4. Durchführen der Gelelektrophorese

4.1 Verschließen Sie die Gelkammer und starten Sie die Elektrophorese bei 100 V! 4.2

Beenden Sie die Elektrophorese kurz bevor der rote Farbstoff Orange G das Gelende erreicht hat!

DNA-Fingerprint 15

5. Färben des Gels

DNA-Fingerprint 16

5. Färben des Gels

5.1 Öffnen Sie die Gelkammer und dekantieren Sie den TAE-Puffer ab!

(Wiederverwendung des Puffers istmöglich!)5.2 Überführen Sie das Gel in eine Färbe-schale und überschichten Sie es 5 Minuten mit 70 ml Färbelösung (100 fach)!

DNA-Fingerprint 17

5.3 Gießen Sie die Färbelösung ab und entfärben Sie das Gel 25 Minuten in der Färbeschale in lauwarmem Wasser!

5. Making DNA Fragments Visible

DNA-Fingerprint 18

6. Gelauswertung

DNA-Fingerprint 19

6. Evaluation

6.1 Identifizieren Sie die DNA-Banden im Gel anhand des Molekulargewichts-

Standards mit: 100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp, 1000 bp!

DNA-Fingerprint 20

6.2 Enthält Ihre untersuchte Lebensmittelprobe (T) einen Anteil einer gentechnischen Veränderung?6.3 Vergleichen Sie Ihre Ergebnisse mit den

DNA-Banden nach der PAGE!

6. Evaluation