Elecsys® HIV combi PT Immunoassay der vierten Generation (Ag/Ab-Test)Entwickelt zur Früherkennung der HIV-Infektion

Die Elecsys® 2010, MODULAR® ANALYTICS E170, cobas e 411, e 601, e 602 Analysesysteme basieren auf der Technologie des Elektrochemilumineszenz-Immunoassays (ECLIA).

COBAS, LIFE NEEDS ANSWERS, ELECSYS und MODULAR sind Marken von Roche.Alle sonstigen Warenzeichen sind Eigentum der jeweiligen Inhaber.

©2012 Roche

Roche Diagnostics International Ltd.CH-6343 RotkreuzSchweizwww.cobas.com

References1. UNAIDS Report on the Global AIDS Epidemic 2011(http://www.unaids.org/en/media/unaids/

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Hicks, P.L., Aaronson, W.H., Moore, R.D., Paltiel, A.D., Freedberg, K.A. (2009). Racial and sex disparities

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http://pag.ias2011.org/EPosterHandler.axd?aid=2370

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12. Mühlbacher, A. et al. (2012). Performance evaluation of a new fourth gen. HIV combination antigen-

antibody assay. Med. Microbiol. Immunol. DOI: 10.1007/s00430-012-0250-5.

· Testdauer 27 Minuten· Verbesserte Sensitivität:

Zur früheren Erkennung der Infektion· WHO-kalibrierte analytische

Sensitivität für HIV-1-p24-Antigen unter <1,05 IU/mL

· Genauer Nachweis von HIV-1, einschliesslich Gruppe O und HIV-2

· Klinische Spezifität: Kosten- und zeiteffiziente Bestimmung durch weniger Wiederholungstests

Der Testkit besteht aus sechs Komponenten: Vier ECLIA-Reagenzien und zwei Kalibrationslösungen, die alle nach dem Öffnen für 12 Wochen stabil sind, wenn sie bei 2 – 8 °C gelagert werden.

Die mit dem Kit gelieferten ECLIA-Reagenzien sind sofort gebrauchsfertig, und die Kalibratorlösungen benötigen lediglich eine einfache 15-minütige Rekonsti-tution in destilliertem oder deinonisiertem Wasser.

Hoch sensitiver und spezifischer Elektrochemilumineszenz- Immunoassay (ECLIA) der vierten Generation zum qualitativen Nachweis von HIV-1-p24-Antigen und Anti-körpern gegen HIV-1, einschliesslich der Gruppe O und HIV-2 in Humanserum oder -plasma.

Der Test wird in drei Schritten nach dem Sandwich- Prinzip durchgeführt und dauert nur 27 Minuten.

Der Elecsys combi PT Test ist CE-gekennzeichnet gemäss Richtlinie 98/79/EG.

Elecsys® HIV combi PT Immunoassay Entwickelt zur Früherkennung der HIV-Infektion

“Zuverlässiges diagnostisches Screening ist ein entscheidender Aspekt der globalen Strategie zur Reduktion der menschlichen und finanziellen Belastung der HIV-Übertragung.”7

Das HI-Virus

Das HI-Virus befällt gezielt CD4+-T-Lymphozyten, die eine zentrale Rolle bei der Regulation des Immunsystems spielen, dessen Funktion durch die Zerstörung dieser Zellen beein-trächtigt wird. Der Aufbau des HI-Virus ist in Abbildung 1 dargestellt.

Über 34 Millionen Menschen weltweit sind mit HIV infiziert, wobei die verschiedenen genetischen Subtypen des Virus bestimmte geografische Verteilungen zeigen.1,2 Die Über-tragung der Infektion erfolgt durch Kontakt mit infizierten Körperflüssigkeiten, wie zum Beispiel durch ungeschützten Sexualverkehr, ungeprüfte Bluttransfusionen oder gemein-samen Gebrauch von Nadeln,3 sowie durch Mutter-Kind-Übertragung während der Schwangerschaft, bei der Geburt oder beim Stillen.4

Die HIV-Infektion führt schliesslich zu einer schweren immunologischen Störung, dem sogenannten erworbenen Immundefizienz-Syndrom (Acquired Immune Deficiency Syndrome, AIDS).5 Es kann sich über Jahre hinweg und in vier Stadien entwickeln: Primärinfektion, asymptomatisches Stadium, symptomatisches Stadium und AIDS.6 Die Kenntnis des Stadiums der HIV-Infektion von Patienten kann Ärzten helfen, massgeschneiderte Behandlungspläne zu erstellen. Die Infektion ist zwar nach wie vor nicht heilbar, doch durch einen frühzeitigen Behandlungsbeginn kann die Funktion des Immunsystems aufrechterhalten und die Lebenserwar-tung verlängert werden. Dies unterstreicht die Notwendigkeit einer möglichst frühen Erkennung der Infektion.7,8

Ein zuverlässiges diagnostisches Screening ist ein entschei-dender Aspekt der globalen Strategie zur Reduktion der menschlichen und finanziellen Belastung der HIV-Infektion.9

!RNA

p24

p17

gp120

gp41

Abbildung 1: Aufbau des humanen Immundefizienzvirus: Die HIV-Partikel sind von einem Mantel aus Lipiden, der Virushülle (oder Membran), umgeben. An der Aussenseite der Hülle befinden sich rund 72 Spikes, die von den Proteinen gp120 und gp41 gebil-det werden. Direkt unter der Virushülle liegt die aus dem Protein p17 bestehende Matrix. Der Viruskern (das Kapsid) besteht aus dem Protein p24.

Gegenwärtig leben weltweit über 34 Millionen Menschen

mit HIV/AIDS, davon 22,9 Millionen in afrikanischen

Ländern südlich der Sahara, und 3,4 Millionen sind

unter 15 Jahre alt. Im Jahr 2010 traten schätzungsweise

2,7 Millionen HIV-Neuinfektionen auf. 390.000 der

Neuinfizierten waren jünger als 15 Jahre. Jeden Tag

ziehen sich über 7.000 Menschen eine HIV-Infektion

zu — das sind fast 300 pro Stunde. Im Jahr 2010 starben

1,8 Millionen Menschen an AIDS. Davon waren 250.000

jünger als 15 Jahre. Seit dem Beginn der Epidemie haben

sich mehr als 60 Millionen Menschen mit HIV infiziert,

und fast 30 Millionen sind an HIV-bedingten Ursachen

gestorben.1

Aufbau eines HIV-1-Virions

Kurze Gesamttestzeit für schnelle ErgebnisseErmöglicht durch das ECLIA-Testverfahren

Testprinzip: Kombinierter, einstufiger Sandwich- und Doppelantigen-Sandwich-(DAGS-)Assay mit Vorbehandlung (Testdauer 27 Minuten)

Schritt 1 (9 Minuten):Patientenprobe wird mit Detergens inkubiert, welches die in der Probe vor-handenen HIV-Virionen lysiert und das HIV-p24-Antigen freisetzt.

Schritt 2 (9 Minuten):Biotinylierte monoklonale Antikörper sowie spezifische Proteine und Peptide und mit einem Ruthenium-Komplex markierte monoklonale Antikörper sowie spezifische Proteine und Peptide, reagieren mit HIV-Antigen und -Antikörpern und bilden einen Sandwich-Komplex.

Schritt 3 (9 Minuten):Nach Zugabe von streptavidinbeschichteten Mikropartikeln wird der Komplex über die Interaktion von Biotin und Streptavidin an die Festphase gebunden. Zur Messung des Signals wird die Reaktionsmischung in die Messzelle überführt.

Elektrochemilumineszenz-Immunoassay (ECLIA) zum qualitativen Nachweis von HIV-1-p24-Antigen und Anti-körpern gegen HIV-1, einschliesslich der Gruppe O und HIV-2 in Humanserum oder -plasma. Der Test verwendet von der env- und pol-Region des HIV-1 (einschliesslich der Gruppe O) und HIV-2 abgeleitete rekombinante Antigene, um die Konzentration von Anti-HIV-Antikör-pern zu bestimmen. Zum Nachweis von viralem Antigen verwendet der Test für HIV-1-p24 spezifische monoklo-nale Antikörper (Abbildung 2).

Frühere serologische Tests zum Nachweis der HIV-Infektion basierten auf der Detektion von Antikörpern gegen HIV-Proteine. Diesen Tests fehlt jedoch die not-wendige Sensitivität und Spezifität für die Früherken-nung einer akuten Infektion, da es eine Zeitlang dauert, bis die Anti-HIV-Antikörpertiter eine nachweisbare Konzentration erreichen. Der Elecsys® HIV combi PT Test der vierten Generation kombiniert zwei verschiedene Testformate für den gleichzeitigen Nachweis von Anti-HIV-Antikörpern und HIV-Antigen. Bei diesem Test handelt es sich um einen sensitiven und spezifischen

Ultrasensitiver Elecsys® HIV combi PT Test

HIV in der Probe (enthält p24-Ag)

Humanes IgG in der Probe

Humanes IgM in der Probe

p24-Ag

MessungLyse des Virus

Biotinylierte HIV-spezifische Proteineund Peptide

Biotinylierter monoklonaler Antikörper gegen p24-Ag

Ruthenylierter monoklonaler Antikörper gegen p24-Ag

Streptavidin-Mikropartikel

Ruthenylierte HIV-spezifische Proteineund Peptide

Ru

9 minRu

Ru

Ru

Ru

9 minVorbehandlung

9 min 9 min

9 minRu

Die Reaktionsmi-schung wird in die Messzelle gesaugt, wo die Mikropartikel magnetisch an der Oberfläche der Elektrode immobili-siert werden. Durch Anlegen einer Spannung an die Elektrode wird Chemilumineszenz induziert, die mittels eines Photoverstär-kers gemessen wird.

Abbildung 2: Gleichzeitiger Nachweis von HIV-p24-Antigen und Antikörpern gegen HIV-1, einschließlich der Gruppe O und HIV-2.

der CE-Kennzeichnung erforderlich ist (Abbildung 3). In dieser Studie war die analytische Sensitivität des Elecsys-Tests sehr gut im Vergleich zu anderen handels-üblichen kombinierten Antigen/Antikörper-Immunoas-says (1,89 IU/mL für ADVIA Centaur®, 1,20 IU/mL für AxSYM® und 0,94 IU/mL für ARCHITECT®).10,12 Die hohe Sensitivität des Elecsys-Tests wurde in einer nachfol-genden unabhängigen Studie bestätigt, die einen Wert von 1,095 IU/mL für die untere Nachweisgrenze des Elecsys-Tests ermittelte.11

Ausgezeichnete Sensitivität für frühen Nachweis einer akuten Infektion (kürzeres diagnostisches Fenster)Der Elecsys® HIV combi PT Test wurde gegen den HIV-p24-Antigen-Referenzstandard der Weltgesund-heitsorganisation (WHO) standardisiert. Die analytische Sensitivität des Tests wurde in einer internationalen Multizenterstudie auf 1,05 IU/mL bestimmt10,12 und liegt damit unter der unteren Nachweisgrenze von 2 IU/mL, die gemäss den EU-Leitlinien zur Erlangung

Der Elecsys® HIV combi PT Test ist für den gleichzeitigen Nachweis von HIV-p24-Antigen und Anti-HIV-Antikör-pern bestimmt. Es wurde nachgewiesen, dass dieser Test das diagnostische Fenster im Frühstadium der

Optimaler Nutzen für Ihr Labor Sicherer früher serologischer Nachweis einer akuten HIV-Infektion

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

10

8

6

4

2

0

WHO-Standardwerte (IU/ml)

Elec

sys®

HIV

com

bi P

T

(CO

I)

Sensitivität 1,05 IU/ml bei COI 1,0

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Akute Phase

Serokonversionsfenster

Wochen JahreZeit ab der initialen Infektion

Asymptomatische Phase

Symptomatische Phase

Nukleinsäuretests

p24-Antigen

Antigen/Antikörper-Test der 4. Generation

Antikörper-Test der 3. Generation

Abbildung 3: Analytische Sensitivität des Elecsys HIV combi PT Tests bezogen auf den HIV- p24-Antigen-Referenzstandard der Weltgesundheitsorganisation (1. Internationales Referenzreagenz 1992, Code 90/636).10,12

Abbildung 4: Vergleich der Zeit, bis eine akute Infektion mit ver-schiedenen kombinierten HIV-Antigen/Antikörper-Immunoassays nachgewiesen werden kann.10,12 

Abbildung 5: Antigen/Antikörper-Kombinationstests helfen, das Serokonversionsfenster zu schliessen.

HIV-Infektion im Vergleich zu anderen kommerziellen Antigen/Antikörper-Immunoassays (Abbildung 4)10 und Immunoassays der vierten Generation verkürzt.

0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0Mittlere Erkennung der Serokonversion mit

Ag/Ab-Konkurrenztests

PCR-Detektion

Elecsys AxSYMARCHITECT ADVIA Centaur

Tage

HIV-Prävalenz und Verteilung der Subtypen

Der HIV-Genotyp entwickelt sich schnell weiter und zeigt eine erhebliche regionale Diversität (Abbildung 6). Der Elecsys® HIV combi PT Test erkennt alle HIV-Subtypen mit hoher Sensitivität und Spezifität und ist daher für den weltweiten Einsatz geeignet (Tabelle 1).

Elecsys® HIV combi PT (getestet/positiv)

HIV-1 Gruppe M (Subtypen A – J) 629/629

HIV-1 Gruppe O 8/8

HIV-2 472/472

HIV-Ag-positive Proben 85/85

Abbildung 6: Prävalenz von HIV und weltweite Verteilung der vorherrschenden HIV-Subtypen.

Zuverlässiger Nachweis aller HIV-Gruppen und Subtypen

HIV-Prävalenz bei Erwachsenen

Tabelle 1: Nachweis verschiedener HIV-Subtypen in Antikörper-positiven Proben mit dem Elecsys HIV combi PT Test.10,12

B

B,F1 (BF)

A,B,C,F1(AB)

B,G,(BG)

A,D,CF,G,H,J,K

A,(AG),G

A,D,C

C,B,A

(AE),B

(BC),(AE),B

B

O,N, most CRF’s

C,B

>15 %

5–15 %

2–5 %

1–2 %

0.5–1.0 %

0.1–0.5%

<0.1%

keine Angaben

Eine Anleitung zur Interpretation der Ergebnisse des Tests und Empfehlungen zu Bestätigungstests finden Sie in Tabelle 2.

Die klinische Spezifität des Elecsys® HIV combi PT Tests reduziert die Notwendigkeit von Wiederholungstests und verbessert dadurch die Laboreffizienz. Die klini-sche Spezifität des Tests erwies sich als vergleichbar mit anderen handelsüblichen kombinierten Antigen/Antikörper-Immunoassays (Abbildung 7).10,12

Patientengruppe Klinische Spezifität

Blutspender (n = 7.343) 99,88 %

Unselektierte Proben aus der tägli-chen Routinediagnostik (n = 4.103)

99,81 %

.

Nachgewiesene klinische Spezifität und Präzision Kosten- und zeiteffizienter Test

Abbildung 7: Klinische Spezifität des Elecsys HIV combi PT Immunoassays gegenüber Vergleichstests, bestimmt mit Blutspenderprobenund klinischen Routineproben in einer weltweiten Multizenterstudie.10,12

Blutspenderproben

Elecsys® HIVcombi PT

ARCHITECT®

HIV Ag/Ab comboElecsys® HIVcombi PT

ARCHITECT®

HIV Ag/Ab comboElecsys® HIVcombi PT

ADVIA Centaur®

HIV Ag/Ab combo

Bangkok, Thailandn = 1.500

Sydney, Australienn = 249

Lissabon, Portugaln = 467

99,93 % 99,93 % 100,00 % 100,00 % 99,78 % 99,56 %

Innsbruck, Österreichn = 2.834

Göttingen, Deutschlandn = 1.004

Mönchengladbach, Deutschlandn = 1.000

99,86 % 99,96 % 100,00 % 99,70 % 99,80 % 99,30 %

Elecsys® HIVcombi PT

PRISM® HIV OPlus

Elecsys® HIVcombi PT

AxSYM® HIVAg/Ab combo

Santiago de Compostela, Spanienn = 1.524

München, Deutschlandn = 700

99,87 % 99,93 % 99,42 % 99,71 %

Wenn HIV-Ergebnis: Interpretation Nächste Schritte

Negativ (<0,90 COI) Keine HIV-Infektion In Verdachtsfällen nach 2 – 3 Wochen zweite Probe entnehmen

Positiv (≥1,0 COI) Positive Probe wird als “initial reak-tiv” betrachtet.Mit nächsten Schritten fortfahren

Abklären und akute Infektion bestätigen:• Test derselben Probe in Doppelbestimmung wiederholen• Neue Serum- oder Plasmaprobe anfordern• Wenn Probe positiv bleibt, weitere Tests wie PCR oder

Western Blot in Betracht ziehen• Wiederholt positive Proben können als positiv für p24-Antigen

oder Antikörper gegen HIV-1/2 betrachtet werden; die Person ist wahrscheinlich mit dem Virus infiziert

Unklar (≥0,90 bis <1,0 COI)

Ergebnis ist unklar, und es werden weitere Tests von Proben empfohlen

• Test derselben Probe in Doppelbestimmung wiederholen• Wiederholt positive Proben können als positiv betrachtet

werden• Bestätigungstests wie PCR oder Western Blot werden vor

einer endgültigen Entscheidung empfohlen

Tabelle 2: Interpretation der Ergebnisse des Elecsys HIV combi PT Immunoassays. Die Ergebnisse werden von der Elecsys Software automatisch ausgewertet, indem das Elektrochemilumineszenzsignal der Probe mit dem Cutoff-Wert der Kalibration des HIV combi PT Tests verglichen wird.

Diagnostischer Algorithmus für den Elecsys® HIV combi PT Test der vierten Generation (Ag+Ab-Test)Interpretation der Ergebnisse des Elecsys® HIV combi PT Tests

Dieser diagnostische Algorithmus ist nur als Orientierungshilfe gedacht und für die meisten Fälle gültig. Landesspezifische Empfehlungen können hiervon abweichen und sollten berücksichtigt werden, bevor eine endgültige Entscheidung getroffen wird.

* Bei Hochrisikopatienten mit initial negativem Ergebnis sofort einen PCR/NAT-Test durchführen.

Elecsys HIV combi PT Test - 4. Generation (Ag+Ab-Test)

Zusätzliche Bestätigungstests (z.B. PCR-Viruslast) durchführen

Test nach 2 Wochen mit frisch entnommener Serumprobe doppelt wiederholen

Test der 4. Generation und Bestätigungstests sind negativ

Test der 4. Generation und Bestätigungstests sind positiv

Negativ

Negativ

Negativ

HIV-negativ HIV-negativ

HIV-negativ Negativ Positiv

Test 2 Wochen später wiederholen

PCR/NAT-Test

Unklar

HIV-positiv

Positiv

Positiv

HIV-positiv

Positiv

Wenn Patient in Niedrigrisikogrup-pe und/oder ohne Symptome ist

Hochrisikopatient mit oder ohne Symptome*

Bestellinformationen

Elecsys® HIV combi PT 100 Tests 05390095190

Zugehörige Elecsys® HIV Tests

Elecsys® HIV Ag 100 Tests 11971611122

Elecsys® HIV Ag Bestätigungstest 12001101122

Kontrollkit für diese HIV-Tests

Elecsys® PreciControl HIV 2 x 2 mL 05162645190

Bitte beachten Sie: Kalibratoren sind bei Tests auf Infektionskrankheiten im Testkit enthalten.

Bestellinformationen

Elecsys® HIV combi PT Test. Ihr Partner für den schnellen, sensitiven, zuverlässigen und genauen Nachweis der HIV-Infektion.

cobas® modular platformFlexible Konfigurationen für massgeschneiderte LösungenMit der cobas modular platform, der cobas 4000, 6000 analyzer series und der cobas 8000 modular analyzer series hat Roche ein Plattformkonzept auf der Basis einer gemeinsamen Architektur entwickelt, das mass-geschneiderte Lösungen für die verschiedensten Probenaufkommen und diagnostischen Anforderungen bereitstellt. Die cobas modular platform reduziert die Komplexität des Laborbetriebs und bietet effiziente und kompatible Lösungen zur Vernetzung.

Flexible und intelligente Lösungen • Vielfältige Konfigurationen mit massgeschneiderten

Lösungen für höhere Effizienz und Produktivität• Niedrigere Kosten und verbesserte Laborabläufe durch

Konsolidierung von klinischer Chemie und Immun-chemie mit mehr als 200 Parametern

cobas 8000 modular analyzer series Hohes Testaufkommen

38 Konfigurationen

cobas 6000 modular analyzer series Mittleres Testaufkommen

7 Konfigurationen

cobas 4000 modular analyzer series Niedriges Testaufkommen

3 Konfigurationen

<c 502>

<c 501>

<c 311>

<e 602>

<e 601>

<e 411>

<c 701> <c 702>

• Zukunftssicherheit durch einfache Anpassung an veränderte Durchsatz- und Parameteranforderungen

• Geringerer Schulungsaufwand und flexiblerer Einsatz von Mitarbeitern durch einheitliche Interaktion mit Hardware, Software und Reagenzien

• Einheitliche Patientenergebnisse durch universelles Reagenzkonzept