Hein Hustinx Laborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK Bern

HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013

Hein HustinxLaborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK

Bern Nationales Referenzlabor Blutspende SRK Schweiz

Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die Immunhämatologie (IH)

1


Hein HustinxResponsable laboratoire d’immunohématologie,

Service de transfusion sanguine CRS Berne Laboratoire de référence national Transfusion CRS

Suisse

L’utilité et l’importance du laboratoire de référence nationalpour l’immunohématologie (IH)

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HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 3

L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH

La question se pose de savoir si ce thème demande une réponse philosophique ou pas. Ou, comme on le dit souvent, faut-il « en avoir ou pas »?

Est-ce que l’on a vraiment besoin d’un laboratoire de référence national? Le fait que le STS Berne soit actuellement le laboratoire de référence national du STS CRS Suisse n’est pas pertinent.

L’immunohématologie (IH) ne représente qu’une toute petite partie du domaine des spécialités médicales et la véritable complexité de l’IH ne devient généralement apparente que chez les patients avec des maladies allo-immunes ou auto-immunes ou des constellations de groupes sanguins rares.

Je vais tenter de vous présenter cette complexité à l’aide des prochains transparents.


Comme vous le savez, l’IH est la somme de plusieurs activités

Directives detransfusion sanguine




Le service de transfusion sanguine STS CRS Suisse a défini le cahier des charges suivant :

1. Laboratoire de confirmation

• Analyses/consultations : toute l’année, 24h sur 24 Traitement immédiat des urgences

• Dépistage des antigènes des groupes sanguins rares d’après les dernières avancées scientifiques (p. ex. par analyse biologique moléculaire)

• Collaboration étroite avec les autres laboratoires de référence

• Eventuellement, membre de SCARF : programme d’échange!

2. Contrôle de qualité

• Organisation de contrôles externes (essais collaboratifs)


L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH (suite)

3. Banque du sang pour les produits sanguins spéciaux

• Approvisionnement de la Suisse en produits sanguins avec des constellations rares d’antigènes

• Tenue de la liste nationale des donneurs avec des groupes sanguins-groupes d’antigènes rares

4. Consultations et formation continue

• Conseils pour l’interprétation de résultats

• Formation continue

• Direction du groupe de travail immunohématologie du STS CRS Suisse

• Y compris l’accréditation et une «peer-review» par des experts étrangers


Le diagramme sur le prochain transparent vous montre comment nous assumons ces « charges »



Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH

Eine Kopiermaschine brauchen wir auch, aber das war nicht gemeint



Nous avons bien besoin d‘une photocopieuse, mais ce n’est pas ce que nous voulions dire


Connectéau monde entier

InterneLivraison de

cellules de testSwissmedic

CSLBioRad

Dépistage AGdes donneurs

R&D PCRSéquençage des groupes sanguins

IndustrieLivraison CE

BioRad, Medion

Génotypage

Génotypage RhD foetal

Laboratoire de référence

ABO à Lund, SuèdeCoopération Paris /

Mannheim / Vienne

Collaboration aux workshops internationaux

OMSLaboratoire

de référence de Bristol

Echange mondial SCARF

Sérothèque avec >2000

groupes sanguins rares + sérothèque

avec antigènes rares

Centre d‘essaiscollaboratifs

Groupes de travail DGTI

Exposés dans toute la

Suisse

Développement de nouvelles techniques

Revue de la littérature

Formation continue

AccréditationPeer review

Laboratoire de référence INTS

T. Peyrard

Diagnostic moléculaire,donneurs et

patients

Formation apprentis

Club Anticorps

PublicationsAffichesExposés

Formation continue

Hôpital de l‘Ile

Consultationsdans toute la

Suisse

Rapports bilingues

D / F

Urgences et permanencecas spéciauxSTS CRS CH

Echantillons étrangers

p.ex. d‘Italie

Elucidation pour labos

privés

Urgences et permanence

pour le canton

de Berne y compris

problèmes à l‘Hôpital de

l‘Ile

Approvisionnement en sang rare:

Suisse, étranger

KryobloedbankAmsterdam

Recommandations(Patients)Directives

(Sérologie des donneurs)

Groupe de travail Immunohématologie

STS CRS CH

Groupe de travail ISBT Rare Blood

Gestion fichier

Donneurs rares

CH/D/A

ImmunohématologieSTS CRS Berne SA

Laboratoire de référence national Suisse



Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH

ImmunhämatologieBSD SRK Bern AG

NationalesReferenzlabor CH

Intern

ArbeitsgruppeImmunhämatologie

BSD SRK CH

AK Klub

Notfälle/PikettSpezielle FälleBSD SRK CH

Notfälle/PikettVersorgung Kanton

Berninklusive

Problemfälle Inselspital

Weiterbildung Insel

F+E PCRSequenzierungBlutgruppen

VorträgeCH weit

InternationalProben aus z.B

Italien

W.H.O Referenzlabor

Bristol

Austausch SCARFweltweit

PublikationenPoster

Abstracts

Arbeitsgruppen DGTI

Versorgung mit

seltenem Blut:

SchweizAusland

Abklärungen Privatlabors

Beratung CH weit

FührungRare Donor File

CH/D/A

Ringversuchs-zentrum

AG-Typisieren von Spendern

Ausbildung Praktikanten

KryoblutbankAmsterdam

Referenzlabor ABO

in Lund SchwedenZusammenarbeit Paris /

Mannheim / Wien

IndustrieLieferung EK

BioRad/Medion

Entwicklung neuer Techniken

Empfehlungen (Patienten)Richtlinien

(Spenderserologie)

Literaturstudium

Mehrsprachige Berichterstattung

D/F

WeiterbildungAkkreditiert Peer reviewMitarbeit

internationale Workshops

Weltweit vernetzt

Serothek mit >2000 seltenen

Blutgruppenproben + Serothek mit

seltenen Antiseren

Lieferung Testzellen Swissmedic

CSLBoRAd

Arbeitsgruppe ISBT

Rare blood

Referenzlabor INTS

T. Peyrard

Molekulare DiagnostikPatienten wie Spender

Genotypisierung

Foetale RHD Genotypisierung



Publications du domaine de l’immunohématologie 2012/2013 :

Exposés :

• High-throughput blood group genotyping (HTBGG) shows an unexpected high frequency of FY*X.P. Gowland, S. Lejon Crottet, C. Henny, F. Still, C. Niederhauser, S.

Fontana and H. Hustinx

• Mixed field agglutination in weak D type 31: no Rh complex alteration except for diminished Band3.J. Reif, H. Hustinx, EM. Dauber, GF. Körmöczi

• Novel KEL heterozygous mutations associated with apparent lack of Kell antigens KEL1 and KEL2 in two patients.V. Karamatic Crew, N Thornton, N Burton, H Hustinx, G Daniels

• A long PCR system for the investigation of difficult Rhesus variants.J. Aeschlimann, P. Gowland, J. Graber, H. Hustinx, S. Fontana and C.

Niederhauser



Publications:

• A novel Bweak hybrid allele lacks three enhancer repeats but generates normal AB0 transcript levels.

B. Thuresson, B. Hosseini-Maaf, AK. Hult, H. Hustinx, M Alan Chester, ML Olsson. • Grosses Engagement der biomedizinischen Analytikerinnen.

H. Hustinx, UE. Nydegger • Monozyten-Monolayer-Assay.

S. Gugger

• DGTI-register seltene Blutspender.H. Hustinx, I. von Zabern

• Serologic and molecular investigations of DAR1 (weak D Type 4.2), DAR1.2, DAR1.3, DAR2 (DARE), and DARA Sofia Lejon Crottet, Lonneke Haer-Wigman, Peter Gowland, Stefano Fontana, Christoph Niederhauser and Hein Hustinx Première publication en ligne: 31 JUILLET 2013!

• P1/P2 genotyping of known and novel null alleles in the P1PK and GLOB histo-blood group systems Julia S. Westman, Åsa Hellberg, Thierry Peyrard, Hein Hustinx, Britt Thuresson and

Martin L. OlssonPremière publication en ligne: 8 AOÛT 2013!

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/trf.12363/abstract






A mon avis, nous assumons bien nos « charges ». L’envoi, année après année, de demandes d’analyses complexes, de clarifications de groupes sanguins problématiques, etc. a enrichi notre expérience et permet aujourd’hui de résoudre les cas difficiles et d’apporter les bonnes réponses aux questions de nos clients. Il est très important de noter qu’il s’agit d’un travail d’équipe et que sans cette collaboration, beaucoup de choses n’auraient pas été possibles.

Je voudrais également mentionner brièvement le Groupe de travail IH du Service de transfusion sanguine Suisse (cela fait aussi partie du cahier des charges). Si la Conférence des Directeurs de STS Suisse les approuve, les nouvelles recommandations pour les patients pourront être publiées le 1er janvier 2014. Nous, c’est à dire un groupe d’experts (STS, hôpitaux), nous avons travaillé pendant près de deux ans au remaniement de ces directives. Sans un vrai travail d’équipe, cela n’aurait pas été possible.

Je voudrais également présenter un cas qui met clairement en évidence la signification du laboratoire de référence national.



Une urgence le jour de l’Ascension 2013, 11:30hSuspicion d’anticorps publics?

* M 7/1

M 7/2

M 7/3

M 7/4

M 7/5

M 7/6

M 7/7

M 7/8

SZ I SZ II SZ3

SZ 4

Eig.

N10 ++ ++ ++ ++’

N20 (+) (+) (+) (+)C37 - (±) - ± - (±) (+) - -P37 ++ ++ ++ ++’ ++ ++ +++ ++

TAD polyvalent : négatif IgG: négatifGroupe sanguin : A RhD positif

*Evaluation avec le panel maison (les érythrocytes-test proviennent toujours des mêmes donneurs. Les dons sont conservés dans de l’azote liquide)


A1 A2 B O Eig. NG fr. Sp.N20 (±) (±) +++’ (+) - (±) +/-N10 + +’ +++’ (++) - (±) +’N37* + + (++

+)+

Résultat de l’échantillon reçu : TC des segments livrés : 2 sur 4 légèrement positifs

Evaluation des résultats• Exclusion d’anticorps contre les substances de la solution

stabilisante• Exclusion d’anti-I (mais pas HI), car notre propre contrôle est

négatif.• Exclusion d’anti-HI, car les tests A1 sont positifs.

*si l’on soupçonne la présence d’anticorps actifs à froid, on placera les échantillons, qui avaient été analysés à une température de 10°C, pendant 20-30 minutes à 37°C. Résultat attendu : un résultat négatif ou presque négatif.

Autres analyses:




Suite à ces observations, nous nous sommes posé la question: Ac IgM/IgG; quels anticorps sont prévisibles contre un antigène de haute fréquence? En Suisse, les plus probables sont les anti-P ou anti-Vel.

Normalement, en présence d’un anti-P, toutes les cellules sont « uniformément » positives. Par contre, lors d’un test indirect à l’anti-globuline (TIA) et surtout avec notre mosaïque maison, un anti-Vel donnera des réactions positives d’intensité variable qui sont généralement renforcées dans la papaïne. S’agit-il d’un anti-Vel? Cinq tests érythrocytaires Vel négatifs ont montré des résultats négatifs lors d’un TIA. Dans ce cas, nous avons donc pu dépister l’antigène Vel (heureusement TAD négatif) : antigène Vel négatif!

Quelle leçon pouvons-nous tirer de ce cas? (Il peut servir à évaluer les processus internes et peut éventuellement être utilisé pour une formation interne).• Entretemps, nous savons que notre cellule test M7//7 est fortement Vel positive! • Si les réactions à un ID/TIA sont faiblement positives, il faut d’abord identifier le

problème (anti-stabi, phénomène ID, froid), avant de procéder par élimination avec le TIA.

• Sans élucidation précise des causes, les essais dans les tubes TIA peuvent donner de faux résultats négatifs parce que les anticorps IgM se dissolvent la plupart du temps lors du lavage des érythrocytes testés (survenu aux Pays-Bas, hémolyse intravasculaire).



• Depuis mars 2013, le code génétique du gène Vel est connu.• Chez les patients Vel négatifs, le gène SMIM1 montre une délétion

17 nt sur l’exon 3 • Storry et al. , Nature Genetics (2013), 45 (5)• Cvejic et al., Nature Genetics (2013), 45 (5)• Ballif et al (Thierry Peyrard!)., EMBO Mol Med (2013) 5

SMIM1 :• protéine transmembranaire de la membrane érythrocytaire• 78 acides aminés divisés en 4 exons • Vel négatif : une délétion de 17 nt sur l’exon 3



1 2 3 4

1: Contrôle Vel positif2: Contrôle Vel négatif 3: Contrôle Vel hétérozygote4: Patient (Vel négatif)

Vel négVel pos

Referenz: Storry JR et al., Nat. Gene. (2013) 45, 524-545 , 50, 2106-2116

En tant que laboratoire de référence, nous avons rapidement développé un SSP-PCR

(aide en cas de questions difficiles, contrôle de donneurs Vel négatif) Size Marker



Vous savez probablement que le sang Vel négatif est extrêmement rare. Suivant les pays et les tests, son incidence est de 1:2000 à 1:4000.Si jamais cette patiente a besoin d‘une transfusion, où trouverons-nous du sang approprié?

Pendant les derniers vingt ans, le laboratoire de référence national a, d’un côté, effectué des dépistages sérologiques Vel (la dernière fois 2010-2012 sur env. 40’000 donneurs). D’un autre côté, il a créé une banque de données avec tous les donneurs rares connus.

Cette banque de données est remise à jour 3 fois par an.

L’accès à ces données est sécurisé par un mot de passe et elles peuvent être consultées par tous les Services de transfusion sanguine de Suisse.

Entretemps, les Services de transfusion sanguine allemands et autrichiens participent également à cette banque de données. «DGTI Register seltene Spender»



Merci vielmals für Ihre Kooperation

Merci beaucoup pour votre coopération

Grazie mille per la Sua collaborazione

Thank you very much for your cooperation

Hein Hustinx Laborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK Bern

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