BlutentnahmeSerumpräparation

Isolierung von Antikörpern

Herzpunktion

Herzpunktion

Herzpunktion

Venenpunktion

Gewinnung und Lagerung von Serum

Blut in Zentrifugenröhrchen sammelnGerinnung bei 37°C (1 Std.) und 4°C über NachtZentrifugieren und Überstand sammeln

Lagerung von IgG:Serum sterilfiltrieren, aliquotieren, gefriertrocknen und bei 4°C oder -20°C lagern;

oderSerum in aliquoten Portionen bei -20°C oder -70°C frieren;

oderSerum nach Zugabe von Azid bei 4°C lagern

Lagerung von IgMSerum sterilfiltrieren, Zugabe von Azid und bei 4°C lagern

Isolierte Ig-s sind empfindlicher als Gesamtserum

Proteinfällung durch Zugabe von Neutralsalzen, z.B. :(NH4)2SO4; NaCl; ZnSO4

Fällung von Total-Ig: 45% (NH4)2SO4 ph, 7,0 bei 4°C

Trennung von IgM, IgG und IgA durch fraktionierte Fällung mit steigenden Mengen an ZnSO4

Entfernung der Salze durchDialyseElektrodialyse Gelfiltration mit MolekularsiebUltrafiltration

Isolierung von AK: Aussalzen

Isolierung von AK: Ionenaustauschchromatographie

Isolierung von AK: Molekularsiebchromatographie

Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung

Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung

Isolierung von AK: Ultrazentrifugation

Isolierung von AK: Affinitätschromatographie

Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

Anti-Immunglobuline (z. B. Schaf) gegen Fc-Teil eines Antikörpers (z. B. Kaninchen) hergestellt

Anti-Immunglobuline (Schaf) an Matrix gebunden

Antikörper (Kaninchen) nach Regeln der Affinitätschromatographie gereinigt

Matrix

Anti-Kaninchen-Ig

Kaninchen-Ig

Affinitätsreinigung von Antikörpern mit Anti-Immunglobulinen

Wechselwirkung AG:AK

AK

AG

AK

AG

AK

AG

Wechselwirkung AG:AK; Affinität

Affinität hoch Affinität niedrigAffinität mittel

Wechselwirkung AG:AK; Kreuzreaktion