Blutentnahme Serumpr¤paration Isolierung von Antik¶rpern

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  • Folie 1
  • Blutentnahme Serumprparation Isolierung von Antikrpern
  • Folie 2
  • Herzpunktion
  • Folie 3
  • Folie 4
  • Folie 5
  • Venenpunktion
  • Folie 6
  • Gewinnung und Lagerung von Serum Blut in Zentrifugenrhrchen sammeln Gerinnung bei 37C (1 Std.) und 4C ber Nacht Zentrifugieren und berstand sammeln Lagerung von IgG: Serum sterilfiltrieren, aliquotieren, gefriertrocknen und bei 4C oder - 20C lagern; oder Serum in aliquoten Portionen bei -20C oder -70C frieren; oder Serum nach Zugabe von Azid bei 4C lagern Lagerung von IgM Serum sterilfiltrieren, Zugabe von Azid und bei 4C lagern Isolierte Ig-s sind empfindlicher als Gesamtserum
  • Folie 7
  • Proteinfllung durch Zugabe von Neutralsalzen, z.B. : (NH 4 ) 2 SO 4 ; NaCl; ZnSO 4 Fllung von Total-Ig: 45% (NH 4 ) 2 SO 4 ph, 7,0 bei 4C Trennung von IgM, IgG und IgA durch fraktionierte Fllung mit steigenden Mengen an ZnSO 4 Entfernung der Salze durch Dialyse Elektrodialyse Gelfiltration mit Molekularsieb Ultrafiltration Isolierung von AK: Aussalzen
  • Folie 8
  • Isolierung von AK: Ionenaustauschchromatographie
  • Folie 9
  • Isolierung von AK: Molekularsiebchromatographie
  • Folie 10
  • Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung
  • Folie 11
  • Folie 12
  • Isolierung von AK: Ultrazentrifugation
  • Folie 13
  • Isolierung von AK: Affinittschromatographie
  • Folie 14
  • Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie
  • Folie 15
  • Folie 16
  • Folie 17
  • Anti-Immunglobuline (z. B. Schaf) gegen Fc-Teil eines Antikrpers (z. B. Kaninchen) hergestellt Anti-Immunglobuline (Schaf) an Matrix gebunden Antikrper (Kaninchen) nach Regeln der Affinittschromatographie gereinigt Matrix Anti - Kaninchen - Ig Kaninchen - Ig Affinittsreinigung von Antikrpern mit Anti-Immunglobulinen
  • Folie 18
  • Wechselwirkung AG:AK
  • Folie 19
  • AK AG AK AG AK AG Wechselwirkung AG:AK; Affinitt Affinitt hoch Affinitt niedrig Affinitt mittel
  • Folie 20
  • Wechselwirkung AG:AK; Kreuzreaktion