Post on 11-Jul-2020
Resultaten EKE IHC 2019-1
De Wiest Bart
27 mei 2019
OLV Ziekenhuis Aalst
EKE IHC 2019-1
Antistoffen: eerste semi-kwantitatieve EKE
ER: n=64
PR: n=64
Her2: n=63
Panel:
Scoring 25/03/2019 (UZ Gent)
Onafhankelijk, in consensus
4 pathologen
Dr. B. Lelie (AZ Zeno)
Dr. C. Colpaert (GZA)
Dr. A.M. Schelfhout (OLV Aalst)
Dr. A.M. Dierick (Sciensano)
Procedure panelbeoordeling
• Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, guidelines, …
– Wat moet / kan aankleuren?
– Wat mag zeker niet aankleuren?
• Vastleggen criteria aankleuring per AS
• Beoordeling
– Consensus binnen het panel
– Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende
– Evt. aanbevelingen protocol
eindbeoordeling
Beoordelingscriteria HER2
Enkel histo beoordeling, downgrade indien cellijn probleem
Optimaal:
- de kleuring van biopt 2 komt overeen met een score 2+
- geen of maximaal zwakke cytoplasmatische aankleuring die niet interfereert met de interpretatie
Goed:
- de kleuring van biopt 2 komt overeen met een score 2+ maar is eerder matig
- of één van de cellijnen is vals positief (bv. 2+ ipv 1+): downgrade
- of er is cytoplasmatische aankleuring die interfereert met de interpretatie : downgrade
actie: optimalisatie nuttig
Beoordelingscriteria HER2
Borderline:
- één van de biopten/cellijnen is vals negatief (bv. de kleuring van biopt 2 komt niet overeen met een score 2+)
- of twee van de biopten/cellijnen zijn vals positief
actie: optimalisatie nodig
Onvoldoende:
- twee van de biopten/cellijnen zijn vals negatief
- of constante overkleuring
actie: dringend optimalisatie nodig
Protocol HER2
n= 63 (1 geen coupe ontvangen )
Conc.: n=24
~40% conc. (<>andere EKE ~ 20% conc.)
Dako: polyclonaal: n=23
Leica/Novocastra: clone CB11: n=1
RTU: n=39
Dako Herceptest: n=1
Roche :rm 4B5: n=37
Leica/Novocastra: clone CB11 : n=1
Protocol HER2
Polyclonaal conc. Dako
Dako datasheet Autostainer:
Ph6: 1/600-1/800 ; 20min RT
Ph9: 1/1000-1/1200 ; 20min RT
Dako AS op Autostainer: Flex+
Inc.tijd : 20min RT
10 verdunningen: 1/150 - 1/800 afh. van HIER
HIER: 2/14 pH9 1/300 en 1/800
HIER: pH6 1/150-1/600
Dako AS op Omnis: Flex+
5 verdunningen :1/100 - 1/600
Inc.tijd : 20min RT/32°C
HIER: enkel pH6
Dako AS op Roche XT: UV kit
1/200 32’ bij 36°C
1/250 28’ RT (+amp)
HIER CC1 30’
Protocol HER2
Clone 4B5 RTU Ventana BMK GX: UVkit
AS: 16’-18’-22’-28’-32’ bij 36°C (1 bij RT?)
+ amplifier: 2 (datasheet?)
HIER: CC1 30’
BMK XT: UVkit
1/3 Datasheet: AS16’ ; CC1 mild
AS: 12’-16’-32’ bij 36°C
+ amplifier: 1
HIER: CC1 30’
BMK Ultra: UVkit
Datasheet: AS12’ ; CC1 mild
AS: 8’-12’-16’-24’-28’-32’ bij 36°C (4/28: 12’ )
+ amplifier 4’ – 8’ (n=10)
HIER: CC1 8’-32’-36’-52’-64’ (24/28 CC1 mild)
BMK iView kit (n=2)
XT: 32 bij 36°C ; HIER: CC1 60’ (= datasheet)
Ultra: AS 32’ RT ; HIER: CC1 36’ (~datasheet)
Protocol HER2
Herceptest Dako RTU
1 deelnemer
Omnis platform
AS inc. 20’ bij 32°C ; HIER pH6 30’
Datasheet?
Clone CB11 Leica
conc. :
Datasheet CB11 (2008): AS 1/40 inc. 60min bij 25°C. ; HIER niet aanbevolen!
Dako Autostainer: AS 1/800 inc. 20’ bij 25°C ; HIER pH9 20’
RTU: Leica BondIII: AS inc. 15’ bij 20°C ; HIER pH9 20’
Antistof HER2 Samenstelling EQA blok
Weefsel
Cellijn
Antistof HER2 : overzichtDako Herceptest by NordiQC
3+
2+
1+
Antistof HER2 : overzichtVentana Pathway by NordiQC
2+ 3+
1+
Antistof HER2 : overzichtOptimaal
3+
3+ Ventana Pathway NordiQC
3+ Dako Herceptest NordiQC
Antistof HER2Optimaal
2+
Ventana Pathway NordiQC
Dako Herceptest NordiQC
Antistof HER2
Optimaal
2+
2+
Dako Herceptest NordiQC
Ventana Pathway NordiQC
Antistof HER2Onvoldoende
Dako poly A0485 1/600 27’ RT’; pH6 10’; Autostainer
Dako Herceptest NordiQC
Binnen datasheet richtlijnen
Antistof HER2Onvoldoende
3+
Dako poly A0485 1/600 27’ RT’; pH6 10’; Autostainer
Dako Herceptest NordiQC
Antistof HER2
Optimaal?
3+ OK
cellijn 2+ OK
cellijn
Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis
3+ EQA histo
Antistof HER2
Borderline
cellijn 2+ EQA histo
Vals negatief
Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis
Antistof HER2
Cellijjn 2+Cellijjn 3+
Histo EQA 2+
Ventana 4B5 Pathway 20’ +amp.4’ bij 36°C’; CC1 30 ’; ultraView BMK Ultra
Optimaal
Antistof HER2
Leica CB11 15’ RT ; pH9 30’; Leica Bond III
1+ EQA cellijn
0 cellijn
Vals positief
Antistof HER2
Leica CB11 15’ RT ; pH9 30’; Leica BondIII
2+ EQA histoachtergrond
Resultaatbespreking HER2
Algemeen
n=63 NQC run B27
n % suff n=324 suff
optimaal 27 43 %56%
83%86 %
goed 8 13% 3%
borderline 12 19 % 2 %
onvoldoende 16 25 % 12%
In house, LDT
Resultaatbespreking HER2
Opgesplitst per clone : conc. polyclonal
Dako%
suffNQC B27
2019
CB11 LeicaNovocastra
% suff
n=23 n=1
optimaal 0 0 % 75% 0 -
goed 1 4% 2 % 0 -
borderline 8 35% 5 % 0 -
onvoldoende 14 61% 18 % 1 -
Totaal suff 4% 0/1
NQC B27 2019
77% (34/44) 67% (4/6)
Resultaatbespreking HER2
Opgesplitst per clone: RTUHerceptest
Dako%
suff4B5
Ventana%
suffCB11 LeicaNovocastra
% suff
n=1 n=37 n=1
optimaal 0 41% 27 25% 0 -
goed 0 38%7
75% 0 -
borderline 0 14% 3 - 1 -
onvoldoende 1 7% 0 - 0 -
Totaal suff 0/1 92% 0/1
NQC B27 2019
88% (n=28) 3 niet geslaagd
94% 78% (5/7) 2 poor result
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Bemerkingen
23% conc. vs 77% RTU
Herceptest: slechts 1 gebruiker, Omnis (NQC B27: 9%)
NQC B27: 14% gebruikt poly AS Dako<> EKE 37%
Per toesteltype:
Dako Autostainer: 13/14 poly AS Dako, 1x CB11
Dako Omnis: 7/8 poly AS Dako, 1x RTU
Ventana platformen: 2/39 gebruiken poly AS Dako
Gebruik datasheets
Ventana: slechts 4/37 ; vnl. aanpassingen aan AS inc.tijd geen probleem
Dako:
geen éénduidig protocol
verdunningen binnen voorgestelde range
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 56 %
OK, maar…
AS in de niet-geslaagde groep: 79% Dako poly
11% Ventana 4B5
7% Leica CB11
3% Herceptest Dako
AS in geslaagde groep: 3% Dako poly op Ventana platform
97% Ventana 4B5
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 56 %
AS in geslaagde groep: 3% Dako poly op Ventana platform
Cave AS op ander platform
XT UV detectie
HIER CC1: 30min
AS 1/200: inc. 32min bij 36°C
Maar
Gelijkaardig protocol maar AS bij RT mét AMP onvoldoende
• overkleuring: vals pos. Ca
• cytoplasma +++
• glandulair +++
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 56 %
Niet geslaagde 4B5 Ventana groep: geen datasheet gebruik
36min CC1 ; AS 12min : 1+ en 2+ vals neg
36min CC1 ; AS 28min +amp 16min : overkleurde 2+ cellijn ; 3+ cytoplasma weefsel
36min CC1 ; AS 28min +amp 8min (21°C??): onvoldoende 1+ en 2+
Gebruik controles:
55%
Ruim aantal deelnemers gebruikt nog steeds enkel 3+ weefsel titratiereeks enkel op 3+ ??
Niet meegenomen bij eindbeoordeling vanaf 2019/3 wel
Goede controle = dynamic range (2+ geamplificeerd)
Control slides Dako geen 2+
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Oorzaakanalyse
4 histologische stalen (0/1+, 1+, 2+, 3+) en 4 cellijnen (0, 1+, 2+, 3+)
Rekening houdend met cellijnen:
8 cores OK = optimaal
6-8 cores OK = goed (cytoplasma, zwakkere histo 1+, cellijn 1+ te zwak)
5-7 cores OK = borderline
2 vals negatieve cores
Of 2+ vals negatief
Of 3+ met cytoplasmatische achtergrond
3-6 cores OK: onvoldoende
3+ vals negatief
Minstens 2 vals negatieve cores
Strikte interpretatie: 2+ en 3+ cores moeten aangetoond kunnen worden
Mild: 0 en 1+ cores
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Oorzaakanalyse
Aankleuring 3+ core:
97% geslaagd
2 vals negatief:
Dako poly op Ventana XT : 1/250 28’ RT +amp. 8’ ; CC1 30’
CB11 op Dako Autostainer Flex+: 1/800 20’ RT ; pH9 20’ --> ook 2+ en 3+ cellijn vals negatief !
Aankleuring 2+ core: “problematisch”
Histologie weefsels: 65% optimaal
Cellijnen: 78% optimaal
Cellijn:
Omnis protocol scoort beter (80% OK) <> 62% Autostainer OK
Cellijn 3+: 11/12 Dako poly onvoldoende
Cellijn 2+: 15/18 Dako poly ; 1 Herceptest, 2 Ventana 4B5
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Oorzaakanalyse
Impact verdunning? Grote spreiding 1/100 - 1/800
Datasheet 1/600 - 1/1200 afh. van HIER type <> ~48% gebruikt verdunning rond 1/300 verklaring ?? kleinere verdunning (meer conc. ) geeft geen betere resultaten ??
Range 1/100-1/250:
5/7 borderline, 2/7 onvoldoende (29%)
6/7 probleem 2+ ; 3/7 probleem cellijn
Range 1/300-1/600:
meer onvoldoendes (12/15): 80% probleem 2+ én cellijn
optimaal goed borderline onvoldoende
100 2
150 1
200 (NQC) 1 2 2
250,350,400 3
300 3 5
500,6 4
800 1
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Evolutie:
Eerste EKE vergelijkbaar met NordiQC resultaten
NordiQC algemeen: Na 27 NQC runs nog steeds 14% niet geslaagd (12% onvoldoende)
Eerste NQC run (2006) : 49% niet geslaagd, 24% onvoldoende (37% conc AS)
Run 2009 (~ISO): 28% niet geslaagd , % onvoldoende idem 2006 (30% conc AS)
3+ geen probleem, 2+ “problematisch” (momentopname)
Mogelijke oorzaken:
Niet gevalideerde test met antistof A0485 resultaat NQC varieert 89% - 51% - 77% (runs 2018-2019)
Minder robuust protocol (cave challenging EKE weefsels)
Geen/onvoldoende monitoring Her2 resultaat (PRL PO) jaarverslag
Verkeerde controles: enkel 3+ (of geen?)
Lotvariatie?
Acties:
EKE blok gekleurd bij NordiQC: OK, optimaal mogelijk
Opvragen protocols AFACAP: gelijkaardig met EKE inzendingen: geen éénduidige oorzaak
EKE 2019/3: toevoeging 2+ ampl.
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Vergelijking ISO geaccrediteerd vs niet-geaccrediteerd :
Accreditatie is geen garantie op geslaagde EQA
Belac labo’s: 61% geslaagd 11/18 optimaal: enkel Ventana 4B5
6 borderline (~30%) 3 Ventana 4B5 ; 3 Dako polyclonal
1 onvoldoende (Herceptest)
8/18 labo’s gebruikten geen controle
Niet geaccrediteerde labo’s: 53% geslaagd 24/45 geslaagd (optimaal en goed)
6/45 borderline
15/45 onvoldoende (~30%)
Niet geaccrediteerde labo’s: meer onvoldoendes (30% vs 5% Belac labo’s)
Resultaatbespreking HER2
NordiQC Global vs Belgische deelnemers
NordiQC bevindingen algemeen:
~90% niet-geslaagd: FN, zowel bij FDA approved test als bij LDT test EKE 2019-1: 35% FN
Niet geslaagd FP: enkel bij LDT EKE 2019-1: 11% FP
Typische oorzaken NQC:
4B5: te korte HIER (<24min)
4B5: te korte AS tijd (<12min)
Herceptest: te korte HIER (<40min)
Herceptest: te korte AS (<30min)
Resultaatbespreking HER2
NordiQC Global vs Belgische deelnemers
Overzicht resultaat België 2016-2019
Vanaf Run B26 2018: terugval geslaagde labo’s: >25% poor result
Oorzaak :
Geen nieuwe laboratoria
‘challenging tissues’ minder robuuste protocols
>25%
Resultaatbespreking HER2
NordiQC Global vs Belgische deelnemers Overzicht resultaat België 2016-2019
Run B26
49 Belgische deelnemers ; geen recommended protocols
Dako Conc. AS: 80% score ‘poor’ (FN)
6/8 Autostainer: 1/200 - 1/300 - 1/500 20min RT ; HIER pH6 (idem run B27) ; 1 geen HIER ; 1 HIER pH9
3/7 Omnis: 1/100 - 1/300 - 1/600 20min ; geen linker ; HIER pH6 30min
Optimaal mogelijk: beide Dako toestellen
1/150 - 1/200 – 1/300 – 1/1200 (?typo) 20min RT
HIER pH6 (meest) of pH9
BMK XT (SP3 en Dako clone): optimaal
1/100 - 1/250 ; 28-32min bij 36°C
HIER CC1 30’ - 64’
>25%
Resultaatbespreking HER2
NordiQC Global vs Belgische deelnemers
Run B27
45 Belgische deelnemers
Geen recommended protocols
Ventana 4B5:
30/31 optimaal , 1 borderline (gelijk protocol, n=5)
UV: AS 12-32min. ; HIER CC1 8-36min.
iView: AS 32min. ; HIER CC1 60min.
1 Herceptest:
‘optimal result’ (AS RTU 20min 32°C; HIER pH6 30min, Omnis)
Protocol EKE 2019-1: idem maar score ‘onvoldoende’ ??
16/45 Dako poly conc. (36%) >< EKE 23%
8 Omnis 7 Autostainer 1 Ventana XT
Dako Conc. AS: 31% score ‘poor’ (FN)
4 Autostainer: 1/200 - 1/300 - 1/500 20min RT ; HIER pH6
1 Omnis: 1/600 20min ; geen lnker ; HIER pH6 30min
Optimaal mogelijk: 1/200 – 1/300 – 1/1150 (?typo =EKE) 20min RT ; HIER pH6
BMK XT: 1/250 28min bij 36°C ; HIER CC1 30’ optimaal <> EKE2019-1: ‘goed’
Resultaatbespreking HER2
NordiQC Global vs Belgische deelnemers
Overview FN (niet geslaagd) B22 – B27
FN Dako poly aantal Ventana 4B5 aantal CB11 aantal
B22 1/300-1/500 20' ; HIER pH6 4 geen nvt1/600 60' ; HIER pH61/800 20' ; HIER pH9
2
B23 1/500 15' ; HIER pH6 1 geen nvt 1/800 20' ; HIER pH 9 1
B24 geen nvt geen nvt geen nvt
B25 1/400 20' ; HIER pH6 1 geen nvt 1/800 20' ; HIER pH 9 1
B261/100 - 1/600 ; HIER pH6 pH9 (1) No HIER (1)
10RTU 12' ; HIER CC1 36' ; UV
3 geen nvt
B271/200-1/600 20' ; HIER pH6 (1 Omnis, 5 Autostainer)
6RTU 16' ; HIER CC1 30' ; UV
1 op Dako: RTU Oracle 20' ; HIER pH6 1
= borderline
Resultaatbespreking HER2
Take home message: cf individueel rapport Sciensano
Optimaliseren van methoden
NordiQC website
Leverancier AS
Correct toepassen nationale adviezen en guidelines
Ingangscontrole uitvoeren op gevalideerd controlemateriaal voor ingebruikname
Conc. AS: lotvariatie mogelijk = eiwit conc. kan wijzigen
= monitoren o.b.v. verdunningsreeks
Periodieke evaluatie (KPI): bvb correlatie IHC - ISH
Resultaatbespreking HER2
Take home message: cf individueel rapport Sciensano
Samenstelling controleblok:
Op elk glaasje bij routine aanvraag
Enkel sterke expressor 3+ is onvoldoende
Volledige dynamic range is nodig:
bij ingangscontrole lot: weefsel 2+ is cruciaal (cave conc. AS)
Bij routine gebruik volstaat naast 0 en 3+ een ‘zwakke expressor (= 1+ of 2+)
Permanente monitoring van aankleuring controleblok
Protocol ER
n= 64 (excl. firma’s)
Conc.: n=3
Dako: rm clone EP1: n=1
Cell Marque: rm clone SP1: n=1
Leica Novocastra: mm clone 6F11: n=1
RTU: n=61
Dako: rm clone EP1 : n=21
Dako: mm clone 1D5 : n=1
Roche/Cell Marque: rm clone SP1 : n=36
Thermo/Neomarkers: rm clone SP1 : n=1
Leica Novocastra: mm clone 6F11: n=1
Dako: rm clone SP-A (?) : n=1
Protocol ER
Conc. AS
EP1 Dako
1/50 20’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ met linker 10’
SP1 Cell Marque
BMK XT : 1/60 72’ RT +amp 8’ ; UV HIER CC1 30’
6F11 Leica
BMK XT: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’
Protocol ER
RTU clone SP1 (Ventana/Cell Marque)
Protocol: Datasheet 2013: HIER 60’ , AS 16’ 24%
UView:
AS 16’ – 40’ +/- 4’ tot 16’ amp bij 36°C (53% 16’ AS)
HIER CC1 8’ – 64’ (66% ‘mild’ CC1)
iView:
AS 32’ bij 36°C +amp 16’ ; HIER CC1 36’
AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’ ; geen amp. = datasheet
Resultaat datasheet: 3/8 borderline
endotheel vals positief
storende cytoplasma aankleuring
Protocol ER
RTU clone EP1 (Dako)
Protocol:
Datasheet: 20’RT ; pH9 tijd?
Autostainer (14):
AS: 15’-40’ bij RT (1 deelnemer bij 25°C) 57% datasheet
Envision Flex(+) (3x linker 15’)
HIER pH9 10’-30’ (n=11)
Omnis (8):
10’ - 20’ bij RT (2/7) of 32°C
Envision Flex(+) ; 1x linker 10’
HIER pH 9: 30’
Protocol ER
RTU clone 1D5 (Dako)
Protocol:
Manueel (1)
30’ RT ; HIER pH9 20’
RTU clone 6F11 (Leica)
Bond Max: 15’ RT ; HIER pH6 20’
RTU clone SP1 (Leica)
Bond Max: 15’ RT ; HIER pH6 20’
Scoringscriteria ERAankleuringspatroon: nucleair
• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen
• Normale tonsil : minstens zwak tot matige aankleuring van kiemcentrum macrofagenen squameus epitheel
• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90-100%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in minderheid (ongeveer 20%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 5) : geen aankleuring van de neoplastische cellen
Antistof ER
Ventana SP1 40’ +amp 16’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
Tonsil
Optimaal ?
Antistof ER
Ventana SP1 40’ +amp 16’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
Optimaal ?
Cervix
Antistof ER
Tonsil: OK Cervix OK
Ventana SP1 40’ +amp 16’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
borderline
Antistof ER
optimaal
Cervix
Dako EP1 RTU 30’ RT ; HIER pH9 10’ ; Dako Autostainer Flex+
Antistof ER
Optimaal
Onvoldoende
Dako EP1 RTU 30’ RT ; HIER pH9 10’ ; Dako Autostainer Flex+
Leica RTU 6F11 15’ RT ; HIER pH6 20’ ; Leica Refine Bond III
Resultaatbespreking ER
Algemeen
n=64 NQC 2019B27
n % suff % suff
optimaal 17 27%79%
54%90%
goed 33 52 % 36%
borderline 9 14 % 7%
onvoldoende 4 7% 3%
Resultaatbespreking ER
Opgesplitst per clone : conc.
* NordiQC: waarvan 40% optimaal
** NordiQC: waarvan 61% optimaal
*** NordiQC: waarvan 47% optimaal
6F11
Leica%
suffSP1
C. Marque / Neomarkers
% suff
EP1 Dako
% suff
n=1 n=1 n=1
optimaal 0 - 0 - 0 -
goed 0 - 0 - 0 -
borderline 0 - 1 - 1 -
onvoldoende 1 - 0 - 0 -
Totaal suff - - -
NQC 2019 80%* 84% ** 82% ***
Resultaatbespreking ER
Opgesplitst per clone: RTU
* NordiQC: waarvan 43% optimaal** NordiQC: waarvan 60% optimaal
*** NordiQC: waarvan 31% optimaal
EP1 Dako
% suff
SP1 Ventana/ C. Marque
% suff
6F11 Leica
% suff
1D5 Dako
% suff.
n=21 n=36 n=1 n=1
optimaal 6 29% 8 22% 0 - 0
goed 15 71% 18 50% 0 - 0
borderline 0 0% 8 22% 0 - 0
onvoldoende 0 0% 2 6% 1 - 1
Totaal suff 100% 72% 0/1 0/1
NQC 2019 88% * 95%** 62% *** 2/2
Resultaatbespreking ER
Besluit: Suff. 79 %
AS:
Slechts 5% (n=3) conc. AS
33% Dako clone EP1 , 58% Ventana/Thermo clone SP1
Dako platformen: meer spreiding in protocols (AS): geen invloed op resultaat
Dako clone presteert beter: 100% suff; <> 72% SP1
Ventana:
Slechts 1/5 gebruikt datasheet HIER (60’) minder geslaagd tov NQC
24% te zwakke tegenkleuring (Ventana) downgrade opt. goed
+amp. is geen garantie op optimaal resultaat voldoende lange HIER
Signaalversterker:
42% gebruikt signaalversterker 1/3 niet geslaagd (enkel Ventana)
Borderline: endotheel vals pos. + 1 cellijn vals pos. 50% gebruikt amplifier <> datasheet
4x onvoldoende: storend cytoplasma, vals positieve cellijnen: ½ amplifier
Extra controlecoupe: 55%
Algemene score beduidend lager NQC 2019
Resultaatbespreking ER
Besluit: Suff. 79% Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers
Conc. AS:
Conclusies: niet mogelijk: te weinig gebruik
Optimale kalibratie protocol noodzakelijk:
6F11: NQC slaagpercentage 1/3 tot ½ afh. Van HIER type
EP1: NQC slaagpercentage 1/2
SP1: AS lijkt robuuster: NQC slaagpercentage 2/3 Ventana, 3/5 Omnis, 6/7 Leica
NQC: algemeen slaagpercentage : SP1 93%, EP1 87% en 6F11 71%
3 deelnemers: allen amp. = niet noodzakelijk
Resultaatbespreking ER
Besluit: Suff. 79% Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers
RTU AS:
Dako:
Autostainer: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat ; geen optimaal zelfs niet met linker te zwakke aankleuring in weefsel en cellijn = downgrade
Omnis: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat ; RT levert geen optiimaal resultaat (te zwakke aankleuring)
Ventana
optimaal mogelijk met datasheet of LDT
Gelijke protocols: wisselend resultaat (opt borderline: overkleuring)
Leica:
1 deelnemer: onvoldoende
Suff. Mogelijk mits aanpassing aan voorgesteld protocol / datasheet
NordiQC:
The Leica RTU system PA009/PA0151 (6F11) for BOND gave an overall pass rate of 62%.
Optimal results were only obtained by laboratory modified protocol settings using HIER in BERS2 (pH9) for 20 min. as opposed to performing HIER in BERS1 (pH6) for 20 min. as recommended by Leica.
Resultaatbespreking ER
Besluit: Suff. 79%
Aanbevolen controle: NordiQC
Cervix:
alle cellagen squameus epitheel pos.
stromale cellen matig/sterk pos. (muv endotheel en lymfatische cellen)
Tonsil: monitoring analytische sensitiviteit
Verspreide kiemcentrum macrofagen en squameus epitheel ++ = optimaal resultaat
Resultaatbespreking ER
Besluit: Overzicht resultaten NordiQC Belgian participants: 2016-2019
• Run B26 49 Belgische deelnemers:
10% conc. AS <> NordiQC global 17%
78% geslaagd <>NordiQC global 70%
16% optimaal resultaat: 7/8 SP1 RTU Ventana ; 1 EP1 conc. Dako platform
22% niet geslaagd (5 ‘poor result’: RTU: 4 Dako EP1 ; 1 Ventana SP1 met korte HIER)
EP1 clone :
50% geslaagd, 6% optimaal (1 deelnemer)
Borderline (Dako, Autostainer en Omnis): algemeen te zwak of FN ? gelijk protocol = optimaal ?
SP1 clone:
94% geslaagd, 23% optimaal
1 ‘poor’ (FN: veel te korte HIER) ; 1 borderline (zwak: te korte HIER)
22%
Resultaatbespreking ER
Besluit: Overzicht resultaten NordiQC Belgian participants: 2016-2019
• Run B27 46 Belgische deelnemers:
6% conc. AS ( minder conc. Dan in run B26) <> NordiQC global 18%
89% geslaagd (+11%) <>NordiQC global 90%
48% optimaal resultaat (B26: 16%) : EP1 en SP1, alle Ventana- en Dako platformen <> 55% optimaal
11% niet geslaagd (1 ‘poor result’: Ventana SP1 met datasheet protocol)
EP1 clone :
89% geslaagd, 38% optimaal (B26: 50% geslaagd, 6% optimaal)
Borderline (Dako, Autostainer,2): algemeen te zwak, gelijke protocol = optimaal ??
SP1 clone:
94% geslaagd (idem B26) , 52% optimaal (>100% meer optimaal dan B26)
1 ‘poor’
11%
Protocol PR
n= 64 (excl. firma’s)
Conc.: n=3
Dako: mm clone PgR 1294: n=1
Leica Novocastra:
mm clone 16 (n=1)
Mm clone 16+SAN27 (n=1)
RTU: n=61
Dako:
mm clone PgR 1294 : n=7
Mm clone PgR 636: n=15
Roche/Cell Marque: rm clone 1E2 : n=38
Leica Novocastra: mm clone 16: n=1
Protocol PR
Conc. AS
PgR 1294 Dako
1/50 15’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis
16+SAN27 Leica
1/50 20’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis
16 Leica
BMK XT: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’
Protocol PR
RTU clone PgR 1294 (Dako)
Protocol:
Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 30’ , AS 10’ 43%
Allen Omnis
AS 10’-15’-20’
HIER pH9: 20’ – 30’
RTU clone PgR 636 (Dako)
Protocol: Manueel: 1: HIER pH9 30’ , AS 20’
Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 20’ , AS tijd voorgedefinieerd (20’?)
Allen Autostainer
AS 15’-20’ RT. 30% gebruikt kortere inc. tijd
+linker 15’: 57% (datasheet?)
HIER pH9: 10’ - 20’ - 30’
Protocol PR
RTU clone 16 (Leica)
Protocol:
Bond III: 15’ RT ; HIER pH9 20’
Datasheet 10/2016: HIER pH9 20’ , AS voorgedefinieerd
Protocol PR
RTU clone 1E2 (Roche/C.Marque)
Protocol:
Datasheet:
AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’
28% deelnemers
UView:
AS 12’ – 32’ (51% AS datasheet)
+/- 4’ tot 16’ amp bij 36°C (26%)
HIER CC1 8’ – 36’ - 64’ (59% ‘standard’ CC1)
iView:
AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’ ; geen amp. = datasheet goed, downgrade
Resultaat datasheet:
82% geslaagd ; optimaal maar downgrade ikv tegenkleuring
2/8 borderline: storende cytoplasma aankleuring en/of te zwak
Scoringscriteria PRAankleuringspatroon: nucleair
• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen
• Normale tonsil : geen kernaankleuring
• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens zwak tot matige aankleuring in meerderheid (75%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 5) : max. 1% aankleuring in tumorale cellen
Antistof PR
Core 4 sterk positief 90%
Core 3 zwak/matig positief 75%Cervix
Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
OK?
Antistof PR
Optimaal
Ventana 1E2 16’ ; CC1 64’ ; UV BMK Ultra
optimaal
Antistof PR
Core 4 sterk positief 90%
Core 3 zwak/matig positief 75%Cervix
Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
borderline
OK
Antistof PR
borderline
Ventana 1E2 32 ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
Cervix
aspecifiek
aspecifiek
Antistof PR
Core 3 zwak/matig positief 75%
Te zwakke tegenkleuringVentana 1E2 28’’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
Resultaatbespreking PR
Algemeen
* 1 deelnemer verkeerde AS toegepast
n=64* NQC 2018B26
n % suff % suff
optimaal 27 42%84%
66%85%
goed 27 42% 19%
borderline 6 9% 11%
onvoldoende 4 6% 4%
Resultaatbespreking PR
Opgesplitst per clone : conc.
* NordiQC: waarvan 63% optimaal
** NordiQC: geen optimaal
*** NordiQC: waarvan 70% optimaal
16
Leica / Novocastra
% suff
16+SAN27 Leica/
Novocastra
% suff PgR 1294 Dako
% suff
n=1 n=1 n=1
optimaal 0 - 1 - 1 -
goed 1 - 0 - 0 -
borderline 0 - 0 - 0 -
onvoldoende 0 - 0 - 0 -
Totaal suff - - -
NQC 2018 82%* 4/4 ** 90% ***
Resultaatbespreking PR
Opgesplitst per clone: RTU
* NordiQC: waarvan 62% optimaal** NordiQC: waarvan 66% optimaal
*** NordiQC: waarvan 82% optimaal
**** NordiQC: waarvan 72% optimaal
PgR1294 Dako
% suff
1E2 Ventana/ C. Marque
% suff
16 Leica
% suff
PgR 636 Dako
% suff.
n=7 n=38 n=1 n=15
optimaal 5 71% 8 21% 0 - 12 80%
goed 2 29% 21 55% 1 - 2 13%
borderline 0 0% 6 16% 0 - 0 0%
onvoldoende 0 0% 3 8% 0 - 1 7%
Totaal suff 100% 76% 1/1 93%
NQC 2018 89% * 83%** 100% *** 89% ****
Resultaatbespreking PR
Besluit: Suff. 84 %
Algemene score vergelijkbaar NQC 2019
AS:
Slechts 5% (n=3) conc. AS ; idem ER
38% Dako clone EP1 , 59% Ventana clone 1E2
Dako platformen: cf ER, meer spreiding in protocols (AS en HIER): geen invloed op resultaat
Dako clone presteert beter: 100% suff. <> 76% SP1
Ventana:
2/3 gebruikt datasheet HIER (60’)
½ gebruikt datasheet AS (16’)
44% te zwakke tegenkleuring (Ventana) = downgrade opt. goed
+amp. is geen garantie op optimaal resultaat voldoende lange HIER wel
Signaalversterker:
37% gebruikt signaalversterker 22% niet geslaagd (5/23)
Ventana: 1/3 : vals positief /vals negatief (allen kortere HIER)
2x borderline: kiemcentra vals pos. en/of 1 cellijn vals pos.
4x onvoldoende: cervix vals negatief ; vals positieve cellijnen
Resultaatbespreking PR
Besluit: Suff. 84% Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers
Conc. AS:
Conclusies: niet mogelijk: te weinig gebruik
NQC: algemeen slaagpercentage : clone 16 82%, beide Dako clones 90-95%
RTU AS:
Dako:
Autostainer en Omnis: robuuste antistoffen en test: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat
Ventana
optimaal mogelijk met datasheet of LDT
Gelijke protocols: wisselend resultaat met standaard protocol : 9 opt 1 borderline: overkleuring: kiemcentra vals +
Niet geslaagd: 5/9 gebruiken signaalversterker, maar optimaal mogelijk met amp.
Aankleuring kiermcentra: 13% ( cf NQC 36%)
An aberrant and false positive staining reaction was seen in 36% of the insufficient results and
was characterized by a weak distinct nuclear staining reaction of germinal centre B-cells in the
tonsil. The false positive staining reaction was only seen for the RTU format of rmAb clone 1E2
(Ventana). No single reason for this reaction was identified.
Resultaatbespreking PR
Besluit: Suff. 84%
Extra controlecoupe: 52%
Aanbevolen controle: NordiQC
Cervix: pos. controle (sensitiviteit)
Columnair epitheel, squameus epitheel en stromale cellen sterk pos.
endotheel en lymfocyten cellen negatief
minimale cytoplasmatische aankleuring (PgR 636 geeft sterkere aankleuring)
! Post-menopauzale cervix: lagere PR expressie in squameus epitheel mogelijk !
Tonsil: negatieve controle (cave Ventana clone)
Resultaatbespreking PR
Besluit: Overzicht resultaten NordiQC Belgian participants: 2017-2018
• Run B26
B24 52 Belgische deelnemers:
10% conc. AS <> NordiQC global 27%
98% geslaagd <>NordiQC global 99%
81% optimaal resultaat <>NordiQC global 77% ; alle clones op alle platformen
1 niet geslaagd ( ‘borderline’: RTU: Ventana FP)
Resultaatbespreking PR
Besluit: Overzicht resultaten NordiQC Belgian participants: 2016-2018
• Run B26
B26 49 Belgische deelnemers:
9% conc. AS (idem B24) <> NordiQC global 23%
85% geslaagd (-13%) <> NordiQC global 85%
72% optimaal resultaat (-10%) : beide Dako clones, Ventana clone, alle platformen (geen Leica meer)
15% niet geslaagd (1 ‘poor result’ FN: RTU: Dako clone op Ventana platform ; 4 borderline wegens FP (kiemcentra +) bij Ventana clone 1E2
Dako Omnis:
Downgrade goed obv te zwak
Resultaatbespreking besluit
sufficient 2019 NQC
ER 79 % 90 % 2019
PR 84 % 85 % 2018
HER2* 56 % 86% 2019
* Cave Dako conc. AS
EKE planning
Externe kwaliteitsevaluatie
EKE 2019/1
EKE 2019/2
EKE 2019/3
ER / PR / Her2
CD34, TTF-1 PR / HER2ER reassess
Rondzending coupes door Sciensano
11-15/02/2019
24-28/06/2019 16-20/09/2019
Beoordeling panel 03/2019 ??? 10/2019
Doorsturen individueelresultaat
05/2019 ??? 11/2019
Resultaatbespreking / symposium
Ma 27/05/2019
10/12/2019 10/12/2019
Doorsturen globaal rapport 06/2019 12/2019 12/2019