Resultaten EKE IHC 2019-1 · 3% Dako poly op Ventana platform Cave AS op ander platform XT UV...

Resultaten EKE IHC 2019-1

De Wiest Bart

27 mei 2019

OLV Ziekenhuis Aalst

EKE IHC 2019-1

Antistoffen: eerste semi-kwantitatieve EKE

ER: n=64

PR: n=64

Her2: n=63

Panel:

Scoring 25/03/2019 (UZ Gent)

Onafhankelijk, in consensus

4 pathologen

Dr. B. Lelie (AZ Zeno)

Dr. C. Colpaert (GZA)

Dr. A.M. Schelfhout (OLV Aalst)

Dr. A.M. Dierick (Sciensano)

Procedure panelbeoordeling

• Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, guidelines, …

– Wat moet / kan aankleuren?

– Wat mag zeker niet aankleuren?

• Vastleggen criteria aankleuring per AS

• Beoordeling

– Consensus binnen het panel

– Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende

– Evt. aanbevelingen protocol

eindbeoordeling

Beoordelingscriteria HER2

Enkel histo beoordeling, downgrade indien cellijn probleem

Optimaal:

- de kleuring van biopt 2 komt overeen met een score 2+

- geen of maximaal zwakke cytoplasmatische aankleuring die niet interfereert met de interpretatie

Goed:

- de kleuring van biopt 2 komt overeen met een score 2+ maar is eerder matig

- of één van de cellijnen is vals positief (bv. 2+ ipv 1+): downgrade

- of er is cytoplasmatische aankleuring die interfereert met de interpretatie : downgrade

actie: optimalisatie nuttig

Beoordelingscriteria HER2

Borderline:

- één van de biopten/cellijnen is vals negatief (bv. de kleuring van biopt 2 komt niet overeen met een score 2+)

- of twee van de biopten/cellijnen zijn vals positief

actie: optimalisatie nodig

Onvoldoende:

- twee van de biopten/cellijnen zijn vals negatief

- of constante overkleuring

actie: dringend optimalisatie nodig

Protocol HER2

n= 63 (1 geen coupe ontvangen )

Conc.: n=24

~40% conc. (<>andere EKE ~ 20% conc.)

Dako: polyclonaal: n=23

Leica/Novocastra: clone CB11: n=1

RTU: n=39

Dako Herceptest: n=1

Roche :rm 4B5: n=37

Leica/Novocastra: clone CB11 : n=1

Protocol HER2

Polyclonaal conc. Dako

Dako datasheet Autostainer:

Ph6: 1/600-1/800 ; 20min RT

Ph9: 1/1000-1/1200 ; 20min RT

Dako AS op Autostainer: Flex+

Inc.tijd : 20min RT

10 verdunningen: 1/150 - 1/800 afh. van HIER

HIER: 2/14 pH9 1/300 en 1/800

HIER: pH6 1/150-1/600

Dako AS op Omnis: Flex+

5 verdunningen :1/100 - 1/600

Inc.tijd : 20min RT/32°C

HIER: enkel pH6

Dako AS op Roche XT: UV kit

1/200 32’ bij 36°C

1/250 28’ RT (+amp)

HIER CC1 30’

Protocol HER2

Clone 4B5 RTU Ventana BMK GX: UVkit

AS: 16’-18’-22’-28’-32’ bij 36°C (1 bij RT?)

+ amplifier: 2 (datasheet?)

HIER: CC1 30’

BMK XT: UVkit

1/3 Datasheet: AS16’ ; CC1 mild

AS: 12’-16’-32’ bij 36°C

+ amplifier: 1

HIER: CC1 30’

BMK Ultra: UVkit

Datasheet: AS12’ ; CC1 mild

AS: 8’-12’-16’-24’-28’-32’ bij 36°C (4/28: 12’ )

+ amplifier 4’ – 8’ (n=10)

HIER: CC1 8’-32’-36’-52’-64’ (24/28 CC1 mild)

BMK iView kit (n=2)

XT: 32 bij 36°C ; HIER: CC1 60’ (= datasheet)

Ultra: AS 32’ RT ; HIER: CC1 36’ (~datasheet)

Protocol HER2

Herceptest Dako RTU

1 deelnemer

Omnis platform

AS inc. 20’ bij 32°C ; HIER pH6 30’

Datasheet?

Clone CB11 Leica

conc. :

Datasheet CB11 (2008): AS 1/40 inc. 60min bij 25°C. ; HIER niet aanbevolen!

Dako Autostainer: AS 1/800 inc. 20’ bij 25°C ; HIER pH9 20’

RTU: Leica BondIII: AS inc. 15’ bij 20°C ; HIER pH9 20’

Antistof HER2 Samenstelling EQA blok

Weefsel

Cellijn

Antistof HER2 : overzichtDako Herceptest by NordiQC

3+

2+

1+

Antistof HER2 : overzichtVentana Pathway by NordiQC

2+ 3+

1+

Antistof HER2 : overzichtOptimaal

3+

3+ Ventana Pathway NordiQC

3+ Dako Herceptest NordiQC

Antistof HER2Optimaal

2+

Ventana Pathway NordiQC

Dako Herceptest NordiQC

Antistof HER2

Optimaal

2+

2+


Ventana Pathway NordiQC

Antistof HER2Onvoldoende

Dako poly A0485 1/600 27’ RT’; pH6 10’; Autostainer


Binnen datasheet richtlijnen

Antistof HER2Onvoldoende

3+

Dako poly A0485 1/600 27’ RT’; pH6 10’; Autostainer


Antistof HER2

Optimaal?

3+ OK

cellijn 2+ OK

cellijn

Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis

3+ EQA histo

Antistof HER2

Borderline

cellijn 2+ EQA histo

Vals negatief

Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis

Antistof HER2

Cellijjn 2+Cellijjn 3+

Histo EQA 2+

Ventana 4B5 Pathway 20’ +amp.4’ bij 36°C’; CC1 30 ’; ultraView BMK Ultra

Optimaal

Antistof HER2

Leica CB11 15’ RT ; pH9 30’; Leica Bond III

1+ EQA cellijn

0 cellijn

Vals positief

Antistof HER2

Leica CB11 15’ RT ; pH9 30’; Leica BondIII

2+ EQA histoachtergrond

Resultaatbespreking HER2

Algemeen

n=63 NQC run B27

n % suff n=324 suff

optimaal 27 43 %56%

83%86 %

goed 8 13% 3%

borderline 12 19 % 2 %

onvoldoende 16 25 % 12%

In house, LDT


Opgesplitst per clone : conc. polyclonal

Dako%

suffNQC B27

2019

CB11 LeicaNovocastra

% suff

n=23 n=1

optimaal 0 0 % 75% 0 -

goed 1 4% 2 % 0 -

borderline 8 35% 5 % 0 -

onvoldoende 14 61% 18 % 1 -

Totaal suff 4% 0/1

NQC B27 2019

77% (34/44) 67% (4/6)


Opgesplitst per clone: RTUHerceptest

Dako%

suff4B5

Ventana%

suffCB11 LeicaNovocastra

% suff

n=1 n=37 n=1

optimaal 0 41% 27 25% 0 -

goed 0 38%7

75% 0 -

borderline 0 14% 3 - 1 -

onvoldoende 1 7% 0 - 0 -

Totaal suff 0/1 92% 0/1

NQC B27 2019

88% (n=28) 3 niet geslaagd

94% 78% (5/7) 2 poor result


Besluit: Bemerkingen

23% conc. vs 77% RTU

Herceptest: slechts 1 gebruiker, Omnis (NQC B27: 9%)

NQC B27: 14% gebruikt poly AS Dako<> EKE 37%

Per toesteltype:

Dako Autostainer: 13/14 poly AS Dako, 1x CB11

Dako Omnis: 7/8 poly AS Dako, 1x RTU

Ventana platformen: 2/39 gebruiken poly AS Dako

Gebruik datasheets

Ventana: slechts 4/37 ; vnl. aanpassingen aan AS inc.tijd geen probleem

Dako:

geen éénduidig protocol

verdunningen binnen voorgestelde range


Besluit: Suff. 56 %

OK, maar…

AS in de niet-geslaagde groep: 79% Dako poly

11% Ventana 4B5

7% Leica CB11

3% Herceptest Dako

AS in geslaagde groep: 3% Dako poly op Ventana platform

97% Ventana 4B5


Besluit: Suff. 56 %

AS in geslaagde groep: 3% Dako poly op Ventana platform

Cave AS op ander platform

XT UV detectie

HIER CC1: 30min

AS 1/200: inc. 32min bij 36°C

Maar

Gelijkaardig protocol maar AS bij RT mét AMP onvoldoende

• overkleuring: vals pos. Ca

• cytoplasma +++

• glandulair +++


Besluit: Suff. 56 %

Niet geslaagde 4B5 Ventana groep: geen datasheet gebruik

36min CC1 ; AS 12min : 1+ en 2+ vals neg

36min CC1 ; AS 28min +amp 16min : overkleurde 2+ cellijn ; 3+ cytoplasma weefsel

36min CC1 ; AS 28min +amp 8min (21°C??): onvoldoende 1+ en 2+

Gebruik controles:

55%

Ruim aantal deelnemers gebruikt nog steeds enkel 3+ weefsel titratiereeks enkel op 3+ ??

Niet meegenomen bij eindbeoordeling vanaf 2019/3 wel

Goede controle = dynamic range (2+ geamplificeerd)

Control slides Dako geen 2+


Besluit:

Oorzaakanalyse

4 histologische stalen (0/1+, 1+, 2+, 3+) en 4 cellijnen (0, 1+, 2+, 3+)

Rekening houdend met cellijnen:

8 cores OK = optimaal

6-8 cores OK = goed (cytoplasma, zwakkere histo 1+, cellijn 1+ te zwak)

5-7 cores OK = borderline

2 vals negatieve cores

Of 2+ vals negatief

Of 3+ met cytoplasmatische achtergrond

3-6 cores OK: onvoldoende

3+ vals negatief

Minstens 2 vals negatieve cores

Strikte interpretatie: 2+ en 3+ cores moeten aangetoond kunnen worden

Mild: 0 en 1+ cores


Besluit:

Oorzaakanalyse

Aankleuring 3+ core:

97% geslaagd

2 vals negatief:

Dako poly op Ventana XT : 1/250 28’ RT +amp. 8’ ; CC1 30’

CB11 op Dako Autostainer Flex+: 1/800 20’ RT ; pH9 20’ --> ook 2+ en 3+ cellijn vals negatief !

Aankleuring 2+ core: “problematisch”

Histologie weefsels: 65% optimaal

Cellijnen: 78% optimaal

Cellijn:

Omnis protocol scoort beter (80% OK) <> 62% Autostainer OK

Cellijn 3+: 11/12 Dako poly onvoldoende

Cellijn 2+: 15/18 Dako poly ; 1 Herceptest, 2 Ventana 4B5


Besluit:

Oorzaakanalyse

Impact verdunning? Grote spreiding 1/100 - 1/800

Datasheet 1/600 - 1/1200 afh. van HIER type <> ~48% gebruikt verdunning rond 1/300 verklaring ?? kleinere verdunning (meer conc. ) geeft geen betere resultaten ??

Range 1/100-1/250:

5/7 borderline, 2/7 onvoldoende (29%)

6/7 probleem 2+ ; 3/7 probleem cellijn

Range 1/300-1/600:

meer onvoldoendes (12/15): 80% probleem 2+ én cellijn

optimaal goed borderline onvoldoende

100 2

150 1

200 (NQC) 1 2 2

250,350,400 3

300 3 5

500,6 4

800 1


Besluit:

Evolutie:

Eerste EKE vergelijkbaar met NordiQC resultaten

NordiQC algemeen: Na 27 NQC runs nog steeds 14% niet geslaagd (12% onvoldoende)

Eerste NQC run (2006) : 49% niet geslaagd, 24% onvoldoende (37% conc AS)

Run 2009 (~ISO): 28% niet geslaagd , % onvoldoende idem 2006 (30% conc AS)

3+ geen probleem, 2+ “problematisch” (momentopname)

Mogelijke oorzaken:

Niet gevalideerde test met antistof A0485 resultaat NQC varieert 89% - 51% - 77% (runs 2018-2019)

Minder robuust protocol (cave challenging EKE weefsels)

Geen/onvoldoende monitoring Her2 resultaat (PRL PO) jaarverslag

Verkeerde controles: enkel 3+ (of geen?)

Lotvariatie?

Acties:

EKE blok gekleurd bij NordiQC: OK, optimaal mogelijk

Opvragen protocols AFACAP: gelijkaardig met EKE inzendingen: geen éénduidige oorzaak

EKE 2019/3: toevoeging 2+ ampl.


Besluit:

Vergelijking ISO geaccrediteerd vs niet-geaccrediteerd :

Accreditatie is geen garantie op geslaagde EQA

Belac labo’s: 61% geslaagd 11/18 optimaal: enkel Ventana 4B5

6 borderline (~30%) 3 Ventana 4B5 ; 3 Dako polyclonal

1 onvoldoende (Herceptest)

8/18 labo’s gebruikten geen controle

Niet geaccrediteerde labo’s: 53% geslaagd 24/45 geslaagd (optimaal en goed)

6/45 borderline

15/45 onvoldoende (~30%)

Niet geaccrediteerde labo’s: meer onvoldoendes (30% vs 5% Belac labo’s)


NordiQC Global vs Belgische deelnemers

NordiQC bevindingen algemeen:

~90% niet-geslaagd: FN, zowel bij FDA approved test als bij LDT test EKE 2019-1: 35% FN

Niet geslaagd FP: enkel bij LDT EKE 2019-1: 11% FP

Typische oorzaken NQC:

4B5: te korte HIER (<24min)

4B5: te korte AS tijd (<12min)

Herceptest: te korte HIER (<40min)

Herceptest: te korte AS (<30min)



Overzicht resultaat België 2016-2019

Vanaf Run B26 2018: terugval geslaagde labo’s: >25% poor result

Oorzaak :

Geen nieuwe laboratoria

‘challenging tissues’ minder robuuste protocols

>25%


NordiQC Global vs Belgische deelnemers Overzicht resultaat België 2016-2019

Run B26

49 Belgische deelnemers ; geen recommended protocols

Dako Conc. AS: 80% score ‘poor’ (FN)

6/8 Autostainer: 1/200 - 1/300 - 1/500 20min RT ; HIER pH6 (idem run B27) ; 1 geen HIER ; 1 HIER pH9

3/7 Omnis: 1/100 - 1/300 - 1/600 20min ; geen linker ; HIER pH6 30min

Optimaal mogelijk: beide Dako toestellen

1/150 - 1/200 – 1/300 – 1/1200 (?typo) 20min RT

HIER pH6 (meest) of pH9

BMK XT (SP3 en Dako clone): optimaal

1/100 - 1/250 ; 28-32min bij 36°C

HIER CC1 30’ - 64’

>25%



Run B27

45 Belgische deelnemers

Geen recommended protocols

Ventana 4B5:

30/31 optimaal , 1 borderline (gelijk protocol, n=5)

UV: AS 12-32min. ; HIER CC1 8-36min.

iView: AS 32min. ; HIER CC1 60min.

1 Herceptest:

‘optimal result’ (AS RTU 20min 32°C; HIER pH6 30min, Omnis)

Protocol EKE 2019-1: idem maar score ‘onvoldoende’ ??

16/45 Dako poly conc. (36%) >< EKE 23%

8 Omnis 7 Autostainer 1 Ventana XT

Dako Conc. AS: 31% score ‘poor’ (FN)

4 Autostainer: 1/200 - 1/300 - 1/500 20min RT ; HIER pH6

1 Omnis: 1/600 20min ; geen lnker ; HIER pH6 30min

Optimaal mogelijk: 1/200 – 1/300 – 1/1150 (?typo =EKE) 20min RT ; HIER pH6

BMK XT: 1/250 28min bij 36°C ; HIER CC1 30’ optimaal <> EKE2019-1: ‘goed’



Overview FN (niet geslaagd) B22 – B27

FN Dako poly aantal Ventana 4B5 aantal CB11 aantal

B22 1/300-1/500 20' ; HIER pH6 4 geen nvt1/600 60' ; HIER pH61/800 20' ; HIER pH9

2

B23 1/500 15' ; HIER pH6 1 geen nvt 1/800 20' ; HIER pH 9 1

B24 geen nvt geen nvt geen nvt

B25 1/400 20' ; HIER pH6 1 geen nvt 1/800 20' ; HIER pH 9 1

B261/100 - 1/600 ; HIER pH6 pH9 (1) No HIER (1)

10RTU 12' ; HIER CC1 36' ; UV

3 geen nvt

B271/200-1/600 20' ; HIER pH6 (1 Omnis, 5 Autostainer)

6RTU 16' ; HIER CC1 30' ; UV

1 op Dako: RTU Oracle 20' ; HIER pH6 1

= borderline


Take home message: cf individueel rapport Sciensano

Optimaliseren van methoden

NordiQC website

Leverancier AS

Correct toepassen nationale adviezen en guidelines

Ingangscontrole uitvoeren op gevalideerd controlemateriaal voor ingebruikname

Conc. AS: lotvariatie mogelijk = eiwit conc. kan wijzigen

= monitoren o.b.v. verdunningsreeks

Periodieke evaluatie (KPI): bvb correlatie IHC - ISH


Take home message: cf individueel rapport Sciensano

Samenstelling controleblok:

Op elk glaasje bij routine aanvraag

Enkel sterke expressor 3+ is onvoldoende

Volledige dynamic range is nodig:

bij ingangscontrole lot: weefsel 2+ is cruciaal (cave conc. AS)

Bij routine gebruik volstaat naast 0 en 3+ een ‘zwakke expressor (= 1+ of 2+)

Permanente monitoring van aankleuring controleblok

Protocol ER

n= 64 (excl. firma’s)

Conc.: n=3

Dako: rm clone EP1: n=1

Cell Marque: rm clone SP1: n=1

Leica Novocastra: mm clone 6F11: n=1

RTU: n=61

Dako: rm clone EP1 : n=21

Dako: mm clone 1D5 : n=1

Roche/Cell Marque: rm clone SP1 : n=36

Thermo/Neomarkers: rm clone SP1 : n=1

Leica Novocastra: mm clone 6F11: n=1

Dako: rm clone SP-A (?) : n=1

Protocol ER

Conc. AS

EP1 Dako

1/50 20’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ met linker 10’

SP1 Cell Marque

BMK XT : 1/60 72’ RT +amp 8’ ; UV HIER CC1 30’

6F11 Leica

BMK XT: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’

Protocol ER

RTU clone SP1 (Ventana/Cell Marque)

Protocol: Datasheet 2013: HIER 60’ , AS 16’ 24%

UView:

AS 16’ – 40’ +/- 4’ tot 16’ amp bij 36°C (53% 16’ AS)

HIER CC1 8’ – 64’ (66% ‘mild’ CC1)

iView:

AS 32’ bij 36°C +amp 16’ ; HIER CC1 36’

AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’ ; geen amp. = datasheet

Resultaat datasheet: 3/8 borderline

endotheel vals positief

storende cytoplasma aankleuring

Protocol ER

RTU clone EP1 (Dako)

Protocol:

Datasheet: 20’RT ; pH9 tijd?

Autostainer (14):

AS: 15’-40’ bij RT (1 deelnemer bij 25°C) 57% datasheet

Envision Flex(+) (3x linker 15’)

HIER pH9 10’-30’ (n=11)

Omnis (8):

10’ - 20’ bij RT (2/7) of 32°C

Envision Flex(+) ; 1x linker 10’

HIER pH 9: 30’

Protocol ER

RTU clone 1D5 (Dako)

Protocol:

Manueel (1)

30’ RT ; HIER pH9 20’

RTU clone 6F11 (Leica)

Bond Max: 15’ RT ; HIER pH6 20’

RTU clone SP1 (Leica)

Bond Max: 15’ RT ; HIER pH6 20’

Scoringscriteria ERAankleuringspatroon: nucleair

• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen

• Normale tonsil : minstens zwak tot matige aankleuring van kiemcentrum macrofagenen squameus epitheel

• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90-100%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in minderheid (ongeveer 20%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 5) : geen aankleuring van de neoplastische cellen

Antistof ER

Ventana SP1 40’ +amp 16’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

Tonsil

Optimaal ?

Antistof ER


Optimaal ?

Cervix

Antistof ER

Tonsil: OK Cervix OK


borderline

Antistof ER

optimaal

Cervix

Dako EP1 RTU 30’ RT ; HIER pH9 10’ ; Dako Autostainer Flex+

Antistof ER

Optimaal

Onvoldoende

Dako EP1 RTU 30’ RT ; HIER pH9 10’ ; Dako Autostainer Flex+

Leica RTU 6F11 15’ RT ; HIER pH6 20’ ; Leica Refine Bond III

Resultaatbespreking ER

Algemeen

n=64 NQC 2019B27

n % suff % suff

optimaal 17 27%79%

54%90%

goed 33 52 % 36%

borderline 9 14 % 7%

onvoldoende 4 7% 3%


Opgesplitst per clone : conc.

* NordiQC: waarvan 40% optimaal

** NordiQC: waarvan 61% optimaal

*** NordiQC: waarvan 47% optimaal

6F11

Leica%

suffSP1

C. Marque / Neomarkers

% suff

EP1 Dako

% suff

n=1 n=1 n=1

optimaal 0 - 0 - 0 -

goed 0 - 0 - 0 -

borderline 0 - 1 - 1 -

onvoldoende 1 - 0 - 0 -

Totaal suff - - -

NQC 2019 80%* 84% ** 82% ***


Opgesplitst per clone: RTU

* NordiQC: waarvan 43% optimaal** NordiQC: waarvan 60% optimaal


EP1 Dako

% suff

SP1 Ventana/ C. Marque

% suff

6F11 Leica

% suff

1D5 Dako

% suff.

n=21 n=36 n=1 n=1

optimaal 6 29% 8 22% 0 - 0

goed 15 71% 18 50% 0 - 0

borderline 0 0% 8 22% 0 - 0

onvoldoende 0 0% 2 6% 1 - 1

Totaal suff 100% 72% 0/1 0/1

NQC 2019 88% * 95%** 62% *** 2/2


Besluit: Suff. 79 %

AS:

Slechts 5% (n=3) conc. AS

33% Dako clone EP1 , 58% Ventana/Thermo clone SP1

Dako platformen: meer spreiding in protocols (AS): geen invloed op resultaat

Dako clone presteert beter: 100% suff; <> 72% SP1

Ventana:

Slechts 1/5 gebruikt datasheet HIER (60’) minder geslaagd tov NQC

24% te zwakke tegenkleuring (Ventana) downgrade opt. goed

+amp. is geen garantie op optimaal resultaat voldoende lange HIER

Signaalversterker:

42% gebruikt signaalversterker 1/3 niet geslaagd (enkel Ventana)

Borderline: endotheel vals pos. + 1 cellijn vals pos. 50% gebruikt amplifier <> datasheet

4x onvoldoende: storend cytoplasma, vals positieve cellijnen: ½ amplifier

Extra controlecoupe: 55%

Algemene score beduidend lager NQC 2019


Besluit: Suff. 79% Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers

Conc. AS:

Conclusies: niet mogelijk: te weinig gebruik

Optimale kalibratie protocol noodzakelijk:

6F11: NQC slaagpercentage 1/3 tot ½ afh. Van HIER type

EP1: NQC slaagpercentage 1/2

SP1: AS lijkt robuuster: NQC slaagpercentage 2/3 Ventana, 3/5 Omnis, 6/7 Leica

NQC: algemeen slaagpercentage : SP1 93%, EP1 87% en 6F11 71%

3 deelnemers: allen amp. = niet noodzakelijk



RTU AS:

Dako:

Autostainer: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat ; geen optimaal zelfs niet met linker te zwakke aankleuring in weefsel en cellijn = downgrade

Omnis: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat ; RT levert geen optiimaal resultaat (te zwakke aankleuring)

Ventana

optimaal mogelijk met datasheet of LDT

Gelijke protocols: wisselend resultaat (opt borderline: overkleuring)

Leica:

1 deelnemer: onvoldoende

Suff. Mogelijk mits aanpassing aan voorgesteld protocol / datasheet

NordiQC:

The Leica RTU system PA009/PA0151 (6F11) for BOND gave an overall pass rate of 62%.

Optimal results were only obtained by laboratory modified protocol settings using HIER in BERS2 (pH9) for 20 min. as opposed to performing HIER in BERS1 (pH6) for 20 min. as recommended by Leica.


Besluit: Suff. 79%

Aanbevolen controle: NordiQC

Cervix:

alle cellagen squameus epitheel pos.

stromale cellen matig/sterk pos. (muv endotheel en lymfatische cellen)

Tonsil: monitoring analytische sensitiviteit

Verspreide kiemcentrum macrofagen en squameus epitheel ++ = optimaal resultaat


Besluit: Overzicht resultaten NordiQC Belgian participants: 2016-2019

• Run B26 49 Belgische deelnemers:

10% conc. AS <> NordiQC global 17%

78% geslaagd <>NordiQC global 70%

16% optimaal resultaat: 7/8 SP1 RTU Ventana ; 1 EP1 conc. Dako platform

22% niet geslaagd (5 ‘poor result’: RTU: 4 Dako EP1 ; 1 Ventana SP1 met korte HIER)

EP1 clone :

50% geslaagd, 6% optimaal (1 deelnemer)

Borderline (Dako, Autostainer en Omnis): algemeen te zwak of FN ? gelijk protocol = optimaal ?

SP1 clone:

94% geslaagd, 23% optimaal

1 ‘poor’ (FN: veel te korte HIER) ; 1 borderline (zwak: te korte HIER)

22%



• Run B27 46 Belgische deelnemers:

6% conc. AS ( minder conc. Dan in run B26) <> NordiQC global 18%

89% geslaagd (+11%) <>NordiQC global 90%

48% optimaal resultaat (B26: 16%) : EP1 en SP1, alle Ventana- en Dako platformen <> 55% optimaal

11% niet geslaagd (1 ‘poor result’: Ventana SP1 met datasheet protocol)

EP1 clone :

89% geslaagd, 38% optimaal (B26: 50% geslaagd, 6% optimaal)

Borderline (Dako, Autostainer,2): algemeen te zwak, gelijke protocol = optimaal ??

SP1 clone:

94% geslaagd (idem B26) , 52% optimaal (>100% meer optimaal dan B26)

1 ‘poor’

11%

Protocol PR

n= 64 (excl. firma’s)

Conc.: n=3

Dako: mm clone PgR 1294: n=1

Leica Novocastra:

mm clone 16 (n=1)

Mm clone 16+SAN27 (n=1)

RTU: n=61

Dako:

mm clone PgR 1294 : n=7

Mm clone PgR 636: n=15

Roche/Cell Marque: rm clone 1E2 : n=38

Leica Novocastra: mm clone 16: n=1

Protocol PR

Conc. AS

PgR 1294 Dako

1/50 15’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis

16+SAN27 Leica

1/50 20’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis

16 Leica

BMK XT: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’

Protocol PR

RTU clone PgR 1294 (Dako)

Protocol:

Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 30’ , AS 10’ 43%

Allen Omnis

AS 10’-15’-20’

HIER pH9: 20’ – 30’

RTU clone PgR 636 (Dako)

Protocol: Manueel: 1: HIER pH9 30’ , AS 20’

Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 20’ , AS tijd voorgedefinieerd (20’?)

Allen Autostainer

AS 15’-20’ RT. 30% gebruikt kortere inc. tijd

+linker 15’: 57% (datasheet?)

HIER pH9: 10’ - 20’ - 30’

Protocol PR

RTU clone 16 (Leica)

Protocol:

Bond III: 15’ RT ; HIER pH9 20’

Datasheet 10/2016: HIER pH9 20’ , AS voorgedefinieerd

Protocol PR

RTU clone 1E2 (Roche/C.Marque)

Protocol:

Datasheet:

AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’

28% deelnemers

UView:

AS 12’ – 32’ (51% AS datasheet)

+/- 4’ tot 16’ amp bij 36°C (26%)

HIER CC1 8’ – 36’ - 64’ (59% ‘standard’ CC1)

iView:

AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’ ; geen amp. = datasheet goed, downgrade

Resultaat datasheet:

82% geslaagd ; optimaal maar downgrade ikv tegenkleuring

2/8 borderline: storende cytoplasma aankleuring en/of te zwak

Scoringscriteria PRAankleuringspatroon: nucleair

• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen

• Normale tonsil : geen kernaankleuring

• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens zwak tot matige aankleuring in meerderheid (75%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 5) : max. 1% aankleuring in tumorale cellen

Antistof PR

Core 4 sterk positief 90%

Core 3 zwak/matig positief 75%Cervix

Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

OK?

Antistof PR

Optimaal

Ventana 1E2 16’ ; CC1 64’ ; UV BMK Ultra

optimaal

Antistof PR

Core 4 sterk positief 90%

Core 3 zwak/matig positief 75%Cervix

Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

borderline

OK

Antistof PR

borderline

Ventana 1E2 32 ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

Cervix

aspecifiek

aspecifiek

Antistof PR

Core 3 zwak/matig positief 75%

Te zwakke tegenkleuringVentana 1E2 28’’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

Resultaatbespreking PR

Algemeen

* 1 deelnemer verkeerde AS toegepast

n=64* NQC 2018B26

n % suff % suff

optimaal 27 42%84%

66%85%

goed 27 42% 19%

borderline 6 9% 11%

onvoldoende 4 6% 4%


Opgesplitst per clone : conc.

* NordiQC: waarvan 63% optimaal

** NordiQC: geen optimaal


16

Leica / Novocastra

% suff

16+SAN27 Leica/

Novocastra

% suff PgR 1294 Dako

% suff

n=1 n=1 n=1

optimaal 0 - 1 - 1 -

goed 1 - 0 - 0 -

borderline 0 - 0 - 0 -

onvoldoende 0 - 0 - 0 -

Totaal suff - - -

NQC 2018 82%* 4/4 ** 90% ***


Opgesplitst per clone: RTU

* NordiQC: waarvan 62% optimaal** NordiQC: waarvan 66% optimaal


**** NordiQC: waarvan 72% optimaal

PgR1294 Dako

% suff

1E2 Ventana/ C. Marque

% suff

16 Leica

% suff

PgR 636 Dako

% suff.

n=7 n=38 n=1 n=15

optimaal 5 71% 8 21% 0 - 12 80%

goed 2 29% 21 55% 1 - 2 13%

borderline 0 0% 6 16% 0 - 0 0%

onvoldoende 0 0% 3 8% 0 - 1 7%

Totaal suff 100% 76% 1/1 93%

NQC 2018 89% * 83%** 100% *** 89% ****


Besluit: Suff. 84 %

Algemene score vergelijkbaar NQC 2019

AS:

Slechts 5% (n=3) conc. AS ; idem ER

38% Dako clone EP1 , 59% Ventana clone 1E2

Dako platformen: cf ER, meer spreiding in protocols (AS en HIER): geen invloed op resultaat

Dako clone presteert beter: 100% suff. <> 76% SP1

Ventana:

2/3 gebruikt datasheet HIER (60’)

½ gebruikt datasheet AS (16’)

44% te zwakke tegenkleuring (Ventana) = downgrade opt. goed

+amp. is geen garantie op optimaal resultaat voldoende lange HIER wel

Signaalversterker:

37% gebruikt signaalversterker 22% niet geslaagd (5/23)

Ventana: 1/3 : vals positief /vals negatief (allen kortere HIER)

2x borderline: kiemcentra vals pos. en/of 1 cellijn vals pos.

4x onvoldoende: cervix vals negatief ; vals positieve cellijnen



Conc. AS:

Conclusies: niet mogelijk: te weinig gebruik

NQC: algemeen slaagpercentage : clone 16 82%, beide Dako clones 90-95%

RTU AS:

Dako:

Autostainer en Omnis: robuuste antistoffen en test: AS tijd en pH geen invloed voor geslaagd resultaat

Ventana

optimaal mogelijk met datasheet of LDT

Gelijke protocols: wisselend resultaat met standaard protocol : 9 opt 1 borderline: overkleuring: kiemcentra vals +

Niet geslaagd: 5/9 gebruiken signaalversterker, maar optimaal mogelijk met amp.

Aankleuring kiermcentra: 13% ( cf NQC 36%)

An aberrant and false positive staining reaction was seen in 36% of the insufficient results and

was characterized by a weak distinct nuclear staining reaction of germinal centre B-cells in the

tonsil. The false positive staining reaction was only seen for the RTU format of rmAb clone 1E2

(Ventana). No single reason for this reaction was identified.


Besluit: Suff. 84%

Extra controlecoupe: 52%

Aanbevolen controle: NordiQC

Cervix: pos. controle (sensitiviteit)

Columnair epitheel, squameus epitheel en stromale cellen sterk pos.

endotheel en lymfocyten cellen negatief

minimale cytoplasmatische aankleuring (PgR 636 geeft sterkere aankleuring)

! Post-menopauzale cervix: lagere PR expressie in squameus epitheel mogelijk !

Tonsil: negatieve controle (cave Ventana clone)



• Run B26

B24 52 Belgische deelnemers:

10% conc. AS <> NordiQC global 27%

98% geslaagd <>NordiQC global 99%

81% optimaal resultaat <>NordiQC global 77% ; alle clones op alle platformen

1 niet geslaagd ( ‘borderline’: RTU: Ventana FP)



• Run B26

B26 49 Belgische deelnemers:

9% conc. AS (idem B24) <> NordiQC global 23%

85% geslaagd (-13%) <> NordiQC global 85%

72% optimaal resultaat (-10%) : beide Dako clones, Ventana clone, alle platformen (geen Leica meer)

15% niet geslaagd (1 ‘poor result’ FN: RTU: Dako clone op Ventana platform ; 4 borderline wegens FP (kiemcentra +) bij Ventana clone 1E2

Dako Omnis:

Downgrade goed obv te zwak

Resultaatbespreking besluit

sufficient 2019 NQC

ER 79 % 90 % 2019

PR 84 % 85 % 2018

HER2* 56 % 86% 2019

* Cave Dako conc. AS

EKE planning

Externe kwaliteitsevaluatie

EKE 2019/1

EKE 2019/2

EKE 2019/3

ER / PR / Her2

CD34, TTF-1 PR / HER2ER reassess

Rondzending coupes door Sciensano

11-15/02/2019

24-28/06/2019 16-20/09/2019

Beoordeling panel 03/2019 ??? 10/2019

Doorsturen individueelresultaat

05/2019 ??? 11/2019

Resultaatbespreking / symposium

Ma 27/05/2019

10/12/2019 10/12/2019

Doorsturen globaal rapport 06/2019 12/2019 12/2019

Resultaten EKE IHC 2019-1 · 3% Dako poly op Ventana platform Cave AS op ander platform XT UV...

Documents

Transcript of Resultaten EKE IHC 2019-1 · 3% Dako poly op Ventana platform Cave AS op ander platform XT UV...