Post on 06-Apr-2015
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Nachweis der PCR-Produkte durch
Agarose-Gelelektrophorese
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1. Vorbereiten der Gelkammer
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1. Vorbereiten der Gelkammer
1.1 1g Agarose werden mit 33 ml TAE-Puffer in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben!
1.2 Kochen Sie das Gemisch in der Mikrowelle kurz auf, schwenken Sie um und kochen Sie erneut kurz auf!1.3 Lassen Sie die Agarose-Lösung auf 55°C abkühlen (Handrückentest) und gießen Sie das Gel!
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1.4 Entfernen Sie nach dem Erstarren des Gels die Metallkeile!1.5 Überschichten Sie das Gel mit 270 ml TAE- Puffer (1 fach)!1.6 Ziehen Sie den Kamm!
1. Preparation of the Gel Chamber
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2. Probenvorbereitung für Agarose-Gelelektrophorese
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2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese
2.1 Entnehmen Sie Ihre 6 PCR-Tubes aus dem Thermocycler!
2.2 Setzen Sie Ihre PCR-Tubes in die Tube- adapter!
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2.3 Pipettieren Sie 5 µl Orange G Loading dye (LD) in jedes der 6 PCR-Tubes und durchmischen Sie durch Auf- und Abpipettieren!
2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese
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3. Befüllen der Geltaschen
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3. Befüllen der Geltaschen
3.1 Befüllen Sie die Geltaschen von links nach rechts mit:- 12 µl Molekulargewichts-Standard (MWR)- 20 µl –GVL Kontrolle mit PMM (1)- 20 µl –GVL Kontrolle mit GMM (2)- 20 µl LM-Probe (T) mit PMM (3)- 20 µl LM-Probe (T) mit GMM (4)- 20 µl +GVL-DNA mit PMM (5)- 20 µl +GVL-DNA mit GMM (6)
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4. Durchführen der Gelelektrophorese
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4. Durchführen der Gelelektrophorese
4.1 Verschließen Sie die Gelkammer und starten Sie die Elektrophorese bei 100 V! 4.2
Beenden Sie die Elektrophorese kurz bevor der rote Farbstoff Orange G das Gelende erreicht hat!
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5. Färben des Gels
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5. Färben des Gels
5.1 Öffnen Sie die Gelkammer und dekantieren Sie den TAE-Puffer ab!
(Wiederverwendung des Puffers istmöglich!)5.2 Überführen Sie das Gel in eine Färbe-schale und überschichten Sie es 5 Minuten mit 70 ml Färbelösung (100 fach)!
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5.3 Gießen Sie die Färbelösung ab und entfärben Sie das Gel 25 Minuten in der Färbeschale in lauwarmem Wasser!
5. Making DNA Fragments Visible
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6. Gelauswertung
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6. Evaluation
6.1 Identifizieren Sie die DNA-Banden im Gel anhand des Molekulargewichts-
Standards mit: 100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp, 1000 bp!
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6.2 Enthält Ihre untersuchte Lebensmittelprobe (T) einen Anteil einer gentechnischen Veränderung?6.3 Vergleichen Sie Ihre Ergebnisse mit den
DNA-Banden nach der PAGE!
6. Evaluation